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wako NK细胞抑制剂

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Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)
本产品只能用于研究，不能用于人的治疗。
◆原理介绍
Anti Asialo GM1(Rabbit)抗血清可以减少大鼠或者小鼠来源的自然杀伤细胞（NK细胞）的活性，NK细胞是免疫监视细胞。该抗体可以与NK细胞发生特异性结合，从而抑制NK细胞非特异性杀伤靶细胞的活性。靶细胞包括肿瘤细胞、同种异体移植的器官、组织等。可运用于药物筛选，器官移植，自身免疫疾病等研究。
每个产品有具体的体内外的滴定数据。
◆注射方法
小鼠-静脉注射：10-50μL（推荐20μL）具体剂量由滴度和规格而定。第一次注射在4天内有效，因此两周内需要注射3-4次。
大鼠-静脉注射：50-250μL（小鼠剂量的4或5倍）具体剂量还须考虑大鼠的健康状况、体重和NK活性。
小鼠和大鼠-腹腔给药：同等剂量或多于静脉注射。
◆产品信息

 
制备：
 		 从牛脑组织里提纯的Asialo GM1与甲基化牛血清白蛋白和弗氏完全佐剂一起使用，可进行反复免疫。用含有磷酸缓冲盐水（ph7.2）的50%硫酸铵透析后，得到血清里的丙种球蛋白（Gammaglobulin）片段。
内容： 含有唾液酸抗体GM1的兔血清50%硫酸铵盐析分层物（含蛋白量约10mg/mL）。
提纯法： 50%的硫酸铵盐析后 ，用含有磷酸缓冲液的生理盐水透析，然后冻干。
特异性： 作用于小鼠和大鼠的自然杀伤细胞；小鼠单核细胞（是一种不含自然杀伤细胞、骨髓、胎儿肝细胞和裸鼠脾脏巨噬细胞的肝细胞）；小鼠胎儿胸腺细胞（12日龄；生存率不断降低直到没有出现新生小鼠）（备注：如果浓度高，也能作用于成熟的T淋巴细胞）
免疫球蛋白类型： IgG、IgA和IgM
重组： 建议用蒸馏水（1mL）。由于该产品是使用盐来进行冻干的，如果用其它溶剂如PBS或MEM，就能增加其盐浓度。
抗体滴度： 通过免疫凝聚实验得出结果，抗体滴度比例约1 : 1,000
保存方法： 存储在2~10℃下
包装规格： 1mL样瓶
形状： 干冻品

◆应用案例

适用的动物模型 运用
肿瘤动物模型 与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型内，研究抗肿瘤药物的作用机理。
肝纤维化动物模型 与治疗肝纤维化的药物混合后注入动物模型体内，研究抗肝纤维化药物的作用机理。
器官移植动物模型 器官移植后，会产生免疫排斥反应，机体内的免疫监视会清除”异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后使用的免疫抑制剂的作用机理
自身免疫疾病动物模型 研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型 抑制NK细胞的活性，从而有利于干细胞动物模型的建立。
糖尿病动物模型 研究炎症与糖尿病的关系。

NK细胞抑制剂——Anti Asialo GM1(Anti AsGM1)(兔源)
Anti Asialo GM1的抗血清可以与NK细胞（自然杀伤细胞）结合，抑制NK细胞非杀特异性杀伤靶细胞的活性。靶细胞包括肿瘤细胞，同种异体移植的器官、组织等。可用于药物筛选、器官移植、自身免疫疾病研究等。NK细胞属于天然免疫细胞，具有免疫监视功能。
特异性：与小鼠、大鼠的NK细胞，小鼠单核细胞（不含有NK细胞的肝脏细胞；骨髓；胎儿肝脏细胞；裸鼠巨噬细胞的脾细胞），胎儿T淋巴细胞（12天）
研究糖尿病的免疫治疗：
据报道，抗细胞凋亡细胞因子IL-15具有促进NK细胞和T细胞（包括调节性T细胞，Tregs）存活和激活上述两种细胞活性的功能。在患有糖尿病的NOD小鼠体内反复注射IL-15。如果每天一次，注射2周，既不抑制也不加速未处理NOD小鼠患糖尿病的情况。但是NK细胞活性丧失的NOD小鼠注射IL-15可以明显减少糖尿病的发病率和延迟糖尿病发病时间，但是NK细胞活性丧失不注射IL-15的小鼠依然病发糖尿病。在用IL-15处理，NK细胞活性丧失的NOD小鼠体内产生的保护效应与CD4+CD25+ Tregs免疫抑制活性增加有关。在该项实验中，用Anti AsGM1注射小鼠，抑制NK细胞活性，导致NOD小鼠NK细胞活性缺失。
摘自：Jinxing Xia et al., Clinica l Immunology.(2010) 134, 130–139
研究败血症中NK细胞的功能
NK细胞和NKT细胞都属于天然免疫系统，但在细菌引起的败血症中这两种细胞的作用是有争议。用Anti Asialo GM1处理小鼠，成为NK细胞活性抑制的小鼠；用CD1d单抗处理小鼠，成为NKT细胞活性抑制的小鼠；同时用同型对照单抗处理小鼠，作为阴性对照。之后这些小鼠感染肺炎链球菌。分析血清和组织样品中细菌的含量，细胞因子，脾细胞凋亡率、用流式鉴定细胞，同时也分析脾细胞miRNA的表达。结果发现NK细胞活性抑制的小鼠延长了存活率。一旦NKT细胞激活抑制，与其他细胞群相比，脾脏的NK (CD3−/NK1.1+)细胞数目增加。NKT细胞活性抑制导致小鼠体内的细菌含量升高，导致血清和脾细胞IFN-γ水平升高。抗CD1d处理小鼠的脾细胞miRNA分析显示miR-200C和miR-29a下调，miR-125a-5p上调。这些变化发生在NK细胞活性抑制后。NK细胞可能与肺炎球菌肺炎的死亡率有关。抑制NKT细胞的激活导致(CD3−/NK1.1+)细胞数目增加，IFN-γ水平升高，改变脾细胞miRNA表达。
摘自Eirini Christaki et al., Journal of Immunology Research, Volume 2015 (2015), Article ID 532717, 10 pages
研究肿瘤的免疫治疗
肿瘤的发展过程包括血管新生，肿瘤尺寸增大和肿瘤转移。使用CXCL14/BRAK (CXCL14) 转基因小鼠研究过度表达的CXC趋化因子配体14 (CXCL14) 在上述生物学现象中的作用。与野生型小鼠相比，转基因小鼠经AOM/DSS诱导的结肠血管新生的发病率显著低很多。肿瘤细胞注射到这些小鼠后，肿瘤尺寸发生变化。与野生型的相比，转基因小鼠肺中转移小瘤的数目明显少，
肿瘤的尺寸也明显变小。在注射肿瘤前后注射Anti Asialo GM1减少了CXCL14在肿瘤生长方面和肿瘤转移的抑制效应，表明激活的NK细胞在CXCL14介导的抑制肿瘤生长和转移期间起重要作用。CXCL14也表达在B16黑色素瘤细胞内表明NK细胞在肿瘤转移方面的重要性。而且转基因小鼠在注射肿瘤细胞后的存活率显著增长。这些转基因小鼠没有明显的不正常，预计肿瘤抑制/预防方面CXCL14起着重要作用。
摘自：Hata R et al.,Scientific Reports(2015) 5 : 9083 | DOI: 10.1038/srep09083
 

动物模型 运用
肿瘤动物模型 与抗肿瘤药物混合后注入肿瘤动物模型体内，研究抗肿瘤药物是否通过激活NK细胞活性达到杀伤肿瘤细胞的作用。
肝病动物模型 与治疗肝病的药物混合后注入动物模型体内，研究药物是否通过激活NK细胞活性达到治疗肝病的效果。
器官移植动物模型 器官移植后会发生免疫排斥反应，机体内的免疫监视系统会清除：异己“的细胞和器官。可用于研究器官移植后免疫抑制剂的作用机理。
自身免疫疾病动物模型 研究治疗自身免疫疾病药物的作用机理。
干细胞动物模型 移植NK细胞活性，有利于干细胞动物模型的建立。

产品列表

产品编号 产品名称 等级 规格
014-09801(986-10001) Anti asialo GM1 (Rabbit)          NK细胞抑制剂 for Immunochemistry 1mL

wako LabAssay系列试剂盒–游离脂肪酸定量检测试剂盒

发表于由

wako LabAssay系列试剂盒–游离脂肪酸定量检测试剂盒
WAKO LabAssay系列试剂盒
编号 名称 包装
6390192  LabAssay™ A/G（白蛋白与球蛋白比值检测试剂盒） 1000次
6590190  LabAssay™ Creatinine（肌氨酸酐定量检测试剂盒） 500次
6570198  LabAssay™ Glucose（葡萄糖定量检测试剂盒） 1000次
6360194  LabAssay™ NEFA（游离脂肪酸定量检测试剂盒） 750次
6380196  LabAssay™ Phospholipid（磷脂定量检测试剂盒） 1300次
6370190  LabAssay™ Triglyceride（甘油三酯定量检测试剂盒） 1000次
5860191  LabAssay™ ALP（碱性磷酸酶定量检测试剂盒） 900次
6580194 LabAssay™ Cholestero（胆固醇定量检测试剂盒） 1000次
6400192 LabAssay™ Uric Acid（尿酸定量检测试剂盒） 1300次
可用于人，大鼠以及小鼠血清样本的检测
（ 以上试剂盒仅为研究试剂，不可用于诊断或做其他用途。）
LabAssay™ NEFA 游离脂肪酸定量检测试剂盒
【摘要】
游离脂肪酸(NEFA)是脂肪细胞中的中性脂肪被分解后由血中被释放出来的物质，在血清中与白蛋白结合，被末梢组织搬运，成为末梢组织重要的能源来源。
检测游离脂肪酸的量，可用于调节由脂肪组织释放到肝脏的物质，有利于掌握类脂化合物代谢的动态。
【检测原理】
样品中的游离脂肪酸(NEFA)在辅酶A与(CoA)腺嘌呤核苷-5′-三磷酸二钠(ATP)的存在下，受酰基-CoA合成酶(ACS)作用，生成酰基-CoA、AMP及焦磷酸(PPi)。生成的酰基-CoA在酰基-CoA氧化酶(ACOD)的作用下被氧化，同时生成2,3-反式-烯酰-CoA及过氧化氢。生成的过氧化氢在过氧化物酶(POD)的作用下，与3-甲基-N-乙基-N- (β-羟乙基甲基)-苯胺(MEHA)及4-氨基安替比林发生定量性氧化缩合，生成青紫色色素。测量这个青紫色色素吸光值，即可计算出样品中的NEFA浓度。
【特点】
?以实验动物为对象的生物化学检测试剂
?用微孔板检测，可用少量样品一次检测多个样品
LabAssay TM NEFA [ACS?ACOD法]
在血中游离脂肪酸(NEFA:Non-Esterified Fatty Acid)，与白蛋白结合，被末梢组织搬运，成为末梢组织重要的能源来源。游离脂肪酸的浓度，可用于调节由脂肪组织释放到肝脏的物质，在末梢组织中的消耗。
本品可根据测量氧化缩合生成的青紫色色素的吸光值，检测样品中游离脂肪酸的量。
【特点】
?蒸馏水作为样品时，吸光值在0.07以下。
?检测已知浓度血清样品时，浓度为已知浓度±15%以内。
【检测波长】波长:550nm
【试剂盒组成】
显色剂A…10ml用×6瓶 ,
显色剂A溶解液…65ml×1瓶 ,
显色剂B…20ml用×6瓶,
显色剂B溶解液 …130ml×1瓶,
标准液(油酸 1mEq/l)…10ml×1瓶
【使用方法】
【试剂的配制】
显色试剂A:
1瓶显色剂A(10ml用)溶解于10ml显色剂A溶解液中，得到显色试剂A。
显色试剂B:
1瓶显色剂B(20ml用) 溶解于20ml显色剂B溶解液中，得到显色试剂B。
标准液:
附带的标准液可直接使用，也可经稀释作为标准系列使用。
【标准操作法】
向微孔板内添加4μl样品和80μl显色试剂A，充分混合，在37℃加热10分钟。加入160μl显色试剂B，在37℃加热10分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。
【检测波长】
550nm (进行双波长检测时，主波长为546nm,副波长为660nm)
LabAssay™ ALP Alkaline Phosphatase Assay Kit 碱性磷酸酶定量检测试剂盒
【摘要】
碱性磷酸酶的活性检测试剂盒。常用于检测培养的成骨细胞、实验动物血清和骨组织中的碱性磷酸酶活性。
碱性磷酸酶(ALP)广泛分布于肝脏、骨、小肠之中。特别在骨代谢研究领域方面被用作为骨形成指标之一。本品是用p–硝基苯磷酸作为底物的碱性磷酸酶检测试剂盒，利用微孔板，可进行多种样品的检测。
【检测原理】
样品在含有p-硝基苯磷酸的碳酸盐缓冲液(pH9.8)中反应，在样品中的碱性磷酸酶作用下，p-硝基苯磷酸分解为p-硝基酚和磷酸。生成的p-硝基酚为碱性，呈黄色。根据测量其405nm的吸光值，计算出样品中碱性磷酸酶的活性。
LabAssay TM ALP  [p-硝基苯磷酸基质法]
【性能】
检测范围：>0.06 mmol/L
标准曲线范围：0～0.5 mmol/L
再现性：C.V.<10%
【试剂盒组成】
底物———————20片（溶解时：p-硝基苯磷酸二钠 6.7mmol/L)
底物溶解液——-100ml×1瓶（2.0mmol/L氯化镁含有0.1mol/L碳酸盐缓冲液pH9.8)
反应终止液——-100ml×1瓶（0.2mol/L氢氧化钠溶液）
标准液—————10ml×1瓶（0.5mmol/L p-硝基酚溶液）
【试剂的配制】
1）底物缓冲液：1片底物溶解于5mL底物溶解液中。
2）反应终止液：直接使用。
3）系列稀释标准液：将标准液用蒸馏水依次稀释为0.5、0.25、0.125、0.0625 mmol/L等2倍率稀释液系列。
【标准操作法】
向96孔微孔板内添加100μl底物缓冲液和20μl样品，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，37℃孵育15分钟。
添加80μl反应终止液，在微孔板震荡器上充分振荡1分钟后，用酶标仪测量405nm处的吸光值。同样方法进行空白(蒸馏水)对照和标准品的检测。
【活性单位的定义】
在pH9.8，37℃情况下，1分钟内生成1nmol p-硝基酚所需的酶的活性为1个活力单位（U）。
活性（U/μl）= C/15 ×a
C：由标准曲线得到的OD值(A实验值减去A空白值)，计算p-硝基酚浓度(mmol/L=nmol/μl)      15：反应时间(min.)
a：样品的稀释倍数
当样品为成骨细胞时，使用本试剂盒前样本需要预处理
在48孔板上进行细胞培养后，除去培养基，用PBS冲洗感光板，各孔添加150μl 0.05%的曲拉通X，进行冻结→融化→冻结→融化操作。4℃，15,000rpm离心15分钟处理，将上清液移到新的辅助管，以此作为样品。
(注1）48孔板：培养时，一般不采用96孔板，多使用48孔板。
(注2) 曲拉通X的作用：溶解细胞膜，回收蛋白(细胞内含有ALP蛋白)的试剂。
(注3) 反复的冻结融化：原理不明，但这样做似乎可以提高ALP活性。
(注4) 也有不使用曲拉通X，用超声波降解法(超声波处理)对细胞造成物理性休克得到溶解产物的方法。
(注5) 曲拉通X的添加量：以150μL为例，孔中细胞约为20,000cell。
LabAssay™ Cholestero  胆固醇定量检测试剂盒
【摘要】
胆固醇是生物细胞膜的主要成分，是众多动物合成甾族化合物的前体物质。
本品是利用N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS)，通过酶浅蓝色显色反应，检测血清等样品中胆固醇量的试剂盒。与微孔板配套使用，可进行多样品检测。
【检测原理】
样品中的胆固醇酯类在胆固醇酯酶作用下，被分解为游离胆固醇和脂肪酸。在这里生成的游离胆固醇与既存的游离胆固醇类一起被胆固醇氧化酶氧化，产生过氧化氢。生成的过氧化氢，在过氧化物酶作用下，与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-二甲氧基苯胺钠(DAOS) 及4-氨基安替比林定量氧化缩合，产生浅蓝色色素。测量这个浅蓝色色素的吸光值，即可计算出样品中的胆固醇浓度。
LabAssay TM胆固醇 [胆固醇氧化酶、DAOS法]
【试剂盒组成】
缓冲液—————————–150ml×2瓶(MES缓冲液)
显色剂———————-150ml用×2瓶
(溶解时：胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶，DAOS，4-氨基安替比林，抗坏血酸氧化酶)
标准液—————————10ml用×1瓶
【性能】
灵敏度
蒸馏水作为样品时，吸光值在0.11以下。
特定浓度的标准液(200mg/dl) 作为样品时，吸光值为0.13～0.65。
?特异性
可检测1,000mg/dl的总胆固醇浓度。
【检测波长】
主波长：600nm, 副波长：700nm
【试剂的配制】
显色剂：将1瓶显色剂(150mL用)溶解于1瓶缓冲液(150mL)中。
配制后，以2～10℃保存，可保存3星期。
【标准操作法】
向微孔板内添加2μl样品和300μl显色剂，充分混合，在37℃孵育5分钟。以此作为对照空白值，测量样品及标准液的吸光值。
LabAssay™ Uric Acid  尿酸定量检测试剂盒
【摘要】
尿酸是嘌呤衍生物的代谢产物，血清中的尿酸是核蛋白的分解产物和食物性物质，核蛋白代谢异常和肾脏机能障碍与尿酸量的变化存在联系。本品是利用尿酸酶与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS)，进行酶促反应生成青紫色色素，根据生成物质的吸光值检测血清中、尿中的尿酸量的试剂盒。与微孔板配套使用，可进行多样品检测。
【检测原理】
尿酸酶氧化样品中的尿酸，产生过氧化氢。生成的过氧化氢，在过氧化物酶的作用下，与N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3,5-甲基苯胺钠(TOOS) 及4-氨基安替比林定量氧化缩合，产生青紫色色素。测量这个青紫色色素的吸光值，计算出样品的尿酸浓度。
LabAssay TM尿酸 [尿酸酶、TOOS法]
与微孔板配套使用，可用于小鼠血清中尿酸的检测。
【特点】
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.15以下。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±15％以内。
【试剂盒组成】
缓冲液—————-100ml×4瓶(磷酸缓冲液(pH6.4),TOOS)
显色剂————100ml用×4瓶
(溶解时：尿酸酶，过氧化物酶，4-氨基安替比林，脂蛋白脂肪酶，抗坏血酸氧化酶)
尿酸标准液————10ml×1瓶
【试剂的配制】
显色剂：将1瓶显色剂(100mL用)溶解于1瓶缓冲液(100mL)中。
配制后，2～10℃保存，可保存3星期。
【标准操作法】
向微孔板内添加5μl样品和300μl显色剂，充分混合，37℃孵育5分钟。以此作为空白对照值，测量样品及标准液的吸光值。
【检测波长】
主波长555nm(副波长700nm)
【性能】
蒸馏水测量时的吸光值<0.15。
特定浓度标准液(尿酸10mg/dL)测量时的吸光值为0.04～0.26。
LabAssay™ A/G   白蛋白与球蛋白比值检测试剂盒
【摘要】
白蛋白作为易溶于水的纯蛋白，广泛分布在生物体内。在动物血清中, 白蛋白占总蛋白的大部分，作用是维持渗透压，与难溶于水的物质(脂肪酸和胆红素酸等)结合，负责这些物质的运输。在血清蛋白质中含量仅次于白蛋白的是球蛋白，其作用是负责甾类激素等的运输。白蛋白和球蛋白占血清蛋白的大部分。通常情况下认为白蛋白/球蛋白的比例保持在一定的范围内。不过，在肝脏和肾脏机能发生变化或处于某种疾病状态中，白蛋白/球蛋白的比例会发生变化。
【检测原理】
白蛋白（BCG法)
样品受显色剂作用，样品中的白蛋白与溴甲酚绿(BCG)结合，产生浅蓝色色素。测量这个浅蓝色色素的吸光值，计算样品中白蛋白的浓度。
总蛋白质(双缩脲法)
样品受总蛋白显色剂的作用，样品中的蛋白与铜离子产生紫红色络合物。测量紫红色络合物的吸光值，计算样品中总蛋白浓度。
球蛋白：总蛋白浓度减去白蛋白浓度，即可计算出样品中球蛋白的浓度。白蛋白浓度和球蛋白浓度的比称为白蛋白/球蛋白比(A/G比)。
*当样品是高脂肪血清时，请使用白蛋白修正缓冲液。
*高脂肪血清修正法
1) 在白蛋白测量中，当样品为高浓度乳浊血清时，请根据下列方法测量空白样品值，从样品的吸光值扣除进行修正。 “样品空白值测量法” 1μl血清加上250μl白蛋白修正缓冲液，充分混合后，作为对照品测量水在630nm处的吸光值。
2) 在总蛋白测量中，当样品为高浓度乳浊血清时，请根据下列方法测量空白样品值，从样品的吸光值扣除进行修正。 “样体空白值测量法”5μl血清加上250μl生理食盐水，充分混合后，作为对照品测量水在540nm处的吸光值。
LabAssay TMA/G [BCG法、双缩脲法]
本品是包含总蛋白显色剂（基于双缩脲法）、白蛋白显色剂（基于BCG法）、标准血清的检测试剂盒。可同时检测总蛋白及白蛋白浓度，计算出白蛋白/球蛋白比。
【特点】
〈白蛋白〉
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.120～0.220。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±12％以内。
〈总蛋白〉
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.050～0.100。
测量已知浓度的血清时，结果在已知浓度的±10%以内。
【试剂盒组成】
白蛋白显色剂————-250ml×1瓶
总蛋白显色剂———- –250ml×1瓶
标准血清———————3ml用×1瓶
白蛋白修正缓冲液——–25ml×1瓶
LabAssay™ Creatinine 肌氨酸酐定量检测试剂盒
【摘要】
肌氨酸酐是肌肉中肌酸与ATP发生反应后所生成的代谢产物。
肌氨酸酐大部分在肾脏循环时被过滤，不再被吸收而被排出体外。肾功能障碍和肌肉中能量代谢变化时，样品中肌氨酸酐的量发生变化。
【检测原理】
向样品中加入除蛋白剂，离心分离，回收上清。上清中加入苦味酸及氢氧化钠溶液，在碱性条件下，肌氨酸酐和苦味酸发生缩合，产生橙红色的缩合物。测量这个橙红色缩合物的吸光值，计算样品中的肌氨酸酐浓度。
上海西宝生物科技有限公司 杨先生 13512172575 13788987962
LabAssay (TM) 肌氨酸酐[Jaffe′法]研究试剂
肌氨酸酐是由存在于肌肉、神经内的磷酸肌酸直接产生，或由肌酸脱水产生，经肾毛细血管球过滤后被排除体外的代谢产物。利用Jaffe法，在碱性条件下，通过检测苦味酸与肌氨酸酐反应生成的橙红色色素检测样品中肌氨酸酐含量。
【特点】
蒸馏水作为样品时，吸光值为0.010～0.020。
使用已知浓度的血清进行检测时，在已知浓度的±10%以内。
【试剂盒组成】
除蛋白剂…150ml×1瓶
苦味酸…50ml×1瓶
0.75mol/L 氢氧化钠溶液…50ml×1瓶
标准液 (肌氨酸酐10mg/dl)…15ml×1瓶
【试剂的制备】
除蛋白剂?苦味酸?0.75mol/L 氢氧化钠溶液:全部都可以直接使用
标准液: 附带的标准液可直接使用，或稀释后作为系列标准液。
【标准操作法】
将300μl除蛋白剂和50μl样品在样品管中混合，室温放置10分钟，离心分离(2,500rpm以上反应10分钟)，回收上清。
向酶标板的孔中加入100μl上清，再加入50μl苦味酸和50μl 0.75mol/L氢氧化钠溶液，在25～30℃反应20分钟。
作为空白对照，检测样品及标准液的吸光值。
【检测波长】 520nm

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于由

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产　　地： 日本
商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）
免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）
◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？
如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。
备注：
1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-
       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？
收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

WAKO（和光纯药）介绍

特色

发表于由

       WAKO（和光纯药）代理商上海金畔生物，欢迎广大新老客户咨询。

      Wako日本和光纯药工业株式会社是全球第一流的试剂制造厂商，成立八十多年一直致力于高质量的试剂及药业的生产与开发，所生产的各类产品均获得 ISO9002 认可。试剂涵盖了全面的生物化学、分析化学、有机化学、环境分析、食品·医药品分析、高纯度及认证标准品等多类，超过六万种试剂。
日本和光纯药工业株式会社(WAKO)生产的各种试剂，主要包括以下几大类：
一、生物化学试剂 1 遗传因子 2 免疫研究试剂 3 血凝、纤溶试剂 4 组织化学研究试剂 5 酶、蛋白质、肽 6 脂类 7 二十碳醇类 8 类固醇、甾体、激素 9 单糖、寡糖、多糖、环化糊精类 10 神经作用物质 11 生理作用物质 12 毒素 13 抗生素、抑制剂 14 膜蛋白分析试剂 15 缓冲剂（good`s buffers) 16 细胞研究试剂 17 细胞培养试剂（1）动物组织培养试剂（2）植物组织培养试剂（3）微生物培养试剂 18 氨基酸分析试剂 19 电泳试剂 20 其它生化试剂

二、分析试剂 1 层析试剂（1）高效液相色谱试剂（2）萃取试剂（3）柱层析试剂（4）薄层层析试剂（5）气相色谱试剂 2 原子吸收分析试剂 3 吸光分析试剂 4 紫外分析试剂 5 红外分析试剂 6 化学发光分析试剂 7 荧光分析试剂 8 LC/MS试剂 9 NMR 试剂 10 ESR 试剂 11 辐射测定试剂 12 元素分析试剂 13 滴定用试剂 14 指示剂 15 标准缓冲液 16 PH 标准试剂 17 电极试剂 18 容量分析试剂 19 精密分析试剂 20 超微量分析试剂 21 高纯试剂

三、环境分析用试剂 1 环境激素分析试剂 2 农药残留检测试剂 3 二恶英测定试剂 4 水质分析试剂 5 大气污染物质测定试剂 6 食品、药品分析试剂 7 LAL test 仪器、试剂 8 变异原（突变诱导）检测试剂 9 细胞繁殖、毒性研究试剂 10 家庭用品安全检测试剂 11 合成洗涤剂检测试剂（衣料用） 12 石油及制品检测试剂

四、合成用试剂 1 核酸合成试剂 2 多肽合成试剂 3 有机合成溶剂 4 Grignard 格氏反应试剂 5 氨基化试剂 6 重氮烷基化试剂 7 卤化试剂 8 金属触媒 9 光学活性物质 10 光学拆分试剂 11 半合成催化剂 12 绿色化学关联试剂（微胶囊化催化剂、树脂基质两性分子磷化钯催化剂）

五、材料研究用试剂 1 高纯度化合物 2 功能性新材料

六、实验室用清洗剂 1 实验室用洗涤剂 2 其它洗涤剂

七、临床诊断试剂
官方网站： http://www.wako-chem.co.jp
备 货 期： 现货或4周
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wako胶体滴定试剂(聚乙烯硫酸钾-PVSK)

发表于由

wako胶体滴定试剂(聚乙烯硫酸钾-PVSK)

         胶体滴定(colloid titration) 是一种简单、快速、准确的测定高分子聚合物电荷的方法。Potassium Polyvinyl Sulfate(聚乙烯硫酸钾,PVSK)于水中可形成带负电的胶体颗粒，Glycol Chitosan(GC)或Methyl Glycol Chitosan(MGC)在酸性水溶液中带正电，利用电性中和的原理，负电胶体颗粒的会与正电胶体颗粒反应达到电性中和。在适当的pH条件下，此两种胶体可完全反应形成不溶性沉淀物。使用甲苯胺蓝(Toluidine Blue,TB)为指示剂，与正电性胶体混合时，两者之间没有反应，TB维持蓝色；当悬浮液中胶体带负电时，TB会吸附于胶体表面而现紫色。
滴定时，正电胶体可直接以PVSK溶液为滴定液，TB为指示剂进行滴定；对于负电荷胶体，可以直接以Glycol Chitosan 或MGC滴定，或加入已知的过量的正电胶体，再以PVSK溶液对剩余的正电胶体进行反滴定。

2345截图20160703173103

货号

品名

包装

164-21655

Potassium Polyvinyl Sulfate Titration Solution (N/400) 聚乙烯硫酸钾(PVSK)滴定液

500ml

现货供应

162-03071

Potassium Polyvinyl Sulfate聚乙烯硫酸钾(PVSK)

10g

 阳离子试剂：

货号

品名

包装

072-05045

Glycol Chitosan Titration Solution (N/200)

乙二醇壳聚糖滴定液

500ml

072-01581

Glycol Chitosan

乙二醇壳聚糖

10g

137-14655

Methyl Glycol Chitosan Titration Solution(N/200)

甲基乙二醇壳聚糖滴定液

500ml

134-04731

Methyl Glycol Chitosan

甲基乙二醇壳聚糖

10g

161-14695

0.0025N Poly(diallyldimethylammonium Chloride) Solution

聚二甲基二烯丙基氯化铵滴定液

500ml

 指示液：

货号

品名

包装

205-05811

Toluidine Blue Indicator Solution甲苯胺蓝指示液

50ml

 PVSK标定试剂：

货号

品名

包装

080-06681

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

10g

086-06683

Cetylpridinium chloride monohydrate氯化十六烷基吡啶

100g

wako 聚乙二醇 PEG

发表于由

wako 聚乙二醇 PEG

品牌 产品编号 产品名称 等级 规格 CAS No.
(生产商编号)
Wako 167-24945 Polyethylene Glycol 4,000,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 4,000,000
Wako 167-22941 Polyethylene Glycol 6,000 for Molecular Biology 1kg 25322-68-3
聚乙二醇 6,000
Wako 162-18525 Polyethylene Glycol 500,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 500,000
Wako 639-09971 Poly(ethylene glycol) 1000 – 1g –
聚乙二醇1000
Wako 169-09125 Polyethylene Glycol 6,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 6000
Wako 160-18521 Polyethylene Glycol 500,000 Wako 1st Grade 100g 25322-68-3
聚乙二醇 500,000
Wako 164-13801 Polyethylene Glycol 2,000,000 Wako 1st Grade 100g 25322-68-3
聚乙二醇 2,000,000
Wako 168-09075 Polyethylene Glycol 600 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 600
Wako 167-09045 Polyethylene Glycol 200 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 200
Wako 165-09105 Polyethylene Glycol 2,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 2000
Wako 165-09085 Polyethylene Glycol 1,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 1000
Wako 164-19881 Polyoxyethylene(8) Octylphenyl Ether for Biochemistry 100mL 9036-19-5
聚乙二醇叔辛基苯基醚
Wako 164-09055 Polyethylene Glycol 300 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 300
Wako 162-09115 Polyethylene Glycol 4,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 4000
Wako 162-09095 Polyethylene Glycol 1,540 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 1540
Wako 161-09065 Polyethylene Glycol 400 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 400
Wako 636-09981 Poly(ethylene glycol) 1500 – 1g –
聚乙二醇1500
Wako 632-09961 Poly(ethylene glycol) 400 – 1g –
聚乙二醇400
Wako 169-22945 Polyethylene Glycol 6,000 for Molecular Biology 500g 25322-68-3
聚乙二醇 6,000
Wako 168-11285 Polyethylene Glycol 20,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 20,000
Wako 166-13805 Polyethylene Glycol 2,000,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 2,000,000
Wako 165-24941 Polyethylene Glycol 500,000 Wako 1st Grade 500g 25322-68-3
聚乙二醇 500,000

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

发表于由

230-01861 50ml 物体表面湿润张力测试液体No.34.0

表面湿润张力试验用混合液（Wetting Tension Test Mixture）  ぬれ張力試験用混合液 （ ぬれ張力試験用）
表面湿润张力试验用混合液,用于“塑料薄膜及薄板表面湿润张力试验法”的试剂。
试验方法
用含有试剂的棉棒在试验材料（薄膜）上横向涂抹一次，必需注意涂上的混合液的量会极大影响试验的正确度。涂上试剂后2秒，判定液膜中央部分的状态。当液膜没有产生破裂时，判定为“可润湿”；产生破裂时，判定为“不可润湿”。
ぬれ張力試験用混合液  Wetting Tension Test Mixture  详细产品信息如下：
（ ぬれ張力試験用）
（和光纯药Wako中国）  另还常年供应以下表面张力的型号：
235-01791                  No.22.6                  50ml
238-01801                  No.25.4                  50ml
235-01811                  No.27.3                  50ml
232-01821                  No.30.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
239-01831                  No.31.0                  50ml
236-01841                  No.32.0                  50ml
233-01851                  No.33.0                  50ml
237-01871                  No.35.0                  50ml
234-01881                  No.36.0                  50ml
231-01891                  No.37.0                  50ml
234-01901                  No.38.0                  50ml
231-01911                  No.39.0                  50ml
238-01921                  No.40.0                  50ml
235-01931                  No.41.0                  50ml
232-01941                  No.42.0                  50ml
239-01951                  No.43.0                  50ml
236-01961                  No.44.0                  50ml
239-01971                  No.45.0                  50ml
230-01981                  No.46.0                  50ml
237-01991                  No.48.0                  50ml
234-02001                  No.50.0                  50ml
231-02011                  No.52.0                  50ml
238-02021                  No.54.0                  50ml
235-02031                  No.56.0                  50ml
和光纯药WAKO：Wetting Tension Test Mixture No.34.0  物体表面湿润张力测试液体No.34.0   230-01861  50ml
232-02041                  No.58.0                  50ml
239-02051                  No.59.0                  50ml
236-02061                  No.60.0                  50ml
233-02071                  No.61.0                  50ml
230-02081                  No.62.0                  50ml
237-02091                  No.63.0                  50ml
230-02101                  No.64.0                  50ml
237-02111                  No.65.0                  50ml
234-02121                  No.67.0                  50ml
231-02131                  No.70.0                  50ml
238-02141                  No.73.0                  50ml

wako胡萝卜素标准品

发表于由

wako胡萝卜素标准品

品牌 产品编号 产品名称 等级 规格 零售价(RMB) CAS No.
(生产商编号)
Wako 209-17281 Thapsigargin for Cellbiology 1 mg 1350 67526-95-8
毒胡萝卜素
Wako 205-17283 Thapsigargin for Cellbiology 5 mg 5390 67526-95-8
毒胡萝卜素
Wako 035-05531 β-Carotene Wako Special Grade 1g 400 7235-40-7
β-胡萝卜素
Wako 031-05533 β-Carotene Wako Special Grade 10g 860 7235-40-7
β-胡萝卜素
Biomol BML-PE180-0005 Thapsigargin – 5mg 3840 67526-95-8
毒胡萝卜素
Alexis ALX-460-004-G005 β-Carotene – 5g 810 7235-40-7
β-胡萝卜素
AdipoGen AG-CN2-0003-M010 Thapsigargin (high purity) – 10 mg 5530 67526-95-8
毒胡萝卜素
AdipoGen AG-CN2-0003-M005 Thapsigargin (high purity) – 5 mg 3220 67526-95-8
毒胡萝卜素
AdipoGen AG-CN2-0003-M001 Thapsigargin (high purity) – 1 mg 810 67526-95-8
毒胡萝卜素
Wako 035-17981 α-Carotene Standard for High Performance
Liquid Chromatography		 10mg 2860 7488-99-5
α-胡萝卜素标准品
Wako 032-17991 β-Carotene Standard for High Performance
Liquid Chromatography		 10mg 920 7235-40-7
β-胡萝卜素标准品

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法

发表于由

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法
英  文  名： Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
产　　地： 日本
商　　家： Wako（和光纯药工业株式会社）
wao Phos-tag™实验设计

◆  研究领域
磷酸化蛋白和磷酸化多肽的研究
◆  Phos-tagTM 的简介
Phos-tagTM（Phosphate-binding tag）是由日本广岛大学的Kinoshita等研制的磷酸化蛋白蛋白捕获分子。Phos-tagTM 螯合Zn2+或者Mn2+等重金属离子后形成一个半封闭的空间。在pH值6~8的中性条件下，该空间恰好能容纳一个磷酸基团，使得螯合有金属离子的Phos-tagTM 分子能够与磷酸基团牢固而稳定的结合。可以特异性结合所有氨基酸的磷酸化基团，广泛运用于细菌，酵母，昆虫等物种研究。
◆  Phos-tagTM 系列产品
利用螯合有金属离子的Phos-tagTM 可以特异性结合磷酸化基团的特点，研发了Phos-tagTM 系列产品，运用于常见的蛋白实验，比如SDS-PAGE，免疫印迹，亲和层析，质谱等。

Phos-tagTM 系列产品 产品描述 用途 具体运用实验
Phos-tagTM   Acrylamide Phos-tagTM 与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合 分离磷酸化和非磷酸化蛋白。SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。 SDS-PAGE（单一蛋白）
免疫印迹（多种蛋白混合液，例如细胞裂解液，组织均浆液，体外激酶反应体系。使用目的蛋白的非磷酸化抗体作为一抗）
Phos-tagTM Biotin Phos-tagTM 与生物素（Biotin）结合 可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。 免疫印迹（正常SDS-PAGE）
Phos-tagTM  Agarose Phos-tagTM 与琼脂糖（Agarose）结合 利用磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Agarose特异性结合，纯化磷酸化蛋白。 亲和层析法
Phos-tagTM Mass Analytical kit Phos-tagTM 与不同荷质比的Zn结合 检测微量磷酸化蛋白和磷酸化多肽。 质谱实验

备注：除Phos-tagTM Mass Analytical kit之外，其他Phos-tagTM 系列产品都需要配置金属离子溶液。

Phos-tag™ 系列磷酸化蛋白新方法！
Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot检测（Phos-tag™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag™ Mass Analytical Kit）。
◆Phos-tag™ 的基本结构
◆特点
与-2价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子
在pH 5-8的生理环境下生成稳定的复合物
◆原理
◆应用
样品类型: 纯化蛋白、组织均浆液、组织裂解液、体外酶反应液
样品来源物种: 无物种特异性，可用于人、植物（拟南芥 水稻 棉花等）、动物（斑马鱼 灵长类等）、微生物(酵母 细菌 真菌等） 昆虫（果蝇 蚕等）
分离蛋白大小: 磷酸化蛋白的分离范围在十几到220kDa，文献报道可分离350kDa的磷酸化蛋白
准备的试剂和仪器: 10mM的MnCl2溶液，固体产品需要溶解于甲醇中,其余与常规SDS-PAGE相同
各包装可做实验次数: 2mg包装20μM可制约20块胶，50μM约8块；10mg包装20μM可制100块胶，50μM约40块
凝胶染色: 考马斯亮蓝、银染、荧光染色、阴性染色
◆相关产品

产品名称 用　　途
　Phos-tag™ Acrylamide 　分离: SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白
　SuperSep Phos-tag™ 　分离: 预制胶中含有50μM Phos-tag™ Acrylamide
　Phos-tag™ Biotin 　检测: 代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体
　Phos-tag™ Agarose 　纯化: 通用柱层析，纯化磷酸化蛋白
　Phos-tag™ Mass
Analytical Kit		 　分析: 用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析，提高磷酸化分子的检测灵敏度

 
Phos-tag Acrylamide（丙烯酰胺）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格 Phos-tag在配制胶中的浓度
20μM 50μM 100μM
304-93526 AAL-107S1 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3mL 约10块 约4块 约2块
300-93523 AAL-107M Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 约20块 约8块 约4块
304-93521 AAL-107 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 约100块 约40块 约20块

 
SuperSep Phos-tag™ （丙烯酰胺预制胶）

产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag™ 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep™ Phos-tag™ (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag™ 预制胶，Life Technologies型		 5块

Phos-tag™ Biotin（生物素）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
301-93531 BTL-104 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg
308-97201 BTL-111S1 Phos-tag Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml

Phos-tag™ Agarose（琼脂糖）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
302-93561 AG-501 Phos-tag™ Agarose 0.5ml
308-93563 AG-503 Phos-tag™ Agarose 3ml

Phos-tag™ Mass Analytical Kit（质谱分析试剂盒）

产品编号 生产商编号 产品名称 规格
305-93551 MS-101KIT Phos-tag™ Mass Analytical Kit 1 set

SuperSep Phos-tag™ 预制胶即开即用！
phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。
SuperSep Phos-tag™ 是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phos-tag™ Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中性凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的结果条带也很整齐。

 板大小  100 x 100 x 3 (mm)
 凝胶大小  90 x 85 x 1 (mm)
 孔数  13  17
 孔容积  30 μL  25 μL
 Phos-tag™浓度  50 μmol/L
 丙烯酰胺浓度  10%、12.5%、15% 和17%
 ZnCl2浓度  100 μmol/L

 
◆优点、特色
·即开即用
·预制胶使用安全
·可长期保存（6个月）
·操作与普通SDS-PAGE一样
◆案例、应用
电泳条件：30 mA（恒电流）, 60分钟
样品：5 ug/Lane α-酪蛋白（含磷酸化与去磷酸化α-酪蛋白）（产品编号038-23221）
普通SDS-PAGE只观察到一条条带，而Phos-tag™ SDS-PAGE里可见α-酪蛋白磷酸化和α-酪蛋白去磷酸化两条
条带。
样品缓冲液：Sample Buffer Solution (2ME+) (X4) (产品编号191-13272)
电泳缓冲液：SDS-PAGE 缓冲液, pH8.5(产品编号192-16801)
染色：QUICK CBB PLUS(产品编号174-00553)
P10%(左) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 10%, 13well
P15%(中) : SuperSep Phos-tag™ (50 μmol/L), 15%, 13well
A15%(右) : SuperSep™Ace, 15%, 13well （不含Phos-tag™）
◆相关产品

产品编号 产品名称 规　　格
 058-07681  EasySeparator <配套电泳槽>  1 套
 230-02461  Wide-View Prestained Protein Size Marker III (11~245kDa)  500 μL (200 次)
 038-23221  α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated  1 mg

◆具体实例

1. 体外激酶反应，激酶和底物都带有标签，反应后亲和层析法纯化获得激酶和底物，如何检测底物的磷酸化情况？
如果底物和激酶分子量差别大，通过正常的SDS-PAGE能够区分，建议使用Phos-tagTM Biotin。将激酶和底物进行免疫印迹实验，用Phos-tagTM Biotin作为抗体检测底物的磷酸化基团（需记录底物的条带位置）。可通过剥离（strip）方式剥离Phos-tagTM Biotin，用底物的非磷酸化抗体进一步验证其位置。
如果底物和激酶分子量差别不大，可进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验,然后转膜，用底物的非磷酸化抗体检测（没有使用激酶的抗体，所以检测不到激酶的带）。在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE中磷酸化和非磷酸化底物发生分离，用底物的非磷酸化抗体可以检测所有底物。免疫印迹实验后，观察所有的条带，非磷酸化底物由于没有和Mn2+-Phos-tagTM Acrylamide结合，所以迁移速度较快，磷酸化底物则迁移速度变慢。通过迁移率的变化，分析磷酸化底物的含量。
备注：
1） Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中，建议使用α-Casein, from Bovine Milk, Dephosphorylated（038-
       23221），该产品中含有磷酸化和非磷酸化的α-Casein，确保试剂和实验条件能够分离磷酸化蛋白。
2）如果没有非磷酸化底物，可使用Alkaline Phosphatase(for Biochemistry)（018-10693）对底物进行去磷酸
     化反应。
2. 如何检测EGF（表皮生长因子）刺激后细胞内MAPK的磷酸化水平？
收集EGF刺激的细胞，制备细胞裂解液作为样品。进行正常的SDS-PAGE实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验，转膜后用MAPK的非磷酸化抗体作为一抗进行检测（检测所有的MAPK，包括磷酸化和非磷酸化）。正常SDS-PAGE实验中，磷酸化的MAPK和非磷酸化MAPK没有分离，而在Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验中磷酸化MAPK和非磷酸胡MAPK发生分离，所以转膜后，用MAPK抗体检测，可以看到分离的条带。比较正常的SDS-PAGE用MAPK抗体的免疫印迹实验和Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE用MAOK抗体的免疫印迹实验，多出来的条带就是磷酸化的MAPK。
备注：该实验的前提是EGF刺激后细胞内的MAPK发生磷酸化，细胞内包含磷酸化和非磷酸化的MAPK。如果刺激后细
          胞内不含有磷酸化的MAPK，则无法用Phos-tagTM Acrylamide分离磷酸化和非磷酸化MAPK。
3. 研究蛋白相互作用的实验中，构建带有不同标签的2种融合蛋白，共转染细胞，在细胞内发生磷酸化反应。通过不同标
    签的亲和层析柱获得纯化的蛋白，是否可用Phos-tagTM Agarose纯化，进行后续免疫共沉淀实验（Co-IP）实验？
Phos-tagTM Agarose纯化磷酸化蛋白，采用高盐的洗脱方式，没有使用界面活性剂、还原剂、酸或者碱洗脱，蛋白不发生变性，可进行后续的Co-IP实验。
4. 检测的样品中含有两种磷酸化的蛋白，分子量很接近，如何使用Phos-tagTM 产品检测磷酸化？
如果样品中两种磷酸化蛋白的分子量很接近，通过正常的SDS-PAGE实验无法区分，建议使用Phos-tagTMAcrylamide。进行Mn2+-Phos-tagTM SDS-PAGE实验后用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测。
也可以使用Phos-tagTM Biotin。进行正常SDS-PAGE实验后，先用两种蛋白的非磷酸化抗体进行检测，剥离（strip）后用Phos-tagTM Biotin。如果磷酸化蛋白量少的　话，剥离（strip）会去除一些蛋白，可能会影响检测的效果。
5. 使用Phos-tagTM Mass Analytical kit，样品中如果含有磷酸缓冲液是否有影响？
该试剂盒检测磷酸化蛋白和多肽的灵敏度较高，样品中含有的磷酸缓冲液会影响磷酸化蛋白与Phos-tagTM 结合。

wako磷酸化蛋白电泳试剂- Phos-tag (TM) Acrylamide

发表于由

磷酸化蛋白电泳试剂——wako Phos-tag (TM) Acrylamide
什么是Phos-tag™
Phos-tag ™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子，结合特异性与氨基酸的种类和序列无关，无放射性，无需特意制备磷酸化抗体。它可用于磷酸化蛋白的分离（Phos-tag™ Acrylamide）、Western Blot 检测（Phos-tag ™ Biotin）、蛋白纯化 （Phos-tag ™ Agarose）及质谱分析MALDI-TOF/MS （Phos-tag ™ Mass Analytical Kit） 。
Phos-tag的基本结构：

 
 
 
 
 
 
1. Phos-tag™ Acrylamide

Phos-tag™ Acrylamide SDS-PAGE可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™ Acrylamide和MnCl2即可进行实验（制胶过程中添加，如需详细说明请联系我们）。

特点
# 非放射性元素，非荧光物质
# 磷酸化蛋白亚型可以在同一电泳道分离出多条带
# 操作简便，与常规SDS-PAGE蛋白电泳相似
# Phos-tag™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
# Phos-tag™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫组化、质谱等
# 性质稳定，溶于蒸馏水后可以稳定保存至少3个月
# 磷酸化和非磷酸化蛋白可以同时被分离检测
# 不同位点磷酸化修饰以及磷酸化程度不同的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来

原理

应用


1、黄色粘性油状物质；
2、在4度可保存至少一年；
3、Phos-tagTM与丙烯酰胺（Acrylamide，SDS-PAGE分离胶主要成分)结合分离磷酸化和非磷酸化蛋白。
SDS-PAGE分离胶制备中添加金属离子（Zn2+或者Mn2+）和Phos-tagTM Acrylamide。
在蛋白电泳过程中，磷酸化基团与金属离子螯合的Phos-tagTM Acrylamide发生特异性结合，导致磷酸化蛋白的迁移速度变慢。
Phos-tag® Acrylamide可根据迁移率不同，区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白。无放射性、非化学物质标记。不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来。
操作过程与普通SDS-PAGE相类似。Phos-tagTM的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
适用于免疫印迹、质谱分析等后续工作。可识别磷酸化和非磷酸化蛋白。
Phos-tagTM母液可稳定保存至少3个月。
可检测出具有不同磷酸基团数目的蛋白。无需特意制备磷酸化抗体。

产品编号 产品名称 规格 原价
304-93526 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution 0.3ml 2670
300-93523 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 2mg 4450
304-93521 Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 10mg 10680

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)     Wako Cat. #304-93521 (10 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)

Phos-tag Acrylamide (AAL-107)   Wako Cat. #300-93523 (2 mg)]⇒ Protocol(点击进入下载)
 
 
References  参考文献：

  1. “Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complex”, E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike, Dalton Trans., 21, 1189-1193 (2004).

 

  1. “Phosphate-binding tag, a new tool to visualize phosphorylated proteins”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike, Mol. Cell.
    Proteomics    , 5, 749-757 (2006).

 

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  1. “Label-free kinase profiling using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis”, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike, Mol. Cell. Proteomics, 6, 356-366 (2007).

 

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  1. “FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathway”, M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata, Nature Struct. Mol. Biol., 15, 1138-1146 (2008).

 

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  1. “Phosphate-affinity Gel Electrophoresis Using a Phos-tag Molecule for Phosphoproteome Study”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Current Proteomics, 6, 104-121 (2009).

 

  1. “Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike, Proteomics, 9, 4098-101 (2009).

 

  1. “Separation and detection of large phosphoproteins by using Phos-tag SDS-PAGE”, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike, Nature Protocols, 4, 1513-21 (2009).

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶

发表于由

wako 193-16711-SuperSep Phos-tag™ 预制胶（蛋白磷酸化研究）

蛋白磷酸化研究的预制胶
新品速递图wako.jpg
SuperSep Phos-tag
SuperSep Phos-tag是研究蛋白磷酸化的方法，无需特异性磷酸化抗体或者同位素标记。
◆SuperSep Phos-tag
blob.png
Phos-tag?是一种预制胶，预先加入了50 μmol/L的Phostag? Acrylamide，打开包装即可直接使用。预制胶中含有锌作为金属离子，在中心凝胶缓冲液中保存稳定性很好，得到的带条结果也很整齐。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白作为不同条带分离。
分离后，胶可用于考马斯亮蓝染色，免疫印迹和质谱实验。
◆Phos-tag SDS-PAGE 的原理
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◆在HighWire Search 上搜索到的论文数
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◆运用
利用p35的丙氨酸突变体确定Cdk5 激活p35的磷酸化位点
p35常见的磷酸化位点是Ser8和Thr138。但是Ser8和Thr138位点往往会发生丙氨酸突变，产生3种突变体（Ser8突变体：S8A，Thr138突变体：T138A，Ser8和Thr138双突变体：2A）。这3种突变体、野生型p35、Cdk5和没有激酶活性的Cdk5都来源于COS-7细胞。这些细胞裂解液用Phos-tag? SDS-PAGE和Western blotting 进行检测（检测抗体：p35抗体）。
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100 μM Phos-tag ? 丙烯酰胺, 7.5% 聚丙烯酰胺凝胶
可明确磷酸化位点和条带迁移率的关系！
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道5（条带M1）：p35在Cdk5的作用下发生了磷酸化；
– 泳道1（条带L2和L4）和泳道3（条带L2和L4）：在无激酶活性Cdk5的作用下，大约有一半p35蛋白在Thr138位点
发生磷酸化，同样在138位发生突变的p35蛋白亦是如此。
– 泳道5 （条带M1）和泳道6（条带L3和L4）：Ser8和Thr138是主要的磷酸化位点；
– 泳道5（条带M1）、泳道7（条带L1和L2）和泳道8（条带M2）：条带M1是Ser8和Thr138都发生磷酸化的条带；
条带M2是只有Ser8磷酸化的条带；条带L1和L2是只有Thr138磷酸化的条带。
※ 条带L1和L3中的X 是不确定哪个位点发生磷酸化的条带；
※ 条带L4是非磷酸化的p35。
【参考文献】
Quantitative Measurement of in Vivo Phosphorylation States of Cdk5 Activator p35 by Phos-tag ? SDS-PAGE. T. Hosokawa, T. Saito, A. Asada, K. Fukunaga, and S. Hisanaga,Mol. Cell. Proteomics, Jun 2010;9: 1133 – 1143.
【结果提供】
理化学研究所 脑科学综合研究中心 回路功能研究核心 记忆功能研究团队 细川智永（Dr. T. Hosokawa）
首都大学东京 理工学研究科 生命科学专业 神经分子功能研究室 久永真市（Dr. S. Hisanaga）
检测含有Dnmt1磷酸化激酶的片段
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我们可以确定在片段中含有目的激酶！
① 采用亲和色谱法从鼠脑提取液中纯化GST-Dnmt1（1-290）结合蛋白
② 使用0.3 M 和1 M NaCl 的DNA 纤维素柱洗脱得到目的蛋白
③ GST-Dnmt1（1-290）作为体外激酶实验的反应底物
④ Phos-tag  SDS-PAGE 用于Western blotting，确定迁移条带中每个片段的激酶活性
【参考文献】
The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/epsilon. Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita, Biochem. J.,
【结果提供】
高知大学 综合研究中心 生命、功能物质部门 实验实习机器设施 杉山康宪（Dr. Y. Sugiyama）
香川大学 农学部 应用生物科学科 动物功能生化学研究室 龟下勇（Dr. I. Kameshita）
二维电泳中的应用：分析hnRNP K磷酸化异构体
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ? SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
blob.png
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来
（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
? Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics, Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）
理化学研究所RCAI 小原收
◆备注
样品制备：
Phos-tag SDS-PAGE对于蛋白样品中的杂质非常敏感，尤其是螯合剂，钒酸，无机盐，表面活性剂这类物质。
强烈建议在Phos-tag SDS-PAGE之前通过TCA沉淀或渗析法降低杂质含量。
转膜前处理：
另一个必须的步骤是在转膜前，用EDTA去除凝胶中的金属离子（Mn2+或者Zn2+）；
该步骤可提高蛋白的转膜效率。
●　分别准备10 mmol/L 含EDTA和不含EDTA 两种1x transfer buffer。
●　将凝胶浸泡在含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，至少20分钟，温和摇晃。更换新缓冲液，重复3次。
●　将凝胶浸泡在不含10 mmol/L EDTA的1x transfer buffer，10分钟，温和摇晃。
●　转膜操作*。
* 建议用湿法转膜，以提高转膜效率。
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◆质量控制
每一批SuperSep Phos-tag?，出厂前均根据其产品规格进行测试，以保证可分离磷酸化和非磷酸化蛋白，以及他们的分离成都在正常参数内。
◆产品信息
用于Bio-Rad伯乐电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 Mini-PROTEAN?
Tetra Cell
(Bio-Rad Laboratories, Inc.)		 5 块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
83×100×3.9mm		 5 块

用于Life Technologies电泳仪

货号 品名 电泳仪 规格
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 XCell SureLock?
Mini-Cell
(Life Technologies, Inc.)
 		 5 块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well,
100×100×6.6mm		 5 块
产品编号 产品名称 产品规格
193-16711 SuperSep Phos-tag?  (50 μmol/L), 10%, 13 well
Phos-tag 13孔10%预制胶		 5块
190-16721 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 10%, 17 well
Phos-tag 17孔10%预制胶		 5块
195-16391 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 13 well
Phos-tag 13孔12.5%预制胶		 5块
193-16571 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 12.5%, 17 well
Phos-tag 17孔12.5%预制胶		 5块
193-16691 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 13 well
Phos-tag 13孔15%预制胶		 5块
196-16701 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 15%, 17 well
Phos-tag 17孔15%预制胶		 5块
197-16851 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 13 well
Phos-tag 13孔17.5%预制胶		 5块
194-16861 SuperSep Phos-tag? (50 μmol/L), 17.5%, 17 well
Phos-tag 17孔17.5%预制胶		 5块
198-17981 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
195-17991 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 83×100×3.9mm
Phos-tag? 预制胶，BioRad型		 5块
192-18001 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 7.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块
199-18011 SuperSep? Phos-tag? (50μmol/l), 12.5%, 17well, 100×100×6.6mm
Phos-tag? 预制胶，Life Technologies型		 5块

wako日立氨基酸分析仪配套试剂

发表于由

日立氨基酸分析仪配套试剂解决方案

日立氨基酸分析仪在国内应用较为普遍，有不少人在选择配套试剂时存在各种问题，难以取舍。上海金畔生物提供日立氨基酸分析仪配套试剂-缓冲液、显色液的解决方案。
详细信息
20140827FR4XP4JV82

日立氨基酸分析仪配套试剂
       日立氨基酸分析仪在国内应用较为普遍，国内使用的型号主要为L-8500型，L-8500A型，L-8800型，L-8900型等多种型号，采用柱后衍生、用茚三酮显色液作为衍生试剂的离子交换色谱法，配套缓冲液作为洗脱试剂的工作方式。有不少人在选择配套试剂时存在各种问题，难以取舍。希望以下有关如何选择日立氨基酸分析仪配套试剂的一些小窍门能对您有所帮助。
配套试剂的构成
       日立(Hitachi)本身并不生产试剂，其仪器的配套试剂都是由日本的两家大型化学试剂生产商(和光WAKO和三菱MCI)为其生产。不论是什么型号的配套试剂，基本都分3部分：
2014082702H28DX0BP
 上海生物提供日立氨基酸分析仪配套试剂–缓冲液、显色液。
货号
品名
包装
608-07461 MCI Buffer L-8500-PH Kit
包含：PH-11L*2, PH-21L*1, PH-31L*1, PH-41L*2, PH-RG1L*1		 1KIT
605-07471 MCI Buffer L-8500-PF Kit
包含：PF-11L*2, PF-21L*1, PF-31L*1, PF-41L*2, PF-RG1L*1		 1KIT
632-07401 MCI Buffer L-8900 PFS Kit
包含：PFS-1 1L*2, PFS-2 1L*2, PFS-3 1L*1, PFS-4 1L*1, PFS-RG 1L*1		 1KIT
299-70501 Ninhydrin Coloring Solution Kit For HITACHI
日立氨基酸分析仪配套茚三酮显色液（L-8500,L-8900均适用）		 1L*2
013-08391 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H
氨基酸混合标准溶液, H型		 5ml
015-14461 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2
氨基酸混合标准溶液, AN-2型		 5ml
016-08641 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B
氨基酸混合标准溶液, B型		 5ml
wako日历氨基酸分析仪配套试剂

wako日历氨基酸分析仪配套试剂


 
缓冲液
  缓冲液是氨基酸分析的重要试剂之一，虽然主要成分是柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钠等常见有机试剂，但对于试剂的纯度，配置有一定要求。试剂不当，轻则影响试验结果，重者造成仪器异常，甚至损伤。原装配套的缓冲液和显色液在试剂纯度，稳定性上都有保证，且省去了配置试剂的时间，可以大大提供测定准确的和工作效率。
  日立前期推出的包括835型，L-8500型，L-8500A型，L-8800型氨基酸分析仪配套的缓冲液都分PH和PF系列，适用于不同的样本和检测目的。L-8900型可以使用L-8500型的配套试剂，但是如果希望具有高吞吐能力，则需要使用L-8900型专用的PFS系列。
  • PH系列： 适用蛋白质水解产物分析
  • PF系列： 适用生物液体分析
  • PFS系列： 适用生物液体分析，相比PF具有高吞吐能力
 显色液
  日立氨基酸分析仪配套的茚三酮显色液（Ninhydrin Coloring Solution Kit），适合L-8500，L-8800和L-8900等多种型号日立氨基酸分析仪。
L-8500 L-8900
PH系列缓冲液 √ √
PF系列缓冲液 √ √
PFS系列缓冲液 √
茚三酮显色液 √ √ √ √ √
生物液体 蛋白水解液 生物液体 蛋白水解液 高吞吐*
茚三酮显色剂+缓冲液套装
如何选择合适的专用配套试剂
（1）符合下列条件1，适合使用以下配套试剂：
  • 仪器是L-8500型，L-8500A型，L-8800型
  • 检测样本为蛋白质水解产物
608-07461 MCI Buffer L-8500-PH Kit
(包含：PH-1 1L*2, PH-2 1L*1, PH-3 1L*1, PH-4 1L*2, PH-RG 1L*1)		 1KIT
634-12471 MCI Buffer L-8500-PH-1 1L×2
604-07463 1L×10
608-07466 MCI Buffer L-8500-PH-2 1L×10
631-12481 1L×2
638-12491 MCI Buffer L-8500-PH-3 1L×2
606-07462 1L×10
631-12501 MCI Buffer L-8500-PH-4 1L×2
602-07464 1L×10
638-12511 MCI Buffer L-8500-PH-RG 1L×2
600-07465 1L×10
299-70501 NINHYDRIN COLORING SOLUTION KIT FOR HITACHI FOR 2L
（2）符合下列条件2，适合使用以下配套试剂：
  • 仪器是L-8500型，L-8500A型，L-8800型
  • 检测样本为生物液体
605-07471 MCI Buffer L-8500-PF Kit
包含：PF-1 1L*2, PF-2 1L*1, PF-3 1L*1, PF-4 1L*2, PF-RG 1L*1		 1 kit
601-07473 MCI Buffer L-8500-PF-1 1L×10
639-12421 1L×2
607-07475 MCI Buffer L-8500-PF-2 1L×10
636-12431 1L×2
633-12441 MCI Buffer L-8500-PF-3 1L×2
605-07476 1L×10
630-12451 MCI Buffer L-8500-PF-4 1L×2
609-07474 1L×10
603-07472 MCI Buffer L-8500-PF-RG 1L×10
637-12461 1L×2
299-70501 NINHYDRIN COLORING SOLUTION KIT FOR HITACHI FOR 2L
 
（3）符合下列条件3，适合使用PF系列缓冲液 + 日立氨基酸分析仪配套茚三酮显色液
  • 仪器是L-8900型
  • 不需要高吞吐能力
  • 检测样本为生物液体
（4）符合下列条件4，适合使用PH系列缓冲液 + 日立氨基酸分析仪配套茚三酮显色液
  • 仪器是L-8900型
  • 不需要高吞吐能力
  • 检测样本为蛋白质水解产物
（5）符合下列条件5，适合使用以下配套试剂：
  • 仪器是L-8900型
  • 高吞吐能力
632-07401/PFS-KIT MCI Buffer L-8500-PF Kit
包含：PFS-1 1L*2、PFS-2 1L*2、PFS-3 1L*1、PFS-4 1L*1、PFS-RG 1L*1		 1 kit
639-07411/PFS-RG MCI Buffer L-8900-PFS-1 1L×10
636-07421/PFS-4 MCI Buffer L-8900-PFS-2 1L×10
633-07431/PFS-3 MCI Buffer L-8900-PFS-3 1L×10
630-07441/PFS-2 MCI Buffer L-8900-PFS-4 1L×10
637-07451/PFS-1 MCI Buffer L-8900-PFS-RG 1L×10
299-70501 NINHYDRIN COLORING SOLUTION KIT FOR HITACHI FOR 2L

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Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺

发表于由

Phos-tag(TM) Acrylamide Phos-tag丙烯酰胺
货号：300-93523; 304-93521; 304-93526
包装：2mg;10mg;0.3ml
英文名：Phos-tag Acrylamide
品牌：Wako
使用Phos-tag(TM) SDS-PAGE和Phos-tag Acrylamide分离磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白。

Phos-tag™ 丙烯酰胺 Phos-tag™ Acrylamide
使用Phos-tag™ 进行磷酸化蛋白质的迁移率测定
– 使用丙烯酰胺标记的Phos-tag™ 进行磷酸蛋白亲和电泳层析
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag<sup>™</sup> Acrylamide
Phos-tag™是由广岛大学高分子科学系开发的一种中性pH环境(生理pH)下的新型磷酸结合标记。Phos-tag™ SDS-PAGE这种电泳方法可以同时分析磷酸化蛋白异构体和配对二价锰的非磷酸化蛋白，是一种使用Pho-tag™琼脂糖用于分离，纯化和富集磷酸化蛋白质的全新方法。该方法只需在常规的SDS-PAGE胶中添加Phos-tag™Acrylamide （Phos-tag™ 丙烯酰胺）和锌离子或者锰离子即可实验。
Phos-tag™磷酸化亲和电泳原理
Phos-tag<sup>™</sup>磷酸化亲和电泳原理
 Phos-tag  丙烯酰胺
Phos-tagTM SDS-PAGE 特点：
■ 不含放射性元素，非荧光物质
■ 不同位点磷酸化修饰的蛋白在同一泳道中因迁移率不同而被分离开来
■ 操作过程与常规 SDS-PAGE相类似
■ Phos-tag ™ 的结合特异性与氨基酸种类、序列无关
■ Phos-tag ™ SDS-PAGE实验后，可进行常规的免疫印迹或者质谱实验，也可进行 2 维电泳
■ 可区分磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白
■ Phos-tag ™ 母液可稳定保存至少 3 个月
Phos-tag ™应用
Phos-tag Acrylamide - 上海金畔生物,专业的Phos-tag产品供应商
Phos-tag™ 丙烯酰胺 Phos-tag™ Acrylamide 相关产品
货号
厂商编号
产品名称
规格
304-93526
AAL-107S1
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液
0.3 ml （约0.9 mg）
300-93523
AAL-107M
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107
2 mg
304-93521
AAL-107
10 mg
Phos-tag™ Acrylamide在配胶中的使用浓度
货号
产品名称
使用浓度
20uM
50uM
100uM
304-93526
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107 5mM Aqueous Solution
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107 5mM水溶液
约10块
约4块
约2块
300-93523
Phos-tag™ Acrylamide AAL-107
Phos-tag™ 丙烯酰胺 AAL-107
约20块
约8块
约4块
304-93521
约100块
约40块
约20块

wako Phos-tag™ Acrylamide丙烯酰胺

Phos-tag™ Acrylamide
SDS-PAGE分离不同磷酸化水平的蛋白！
在不使用放射性同位素的情况下，利用Phos-tag™ SDS-PAGE即可分离不同条带中的磷酸化和非磷酸化蛋白。分离后的凝胶可用于Western blotting和质谱分析等后续实验。
Phos-tag™ SDS-PAGE操作简单，只需在常规SDS-PAGE胶中加入Phos-tag™ Acrylamide 和Mn2+或者Zn2+即可进行实验。在电泳过程中，磷酸化蛋白的磷酸基团与Phos-tag™中的二价金属离子相结合，降低其迁移速度，从而可区分磷酸化与非磷酸化蛋白。
上海金畔生物科技有限公司
服务热线:18301939375   QQ：3258089810    3259632176
Email:  info@jinpanbio.com
◆原理
◆优点、特色

  • 采用Phos-tag™ SDS-PAGE可轻松分离磷酸化蛋白

无任何放射性元素及化学标记！

  • 可检测不同磷酸化水平的磷酸化蛋白

无需任何磷酸化抗体！

  • 适用于内源性蛋白的磷酸化分析！

◆案例、应用
【使用Phos-tag™ SDS-PAGE的磷酸化/非磷酸化蛋白比较】
我推荐使用Phos-tag ™ ——东京大学研究院医学研究科 小川觉之
Phos-tag ™ 是专为研究磷酸化蛋白而新开发出来的试剂。此产品使用方便，不但可用于体外实验，还能定量分析体内蛋白的磷酸化水平。Phos-tag ™ SDS-PAGE 可用于常规电泳实验，无需购买特殊设备，性价比高。传统蛋白磷酸化的研究需要特异的磷酸化抗体、RI 等其它试剂，操作复杂，花费大，且放射性元素会有安全隐患，而Phos-tag ™ 的出现恰恰可以弥补这些缺点，为磷酸化蛋白研究提供新的方向。
磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白利用Phos-tag ™ SDS-PAGE 的分离效果图
Lane 1 为非磷酸化蛋白，Lane 2-5 为磷酸化蛋白，各蛋白因磷酸化状态不同而条带迁移率也有所不同。
磷酸化/ 非磷酸化蛋白的数量比、磷酸化程度、磷酸化蛋白的丰度等都可根据条带迁移和条带浓度求得。
【资料提供】
日本东京大学研究生院医学系研究科
【二维电泳中的应用：分析hnRNP K 磷酸化异构体】
小鼠巨噬细胞J774.1 经LPS 刺激后，裂解细胞，经过免疫沉淀法分离得到hnRNP K。在二维电泳中，一维是IPG 胶，二维是Phos-tag ™ SDS-PAGE，可分离hnRNP K 的异构体。利用质谱仪，可以确认不同的点代表不同的亚型或修饰蛋白。
二维电泳
同一个等电点的位置上，不同位点发生磷酸化都可以被区分开来（例: spots 6 vs. 8 and spots 4 vs. 7）
【参考文献】
Characterization of multiple alternative forms of heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K by phosphate-affinity electrophoresis. Y. Kimura, K. Nagata, N Suzuki, R. Yokoyama, Y. Yamanaka, H. Kitamura, H. Hirano, and O. Ohara, Proteomics , Nov 2010; 10(21): 3884-95.
【结果提供】
横滨市立大学 生命纳米系统科学研究科 生物体超分子系统科学专业 木村弥生（Dr. Y. Kimura）、平野久（Dr. H. Hirano）理化学研究所RCAI 小原收
【EGF 刺激前后MAPK 磷酸化水平的变化】
常规SDS-PAGE 和Phos-tagTM SDS-PAGE 后迚行克疫印迹实验分析EGF 刺激的A431 细胞中MAPK 磷酸化水平。
摘自Kinoshita-Kikuta, E. et al., Mol.Cell. Proteomics. (2007)6: 356.

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级 产品价格
304-93526  Phos-tag Acrylamide AAL-107
5mM Aqueous Solution Phos-tag 丙烯酰胺5mM水溶液		 0.3mL 蛋白研究 –
300-93523  Phos-tag Acrylamide AAL-107
Phos-tag 丙烯酰胺		 2mg 蛋白研究 –
304-93521  Phos-tag Acrylamide AAL-107
Phos-tag 丙烯酰胺		 10mg 蛋白研究 –
134-15302 Manganese(II) Chloride Tetrahydrate氯化锰四水合物 25g for Molecular Biology –

 

Wako 169-09125 Polyethylene Glycol 6,000

发表于由

Wako 169-09125 Polyethylene Glycol 6,000

Wako 169-09125  Polyethylene Glycol 6,000  25322-68-3   现货
【产品名称】Polyethylene Glycol 6,000
【制造商】Wako Pure Chemical Industries, Ltd.
【销售商代码】169-09125
【规格】500g
上海金畔生物科技有限公司（www.jinpanbio.com）提供生命科学研究领域系列产品，包括生化试剂、诊断试剂、色谱标准品和实验仪器耗材。主营Lumiprobe Cy系列活性荧光染料；Sigma、Amresco、MP bio生化试剂；Laysan bio、NANOCS、Avanti进口品牌的修饰性PEG（修饰性聚乙二醇）；中检所、TRC、药典USP、EP、Reagecon、WAKO品牌食品、农残、环境、水质等分析检测标准品；Megazyme食品分析检测试剂盒、日本关东化学Kanto试剂、Reseach diets品牌的动物饲料；免疫诊断试剂包括:Bethyl抗体、Biolegend流式抗体、Roche、TOYOBO、NEB品牌的酶；BD difco、OXOID、NISSUI日水、Himedia品牌微生物培养基；耗材和仪器包括Whatman、Millipore品牌的各种滤膜、滤器和柱子填料等、Hampton蛋白结晶试剂耗材、老鼠软管灌胃针、动物毛发记号笔、Labnet、Bio-Rad伯乐、康宁Corning、Axygen、Falcon、Eppendorf、Nunc、Nalgene、Nest品牌的培养皿、培养板、离心机、离心管、移液枪及枪头等实验室常用仪器耗材。
服务热线:18301939375   QQ;3259632176

Wako(和光纯药)标准品 氨基酸分析用标准品

发表于由

Wako(和光纯药)标准品 氨基酸分析用标准品

货号      名称                                       规格

167-08761 PTH-DL-Valine Standard            100mg
160-08991 PTH-DL-Tryptophan Standard    100mg
162-08691 PTH-L-Tyrosine Standard            100mg
167-09001 PTH-delta-threonine Standard     100mg
166-08971 PTH-DL-Threonine Standard        100mg
169-08961 PTH-DL-Serine Standard           100mg
160-08751 PTH-L-Proline Standard             100mg
163-08741 PTH-L-Phenylalanine Standard 100mg
166-08731 PTH-DL-Norvaline Standard         100mg
169-08721 PTH-DL-Norleucine Standard        100mg
161-08801 PTH-DL-Methionine Standard 100mg
161-08781 PTH-L-Lysine Standard               100mg
165-08681 PTH-L-Leucine Standard            100mg
164-08771 PTH-DL-Isoleucine Standard        100mg
168-08791 PTH-L-Histidine Hydrochloride Standard?PTH-L-组氨酸盐酸盐标准品 100mg
168-08671 PTH-glycine Standard                 100mg
165-08701 PTH-L-Glutamine Standard        100mg
166-08851 PTH-L-Glutamic Acid Standard   100mg
169-13591 PTH-S-Carboxymethylcysteine Standard PTH-S-羧甲基半胱氨酸标准品 100mg
164-09011 PTH-L-Cysteic Acid Potassium Salt Standard PTH-L-磺基丙氨酸钾盐标准品 100mg 168-08811 PTH-L-Citrulline Standard              100mg
162-08711 PTH-L-aspartic Acid Standard       100mg
163-08981 PTH-L-Arginine Hydrochloride Standard PTH-L-精氨酸盐酸盐标准品 100mg
165-08821 PTH-DL-2-aminoisobutyric Acid Standard PTH-DL-2-氨基异丁酸标准品 100mg
162-08831 PTH-DL-2-aminobutyric Acid Standard PTH-DL-2-氨基丁酸标准品 100mg
163-12271 PTH-amino Acids Mixture Standard PTH-氨基酸混合物标准品 100mg
161-08661 PTH-DL-α-alanine Standard         100mg
016-14131 L-Asparagine Standard Solution L-天冬酰胺标准溶液    1mLx5

013-08391  Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 氨基酸混合物标准溶液, H型 5ml

019-08393 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 氨基酸混合物标准溶液, H型 1mLx5A

016-08641 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 氨基酸混合物标准溶液, B型 5ml

012-08643 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 氨基酸混合物标准溶液, B型 1mLx5A

015-14461 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2
氨基酸混合物标准溶液, AN-2型     5ml
011-14463 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2
氨基酸混合物标准溶液, AN-2型  1mLx5A

货号 品名 规格 价格RMB

011-14463 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 1 mL x5A

015-14461 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type AN-2 5ml

简介

用于氨基酸自动分析仪或高效液相色谱(HPLC)进行氨基酸成分分析或测序。

The product contains 12 kinds of compounds in addition to 14 common acidic and neutral amino acids.

Contents

组成(溶于约 0.1 mol/L盐酸溶液)：

o-Phosphoserine (1.25 micro moles/mL) o-磷酸丝氨酸

Taurine (1.25) 牛磺酸

o-Phosphoethanolamine (1.25) O-磷酸乙酰胺

Urea (50.0) 尿素

L-Aspartic Acid (2.50) L -天门冬氨酸

Hydroxy-L-proline (2.50) 羟基L -脯氨酸

L-Threonine (2.50) L-苏氨酸

L-Serine (2.50) L-丝氨酸

L-Glutamic Acid (2.50) L -谷氨酸

Sarcosine (6.25) 肌氨酸

L-alpha-Aminoadipic Acid (1.25) L-α-氨基己二酸

L-Proline (2.50) L -脯氨酸

Glycine (2.50) 甘氨酸

L-Alanine (2.50) L -丙氨酸

L-Citrulline (2.50) L -瓜氨酸

DL-alpha-Amino-n-butyric Acid (1.25) DL-α-氨基-N-丁酸

L-Valine (2.50) L -缬氨酸

L-Cystine (2.50) L -胱氨酸

L-Methionine (2.50) L -蛋氨酸

L-Cystathionine (1.25) L型胱硫醚

L-Isoleucine (2.50) L -异亮氨酸

L-Leucin (2.50) L -亮氨酸

L-Tyrosine (2.50) L -酪氨酸

L-Phenylalanine (2.50) L -苯丙氨酸

beta-Alanine (2.50) β -丙氨酸

DL-beta-Aminoisobutyric Acid (2.50) DL型β-aminoisobutyric酸

货号 品名 规格 价格

012-08643 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 1 mL x5A

016-08641 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type B 5ml

Summary

用于氨基酸自动分析仪或高效液相色谱(HPLC)进行氨基酸成分分析或测序。

The product contains 3 common basic amino acids and 9 other compounds.It is used for amino acid composition analysis and sequencing using amino acid analyzer and high performance liquid chromatography (HPLC).

组成 (每种氨基酸浓度2.50 micro moles/mL，溶于约0.1 mol/L盐酸溶液)：

γ-氨基丁酸gamma-Aminobutyric Acid

乙醇胺 Ethanolamine

氯化铵Ammonium Chloride

异羟赖氨酸 DL-plus allo-delta-Hydroxylysine

L-鸟氨酸L-Ornithine

L-赖氨酸L-Lysine

L-1-甲基组氨酸L-1-Methylhistidine

L-组氨酸L-Histidine

L-3-甲基组氨酸L-3-Methylhistidine

L-鹅肌肽L-Anserine

L-肌肽L-Carnosine

L-精氨酸L-Arginine

货号 品名 规格 价格

013-08391 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 5ml

019-08393 Amino Acids Mixture Standard Solution, Type H 1 mL x5A

简介：

用于氨基酸自动分析仪或高效液相色谱(HPLC)进行氨基酸成分分析或测序。

The product contains 17 common amino acids and ammonium chloride formed through hydrolysis of glutamine and asparagine.It is used for amino acid composition analysis and sequencing using amino acid analyzer and high performance liquid chromatography (HPLC).

Contents (in approx. 0.1 mol/L HCl solution):

L -天冬氨酸L-Aspartic Acid

L -苏氨酸L-Threonine

L -丝氨酸L-Serine

L -谷氨酸L-Glutamic Acid

L -脯氨酸L-Proline

甘氨酸Glycine

L -丙氨酸L-Alanine

L –半胱氨酸L-Cystine

L -缬氨酸L-Valine

L -蛋氨酸L-Methionine

L -异亮氨酸L-Isoleucine

L –亮氨酸 L-Leucin

L -酪氨酸L-Tyrosine

L -苯丙氨酸L-Phenylalanine

L -赖氨酸L-Lysine

L -组氨酸L-Histidine

氯化铵A mmonium Chloride

L -精氨酸L-Arginine

(每种氨基酸浓度2.50 micro moles/mL，溶于约0.1 mol/L盐酸溶液)

構成

本品1びんは、20種のPTH-アミノ酸各20nmolを含む。[( )内は分子量およびアミノ酸略号]

PTH- DL – α -丙氨酸PTH-DL-α-Alanine(206.27 : A)

PTHL -精氨酸盐酸PTH-L-ArginineHCl(372.84 : R)

PTH-L-天冬酰胺PTH-L-Asparagine(249.29 : N)

PTH- L -天门冬氨酸PTH-L-Aspartic Acid(250.28 : D)

PTH- L -谷氨酸PTH-L-Glutamic Acid(264.31 : E),

PTH- L -谷氨酰胺PTH-L-Glutamine(263.32 : Q),

PTH-甘氨酸PTH-Glycine(192.24 : G),

PTH- L -组氨酸盐酸PTH-L-HistidineHCl(308.79 : H),

PTH- L -异亮氨酸PTH-L-Isoleucine(248.35 : I),

PTH- L -亮氨酸PTH-L-Leucine(248.35 : L),

PTH- L -赖氨酸盐酸盐PTH-L-Lysine(398.55 : K),

PTH- DL -蛋氨酸PTH-DL-Methionine(266.39 : M),

PTH- L -苯丙氨酸PTH-L-Phenylalanine(282.37 : F),

PTH- L -脯氨酸PTH-L-Proline(232.31 : P),

PTH- DL -丝氨酸PTH-DL-Serine(222.25 : S),

PTH-DL-苏氨酸PTH-DL-Threonine(236.29 : T),

PTH- δ -苏氨酸PTH-Δ-Threonine(218.27 : ΔT),

PTH-DL-色氨酸PTH-DL-Tryptophan(321.39 : W),

PTH- L -酪氨酸PTH-L-Tyrosine(298.37 : Y),

PTH- DL -缬氨酸PTH-DL-Valine(234.32 : V)

使用法

1. PTH-アミノ酸混合標準品の容器に移動相2.0mlを加え、完全に溶解する。(各PTH-アミノ酸の濃度は10nmol/mlとなる。)

2. 必要量をHPLCに注入し(10μl注入の場合、PTH-アミノ酸は各々100pmolとなる。)標準クロマトグラムを作成する。

用途 PTH-アミノ酸の同定又は定量用標準液。

PTH-DL-α-丙氨酸PTH-DL-α-Alanine

PTH-DL-2-氨基丁酸PTH-DL-2-Aminobutyric acid

PTH-DL-2-氨基异丁酸PTH-DL-2-Aminoisobutyric acid

PTH-L-精氨酸盐酸PTH-L-ArginineHCl

PTH-L-天冬酰胺PTH-L-Asparagine

PTH-L-天冬氨酸PTH-L-Aspartic Acid

PTH-L-羧甲基半胱氨酸PTH-L-Carboxymethylcysteine

PTH-L-瓜氨酸PTH-L-Citrulline

PTH-L-磺酸钾盐PTH-L-Cysteic Acid Potassium Salt

PTH-L-谷氨酸PTH-L-Glutamic Acid

PTH-L-谷氨酰胺PTH-L-Glutamine

PTH-甘氨酸PTH-Glycine

PTH-L-组氨酸盐酸盐PTH-L-HistidineHCl

PTH-L-异亮氨酸PTH-L-Isoleucine

PTH-L-亮氨酸PTH-L-Leucine

PTH-L-赖氨酸PTH-L-Lysine

PTH-DL-蛋氨酸PTH-DL-Methionine

PTH-DL-正缬氨酸PTH-DL-Norvaline

PTH-DL-正亮氨酸PTH- DL-Norleucine

PTH-L-苯丙氨酸PTH-L-Phenylalanine

PTH-L-脯氨酸PTH-L-Proline

PTH-DL-丝氨酸PTH-DL-Serine

PTH-DL-苏氨酸PTH-DL-Threonine

PTH-delta-苏氨酸PTH-delta-Threonine

PTH-DL-色氨酸PTH-DL-Tryptophan

PTH-L-酪氨酸PTH-L-Tyrosine

PTH-DL-缬氨酸PTH-DL-Valine

Wako维生素E标准品套装

发表于由

Wako维生素E标准品套装

产品编号

产品名

产品中文名

包装

302-07111

Vitamin E Reference Standard

维生素E标准品套装

1set

试剂盒包含以下几种物质：:

1. d-α-生育酚  250mg x1瓶

2. d-β-生育酚 250mg x1瓶

3. d-γ-生育酚 250mg x1瓶

4. d-δ-生育酚 250mg x1瓶

5. 3,4-二氢-2,2,5,7,8-五甲基-2H-1-苯并吡喃-6-酚(PMC) 250mg x1瓶

注意: PMC 是用作HPLC分析维生素E的内标物质，不适用于GC分析。

.

分子式，分子量及产品纯度

物质名称

分子式

分子量

最大吸收波长

吸收系数

E1% 1cm

纯度

外观

d-α-生育酚

C29H50O2

430.71

292 nm

78.1

98.5+%

淡黄色、粘稠液体

d-β-生育酚

C28H48O2

416.69

296 nm

89.2

98.5+%

d-γ-生育酚

C28H48O2

416.69

297 nm

94.4

98.5+%

d-δ-生育酚

C27H46O2

402.66

297 nm

92.9

98.5+%

PMC

C14H20O2

220.31

292 nm

–

99.0+%

白色晶体

保存和稳定条件

每小瓶试剂都是用附有氧吸附剂的铝盖包装的。一旦打开了瓶子，请将此试剂于惰性气体环境中的冰箱中（2~10℃）保存。在此条件下，试剂可保持6个月的稳定性。

使用指南(溶液的制备)

1. 用天平称取每种试剂各50~100mg，质量确定到0.1mg。

2. 将这些试剂分别溶解在乙醇或己烷溶剂中，直至各维生素同系物的浓度为1mg/mL。再将这些溶液密封保存于5℃，可保存一个月。

3. 在使用前将原液稀释，即可得到每个同系物的标准溶液。

Wako 077-03155 Gelatin 明胶

发表于由

Wako 077-03155 Gelatin 明胶
英文名称：Gelatin
中文名称：明胶
品牌：Wako
品牌中文简称：和光纯药
CAS No.：9000-70-8
储存条件：室温
纯度：-
Wako 077-03155 Gelatin 明胶

品牌 产品编号 产品名称 等级 规格 CAS No.
Wako 和光纯药 071-01791 Gelatin, Capsules No. 00  明胶，胶囊No. 00 for Electron Microscopy 100 pcs N/A
Wako 和光纯药 074-01801 Gelatin, Capsules No. 0 明胶，胶囊No. 0 for Electron Microscopy 100 pcs N/A
Wako 和光纯药 190-15805 StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution StemSure 0.1w/v%明胶溶液 for Cell Culture 500 ml –
Wako 和光纯药 071-06291 Gelatin, from Bovine Bone 明胶，来自牛骨 – 100 g 9000-70-8
Wako 和光纯药 073-06295 Gelatin, from Bovine Bone 明胶，来自牛骨 – 500 g 9000-70-8
Wako 和光纯药 077-03155 Gelatin 明胶 Wako 1st Grade 500 g 9000-70-8
Nippi 日皮 305-34331 gelatin, M.W.8,000±2,000, High Grade  明胶，M.W.8,000±2,000, 高纯 – 10 g 9015-54-7
Nippi 303-34413 gelatin, M.W.100,000 明胶，分子量100,000 – 1 g –
Nippi 301-34333 gelatin, M.W.8,000±2,000, High Grade 明胶，分子量8,000±2,000 – 1 g 9015-54-7
Nippi 301-34414 gelatin, M.W.100,000 明胶，分子量100,000 – 5 g –
Nippi 308-34343 gelatin, M.W.60,000, High Grade 明胶，分子量60,000 – 10 g –
Hokudo 301-13931 Gelatinase A 明胶酶A – 10 ug –
Hokudo 308-13941 Gelatinase B 明胶酶B – 10 ug –
Hokudo 302-13841 Anti Gelatinase B Polyclonal Antibody 抗明胶酶A多克隆抗体 – 100 ul –

Wako 016-17431 消泡剂SI

发表于由

Wako 016-17431 消泡剂SI
英文名称：Antifoam SI
中文名称：消泡剂SI
品牌：Wako
品牌中文简称：和光纯药
CAS No.：N/A
储存条件：25℃以下
纯度：-
细胞培养消泡剂
消泡剂 SI，PE-H，PE-M，PE-L
特点：

  • SI(Silicone)

本品为硅系消泡剂，同时具有非常优异的破泡性和抑泡性。因此，低浓度时，也可得到消泡效果。而且，添加到培养基时，具有浑浊少的特点。

  • PE-H(Pdyether-High), PE-M(Polyether-Medium), PE-L(Polyether-Low)

本品为聚醚系消泡剂，可将细胞毒性抑制到非常低的程度。根据粘度的不同，分为PE-H，PE-M，PE-L三种。一般来说，粘度越低分散性越好。
添加量：对于细胞培养，添加适量本品用于确认各系统的最终浓度保持在0.25～0.5%（1L培养基中含0.25～0.5ml）。
用途： 用于细菌·细胞等培养时去除泡沫.
参考数据：1.消泡效果和浑浊（度）的测定.
方法：在小试验管中注入5ml培养基，剧烈振荡后，加入消泡剂。
添加后分别测定10秒钟、5分钟、15分钟的起泡程度，以及当时的浑浊（度）。
2.细胞毒性试验.
细胞：Vero细胞的subclone(O78株)
Viability的判定：Alamar Blue.
方法：添加Alamar Blue, 测定LD50.
注意：细胞毒性非常低，用于培养没有问题。可用于各系统的培养。

产品编号 产品名称 包装
016-17431 Antifoam SI   消泡剂 SI 100ml
018-17435 Antifoam SI   消泡剂 SI 500ml
010-17191 Antifoam PE-H 消泡剂 PE-H (参考)在20℃时，粘度约983cP 100ml
012-17195 Antifoam PE-H 消泡剂 PE-H (参考)在20℃时，粘度约983cP 500ml
010-17211 Antifoam PE-M 消泡剂 PE-M (参考)在20℃时，粘度约325cP 100ml
012-17215 Antifoam PE-M 消泡剂 PE-M (参考)在20℃时，粘度约325cP 500ml
013-17201 Antifoam PE-L 消泡剂 PE-L (参考)在20℃时，粘度约160cP 100ml
015-17205 Antifoam PE-L 消泡剂 PE-L (参考)在20℃时，粘度约160cP

wako 用于磷酸化蛋白的WB检测– Phos-tag™ Biotin

发表于由

wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag，用于磷酸化蛋白的WB检测
Phos-tag™ Biotin是与生物素结合的Phos-tag™，可代替western blot检测中的磷酸化抗体。Phos-tag™ Biotin BTL-104和BTL-105可灵敏检测PVDF膜上的磷酸化蛋白。现推出液体型。
特点：

  • 无辐射
  • 无需PVDF膜的封闭处理
  • Phos-tag™的特异性结合与氨基酸种类、序列无关
  • 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作
  • Phos-tag™-BTL母液可稳定保存至少6个月
  • 实验流程与使用HRP标记抗体相类似
  • 可用于所有的磷酸化蛋白检测
  • 与普通WB检测相似。但无需使用磷酸化抗体
【Phos-tag™ Biotin免疫印迹原理】
应用实例：

应用实例：使用Phos-tag™BTL-104进行斑点印迹检测
非磷酸化蛋白：Bovine Serum Albumin, Human Serum Albumin, Carbonic Anhydrase, β- Galactosidase
磷酸化蛋白：α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
去磷酸化蛋白： (用碱性磷酸酶处理) α-Casein, β-Casein, Ovalbumin, Pepsin
Application (3): Western Blotting:
Phos-tag Biotin BTL-104 [Wako Cat. #301-93531 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）

Phos-tag Biotin BTL-105 [Wako Cat. #304-93541 (10 mg)]⇒ Protocol（点击进入）
产品描述
1、粉末；
2、在4度可保存至少一年；
3、检测磷酸化蛋白；
4、Phos-tagTM与生物素（Biotin）结合可与亲和素标记的HRP结合，检测磷酸化蛋白。
可用于免疫印迹实验，二维电泳。
产品编号 产品名称 规格 原价
305-99411 Phos-tag™ Biotin BTL-104 1mM Aqueous 0.3ml 2700
308-97201 Phos-tag™ Biotin BTL-111 1mM Aqueous Solution 0.1ml 3560
301-93531 Phos-tag™ Biotin BTL-104 10mg 12460
308-93541 Phos-tag™ Biotin BTL-105 10mg 12460

BTL-104、BTL-105、BTL-111三者连接链（Linher)长度不一，但使用上基本相同.BTL-111灵敏度最高，推荐使用溶解性比较高的BTL-104。
wako  Phos-tag™ Biotin–生物素共轭的Phos-tag使用的先关问题解答