上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。
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| ■ 制品内容 (文库制作10次量) |
| SP DNA mixture (0.032 pmol/μl)＊1 |
45 μl |
| pBE-S DNA (0.5 μg/μl)＊2 |
20 μg |
| B. subtilis RIK1285 (glycerol stock)＊3 |
100 μl x 2 |
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*1：与In-Fusion®克隆系统搭配使用，可编码来源于B. subtilis 的173种分泌信号肽的DNA混合物。
*2：溶于TE buffer(pH8.0)。
*3：Marburg 168 derivative : trpC2, lys1, aprEΔ3, nprR2, nprE18 |
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| 【注意】本制品仅限用于科研目的，凡用于商业用途，须获得Takara公司授权许可。了解详细信息以及获取相关许可文件，请致电4006518761或邮件联络service@takarabiomed.com.cn。 |
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| ■ 制品说明 |
使用Bacillus subtilis 作为宿主菌有利于重组蛋白质的可溶性和分泌性表达，尤其适用于含二硫键等复杂结构的蛋白质表达。与大肠杆菌表达系统相比，B. subtilis 表达的重组蛋白质不含内毒素。
T. Eggert等人的研究表明，重组蛋白的分泌水平受信号肽种类的影响十分显著。Takara Bio公司现已开发出一种使用B. subtilis 筛选分泌蛋白有效表达的系统。该系统能够从包含173种B. subtilis 来源的分泌信号肽的文库中，鉴定出适合靶蛋白分泌表达的信号肽。但是，由于B. subtilis 的质粒拷贝数非常低，因此很难在B. subtilis 中构建质粒。本系统使用pBE-S DNA作为E. coli 和B. subtilis 之间的穿梭质粒，从而可以在E. coli 中构建和传递表达质粒。
本系统包括：
SP DNA mixture——B. subtilis 分泌信号肽的DNA文库
B. subtilis / E. coli 穿梭载体pBE-S DNA
B. subtilis strain RIK1285
SP DNA mixture 包含能够编码173种B. subtilis分泌信号肽的DNA片段(用于In-Fusion克隆)。pBE-S DNA载体含有能够在B. subtilis 中发挥作用的pUB110来源的复制起始位点(pUB ori)和一个卡那霉素抗性基因(Kanr)，以及能在E.coli 中发挥作用的pUC来源的复制起始位点(CoIE ori)和一个氨苄青霉素抗性基因(Ampr)。此外，在多克隆位点(MCS)和His-Tag序列的上游，还有一段B. subtilis 来源的枯草杆菌蛋白酶启动子(aprE promoter)和分泌信号肽 (aprE SP)序列。含有目的基因的pBE-S DNA载体可使用限制性内切酶Mlu I 和Eco52 I线性化，然后通过Clontech的In-Fusion®克隆方法，就可以替换aprE SP(参见下方质粒图谱)，引入SP DNA mixture中的173种分泌信号肽的DNA文库，这样就可以为目的蛋白质筛选到合适有效的分泌信号肽。
由于pBE-S DNA载体与E.coli 冷休克表达系统的pCold 载体 (Code No.: 3360～3365 和 3371)的多克隆位点相同，因此目的基因可以很容易地在这些载体之间转移。试剂盒中提供的宿主菌B. subtilis RIK1285有两种蛋白酶缺陷，因此适用于目的蛋白质的分泌表达。 |
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| ■ 保存 |
SP DNA mixture和pBE-S DNA : -20℃
B. subtilis RIK1285 (glycerol stock) : -80℃ |
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| ■ 使用注意 |
1. 可以选择使用In-Fusion HD Cloning Kit (Cat. #639648/639649/639650)，结合使用Stellar Comptent Cells (Cat. #636763/636766)。
2. SP DNA mixture是由PCR扩增获得的DNA片段，因此，PCR扩增的副产物如引物二聚体等也可能被克隆，但几率较低。 |
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页面更新：2020-11-03 11:09:33
