230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

表面湿润张力试验用混合液（Wetting Tension Test Mixture）  ぬれ張力試験用混合液 （ ぬれ張力試験用）
表面湿润张力试验用混合液,用于“塑料薄膜及薄板表面湿润张力试验法”的试剂。
试验方法
用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，必需注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”；产生破裂时，判定为“不可润湿”。
ぬれ張力試験用混合液  Wetting Tension Test Mixture  详细产品信息如下：
（ ぬれ張力試験用）
（和光纯药Wako中国）  另还常年供应以下表面张力的型号：
235-01791                  No.22.6                  50ml
238-01801                  No.25.4                  50ml
235-01811                  No.27.3                  50ml
232-01821                  No.30.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
239-01831                  No.31.0                  50ml
236-01841                  No.32.0                  50ml
233-01851                  No.33.0                  50ml
237-01871                  No.35.0                  50ml
234-01881                  No.36.0                  50ml
231-01891                  No.37.0                  50ml
234-01901                  No.38.0                  50ml
231-01911                  No.39.0                  50ml
238-01921                  No.40.0                  50ml
235-01931                  No.41.0                  50ml
232-01941                  No.42.0                  50ml
239-01951                  No.43.0                  50ml
236-01961                  No.44.0                  50ml
239-01971                  No.45.0                  50ml
230-01981                  No.46.0                  50ml
237-01991                  No.48.0                  50ml
234-02001                  No.50.0                  50ml
231-02011                  No.52.0                  50ml
238-02021                  No.54.0                  50ml
235-02031                  No.56.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
232-02041                  No.58.0                  50ml
239-02051                  No.59.0                  50ml
236-02061                  No.60.0                  50ml
233-02071                  No.61.0                  50ml
230-02081                  No.62.0                  50ml
237-02091                  No.63.0                  50ml
230-02101                  No.64.0                  50ml
237-02111                  No.65.0                  50ml
234-02121                  No.67.0                  50ml
231-02131                  No.70.0                  50ml
238-02141                  No.73.0                  50ml

wako胡萝卜素标准品

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide
什么是Phos-tag™
Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit） 。
Phos-tag的基本结构：

 
 
 
 
 
 
1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl₂即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用

1、黄色粘性油状物质；
2、在4度可保存至少一年；
3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。
SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。
在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。
Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。
操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。
Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。
可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)     Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)   Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)
 
 
References  参考文献：

1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
   Proteomics, 5, 749-757 (2006).

1. “A single nucleotide polymorphism genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Anal. Biochem., 361, 294-298 (2007).

1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

1. “Separation of a phosphorylated-His protein using phosphate-affinity Polyacrylamide gel”, S. Yamada, H. Nalkamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro, Anal. Biochem., 360, 160-162 (2007).

1. “A mobility-shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike, Anal. Biochem., 378, 102-104 (2008).

1. “Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate-affinity SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike, Proteomics, 8, 2994-3003 (2008).

1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

1. “Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike, Electrophoresis, 30, 550-559 (2009).

1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

1. “Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

1. “Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶

SuperSep Phos-tag
SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。
◆SuperSep Phos-tag

Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。
分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。
◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理

◆在HighWire Search 上搜索到的论文数

◆运用
利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点
p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。

100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶
可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点
发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。
– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；
– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；
条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。
※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；
※ 条带L4是非磷酸化的p35。
【参考文献】
Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.
【结果提供】
理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永（Dr. T. Hosokawa）
首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市（Dr. S. Hisanaga）
检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段

我们可以确定在片段中含有目的激酶！
① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白
② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白
③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物
④ Phos-tag  SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性
【参考文献】
The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,
【结果提供】
高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）
香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇（Dr. I. Kameshita）
二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。

同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来
（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）
理化学研究所RCAI 小原收
◆备注
样品制备：
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。
转膜前处理：
另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；
该步骤可提高蛋白的转膜效率。
●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
●　转膜操作*。
* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。

◆质量控制
每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。
◆产品信息
用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号	品名	电泳仪	规格
198-17981	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm	Mini-PROTEAN? Tetra Cell (Bio-Rad Laboratories, Inc.)	5 块
195-17991	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm		5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号	品名	电泳仪	规格
192-18001	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm	XCell SureLock? Mini-Cell (Life Technologies, Inc.)	5 块
199-18011	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm		5 块

产品编号	产品名称	产品规格
193-16711	SuperSep Phos-tag?  (50 μmol/L), 10%, 13 well Phos-tag 13孔10%预制胶	5块
190-16721	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well Phos-tag 17孔10%预制胶	5块
195-16391	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well Phos-tag 13孔12.5%预制胶	5块
193-16571	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well Phos-tag 17孔12.5%预制胶	5块
193-16691	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well Phos-tag 13孔15%预制胶	5块
196-16701	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well Phos-tag 17孔15%预制胶	5块
197-16851	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well Phos-tag 13孔17.5%预制胶	5块
194-16861	SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well Phos-tag 17孔17.5%预制胶	5块
198-17981	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag? 预制胶，BioRad型	5块
195-17991	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm Phos-tag? 预制胶，BioRad型	5块
192-18001	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型	5块
199-18011	SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型	5块

Wako和光纯药  Charcoal 活性炭

上海金畔生物科技有限公司（www.jinpanbio.com）提供生命科学研究领域系列产品，包括生化试剂、诊断试剂、色谱标准品和实验仪器耗材。主营Lumiprobe Cy系列活性荧光染料；修饰性PEG（Laysan bio、NANOCS、Avanti等进口品牌PEG以及定制合成修饰性聚乙二醇、单分散小分量PEG）；Sigma、Amresco、TCI、MP bio生化试剂；WAKO日本和光纯药、日本关东化学Kanto试剂、日本三菱、日本柴田科学SIBATA；Megazyme食品分析检测试剂盒、日本共立理化学；Research diets、Harlan饲料、Bio-Serv、日本CLEA Japan品牌的动物饲料；Oxoid、Nissui日水、日本荣研、BD difco、Himedia品牌微生物培养基；免疫诊断试剂包括:Bethyl抗体；Biolegend流式抗体、Abcam、CST、Santa Cruz抗体；Roche、TOYOBO、NEB品牌的酶；中检所、TRC、药典USP、EP、Reagecon标准品；耗材和仪器包括Whatman、日本Advantec滤膜、Millipore品牌的各种滤膜、滤器和柱子填料等、Hampton蛋白结晶试剂耗材、老鼠软管灌胃针、动物毛发记号笔、Labnet、Wheaton瓶子、Bio-Rad伯乐、康宁Corning、Axygen、Falcon 、Eppendorf、Nunc、Nalgene、Nest品牌的培养皿、培养板、离心机、离心管、移液枪及枪头等实验室常用仪器耗材。
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