Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

发表于2024年6月26日由上海金畔生物科技有限公司

产品特性
相关资料
Q&A
参考文献

全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）

本产品为两种针对SOD1突变体的抗体混合物。SOD1突变体被认为是导致神经性疾病肌萎缩性侧索硬化(ALS)的原因之一，本产品可特异性识别SOD1突变体的共通二级结构，并且通过免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以检测出上百种SOD1突变体。

另外，本混合型抗体也适用于缺锌性内质网应激相关的SOD1研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1立体结构变化”。

※ 本产品仅供研究。研究以外不可使用。

※ 本产品基于东京大学药学系研究科细胞情报学教室的研究成果产品化而成。

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

免疫沉淀后突变体SOD1的检测实例

在HEK293细胞中表达野生型以及不同突变型SOD1，裂解细胞后添加各抗体（MS785：5 μg/mL, MS27：2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反应10小时，然后使用Protein G 磁珠进行免疫沉淀。结果显示，MS785和MS27在经过免疫沉淀反应后，未识别出野生型（WT）但与突变体特异性结合。在抗原位点出现突变时，MS785和MS27无法单独识别，但是补充MS785/MS27混合体后，即可检测出来。

◆肌萎缩性侧索硬化（ALS）与SOD1

肌萎缩性侧索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一种由于运动神经的细胞死亡导致全身骨骼肌无力、主要症状为肌肉萎缩的神经退行性疾病。90%的ALS为非遗传性发病，10%左右为遗传性发病，并且已经鉴定出了约20种致病基因。其中因氧化还原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突变导致发病的案例最多，而表达SOD1突变体的转基因小鼠也作为ALS的动物模型使用。借助各种研究手段我们有望阐明由SOD1突变导致的ALS发病机理。

SOD1是一种在活性中心带有铜离子与锌离子的金属酶，主要负责分解细胞内产生的活性氧。虽然SOD1是一种相对较小的蛋白，只有154个氨基酸（人）、分子量仅为24 kDa，但是却有着上百种突变体（图1）。这些突变体基本不会影响分解天然活性氧的酶活性。因此，研究认为，ALS的发病中存在着酶活性以外的其他因素，而伴随突变的毒性获得（toxic gain of function）被视为极有可能的因素。

原本，野生型SOD1形成二聚体，但有关SOD1突变体，东京大学一条秀宪教授等人已澄清了的以下要点：

●　上百种各形各式的SOD1突变体采用了与野生型SOD1不同的共通二级结构（图2）。

●　通过与内质网中的蛋白降解途径（ERAD）的构成蛋白Derlin-1相结合获得细胞毒性。

并且，以SOD1突变体与Derilin-1结合位点为基础，成功开发出能够特异性识别突变体立体结构的大鼠单克隆抗体，克隆MS785和MS27。这些抗体作为阐明SOD1突变引发的ALS发病机制的优秀工具备受期待。

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

图1 报告中SOD1突变位点的案例

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

图2 SOD1野生型与突变体的结构区别以及抗体识别位点

◆特点

●　混合了抗SOD1大鼠单克隆抗体克隆MS785和克隆MS27的混合型抗体。

※　亦可分别购入克隆MS785、MS27。

●　克隆MS785和MS27识别SOD1突变体共通的单体二级结构，且拥有在免疫沉淀后检测出上百种SOD1突变体的实绩。

●　可以通过免疫细胞染色法特异性检测SOD1突变体。

●　在缺锌条件下可以检测作为内质网应激的原因之一的野生型SOD1二级结构变化。适用于内质网应激研究和SOD1基础研究。详细请浏览“MEMO——锌缺乏和SOD1二级结构改变”。

◆抗体信息

克隆名	MS785	MS27
抗体种类	大鼠单克隆抗体
同种型	IgG2b/κ	IgG2a/κ
交叉性	人
性状	Protein G纯化（0.5 mg/mL），storage buffer：50％甘油／PBS

■　关于克隆MS785与MS27的区别

●　MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分别作为抗原制备的单抗。

●　均可广泛地检测突变体，但无法检测到某些每个表位均有突变的特定突变体。

●　由于MS785和MS27有互补性，所以混合型抗体可以补全抗原位点突变体的检测。

◆应用

●　免疫沉淀，免疫染色：突变体检测

●　ELISA：突变体检测（详细请参考原著文献2。）

●　Western blot：同时检测突变体与野生型

注意：在变性状态下，不仅会检测到SOD1突变体，也会检测到野生型SOD1。因此，实验过程中必须防止蛋白变性，请勿使用SDS等变性剂。

◆原著文献

1.　Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.　"A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1.　sclerosis-linked SOD1 mutants."

2.　Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

2.　"A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1.　alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

◆通过免疫染色对SOD1突变体的检测实例

在HEK293细胞表达野生型以及G93A突变体SOD1（FLAG融合蛋白），分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗体（红）和抗FLAG抗体（绿）进行免疫染色（工作浓度：1 μg/mL）。可以确认，野生型以及G93A突变体均倍倍抗FLAG抗体检测到信号，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗体均不与野生型反应，仅与突变体反应。

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

◆缺锌状态下野生型SOD1的检测实例

本抗体可检测出缺锌时野生型SOD1的动态结构变化。不仅ALS研究，也适用于SOD1的基础研究。

●　本产品有在血清缺乏条件以及锌螯合剂TPEN处理下检测出内源性野生型SOD1的检测实例。

●　MS785、MS27以及混合物都可用于检测。

锌缺乏和SOD1立体构造改变

OD1是拥有锌离子的金属蛋白。东京大学的一条教授等人明确，在缺锌状态下野生型SOD1会释放锌离子，改变二级结构，并采取SOD1突变体相似的单体结构。这种结构变化，令原本不结合的内质网相关性降解（ERAD）蛋白Derlin-1获得结合能力，诱导了ER 应激（内质网应激）。即使是野生型SOD1，本产品也能识别出缺锌状态下的立体结构变化，检测出缺乏锌的SOD1。因此适用于SOD1基础研究以及ER应激研究。

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

参考文献：

1. Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1. "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013).

1. "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

1. "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono （MS785/MS27）全面检测ALS相关SOD1突变体的混合型抗体

将HEK293细胞用10 μM锌螯合剂TPEN处理8小时。细胞裂解后，分别使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗体进行免疫沉淀。由于锌离子的缺失，内源性野生型SOD1与SOD1突变体同样被MS785、MS27检测出来。

◆储存温度

20°C

※ 本页面产品仅供研究用，研究以外不可使用。

产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
FDV-0021A	Anti-SOD1(ALS-related mutants)Cocktail, Human, Rat-Mono(MS785/MS27) Anti-SOD1（ALS相关突变体）混合型，人，大鼠单克隆（MS785/MS27）	100 μg
FDV-0021B	Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS785) Anti-SOD1（ALS相关突变体）,人，大鼠单克隆（MS785）	100 μg
FDV-0021C	Anti-SOD1(ALS-related mutants), Human, Rat-Mono(MS27) Anti-SOD1（ALS相关突变体）,人，大鼠单克隆（MS27）	100 μg

SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体 SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb

发表于2024年3月17日由上海金畔生物科技有限公司

SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体

SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb

详细描述：
SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb兔单抗可以识别内源性SOD2总蛋白水平。单克隆抗体由合成肽段免疫动物产生，该肽段与人SOD2蛋白氨基端附近氨基酸一致。SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total SOD2 protein.Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues near the amino terminus of human SOD2 protein.

应用范围：W IHC-P；反应种属：Human,Mouse,Rat,Monkey；灵敏度：Endogenous； MW (kDa)：22； Isotype：Rabbit IgG；标记：无标记。

货号	产品名称	品牌	购买

货号	名称	单位	购买
13141T	SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体	20 µl	咨询客服
13141S	SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体	100µl	咨询客服

SOD1 (71G8) 小鼠单克隆抗体 SOD1 (71G8) Mouse mAb

发表于2024年2月24日由上海金畔生物科技有限公司

SOD1 (71G8) 小鼠单克隆抗体

SOD1 (71G8) Mouse mAb

详细描述：
SOD1 (71G8) Mouse mAb 鼠单抗识别内源性的SOD1总蛋白。它与其它相关蛋白无交叉反应。该单克隆抗体由全长重组人SOD1蛋白免疫动物而制成。SOD1 (71G8) Mouse mAb detects endogenous levels of SOD1 protein. It does not cross-react with other related proteins.Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with full-length recombinant human SOD1 protein.

应用范围：W IP；反应种属：Human；灵敏度：Endogenous； MW (kDa)：18； Isotype：Mouse IgG1；标记：无标记。

货号	产品名称	品牌	购买

货号	名称	单位	购买
4266T	SOD1 (71G8) 小鼠单克隆抗体	20 µl	咨询客服
4266S	SOD1 (71G8) 小鼠单克隆抗体	100µl	咨询客服

SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体 SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb

发表于2024年2月21日由上海金畔生物科技有限公司

SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体

SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb

应用范围：W IHC-P；反应种属：Human,Mouse,Rat,Monkey；灵敏度：Endogenous； MW (kDa)：22； Isotype：Rabbit IgG；标记：无标记。

货号	产品名称	品牌	购买

货号	名称	单位	购买
13141T	SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体	20 µl	咨询客服
13141S	SOD2 (D3X8F) XP® 兔单克隆抗体	100µl	咨询客服

SOD2 (D9V9C) 兔单克隆抗体 SOD2 (D9V9C) Rabbit mAb

发表于2024年2月20日由上海金畔生物科技有限公司

SOD2 (D9V9C) 兔单克隆抗体

SOD2 (D9V9C) Rabbit mAb

详细描述：
SOD2 (D9V9C) Rabbit mAb可以识别内源性SOD2总蛋白水平。单克隆抗体由合成肽段免疫动物产生，该肽段与人SOD2蛋白Ala120附近氨基酸一致。SOD2 (D9V9C) Rabbit mAb recognizes endogenous levels of total SOD2 protein.Monoclonal antibody is produced by immunizing animals with a synthetic peptide corresponding to residues surrounding Ala120 of human SOD2 protein.

应用范围：W；反应种属：Human,Mouse,Rat,Monkey；灵敏度：Endogenous； MW (kDa)：22； Isotype：Rabbit IgG；标记：无标记。

货号	产品名称	品牌	购买

货号	名称	单位	购买
13194S	SOD2 (D9V9C) 兔单克隆抗体	100µl	咨询客服

SOD1 抗体 SOD1 Antibody

发表于2023年12月20日由上海金畔生物科技有限公司

SOD1 抗体

SOD1 Antibody

详细描述：

应用范围：W F；反应种属：Human；标记：无标记。

货号	产品名称	品牌	购买

货号	名称	单位	购买
2770S	SOD1 抗体	100µl	咨询客服

抗酸化能測定キット SOD Assay Kit – WST　同仁化学研究所

发表于2023年11月23日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

SOD Assay Kit – WST

02 酸化ストレス関連試薬

SOD Assay Kit – WST

酸化ストレス関連試薬
食品機能評価

抗酸化能測定キット

製品コード

S311　 SOD Assay Kit – WST

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥9,200	341-90193
500 tests	￥23,600	345-90191

キット内容

100 tests	・WST Solution ・Enzyme Solution ・Buffer Solution ・Dilution Buffer	1 ml x 1 20 μl x 1 11 ml x 2 10 ml x 1
500 tests	・WST Solution ・Enzyme Solution ・Buffer Solution ・Dilution Buffer	5 ml x 1 100 μl x 1 100 ml x 1 50 ml x 1

試験成績書

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マニュアル

取扱説明書 500 tests 日本語
取扱説明書 500 tests English
取扱説明書 100 tests 日本語
取扱説明書 100 tests English
プロトコル SOD様活性を測定したい

技術情報

測定方法

96wellプレートを用い、サンプル調製から測定まで約1時間で完了します。

参考文献

参考文献を表示する

1) H. Ukeda, A. K. Sarker, D. Kawana and M. Sawamura, "Flow-Injection Assay of Superoxide Dismutase Based on the Reduction of Highly Water-Soluble Tetrazolium", Anal. Sci., 1999, 15, 353.
2) H. Ukeda, D. Kawana, S. Maeda and M. Sawamura, "Spectrophotometric Assay for Superoxide Dismutase Based on the Reduction of Highly Water-soluble Tetrazolium Salts by Xanthine-Xanthine Oxidase", Biosci. Biotechnol. Biochem., 1999, 63, 485.
3) <受田浩之, 森山洋憲, 川名大介, 片山泰幸, 中林錦一, 沢村正義, 「スーパーオキシドアニオン消去活性新規測定法の食品への応用」, 日本食品科学工学会誌, 2002,49, 25.
4) <森山洋憲, 片山泰幸, 中林錦一, 受田浩之, 沢村正義, 「高知県産茶および青果物の有するスーパーオキシドアニオン消去能の測定」, 日本食品科学工学会誌, 2002,49, 679.
5) H. Ukeda, T. Shimamura, M. Tsubouchi，Y. Harada, Y. Nakai and M. Sawamura, "Spectrophotometric Assay of Superoxide Anion Formed in Maillard Reaction Based on Highly Water-soluble Tetrazolium Salt", Anal. Sci., 2002, 18, 1151.
6) N. Tsuji, N. Hirayanagi, M. Okada, H. Miyasaka, K. Hirata, M. H. Zenk and K. Miyamoto, "Enhancement of Tolerance to Heavy Metals and Oxidative Stress in Dunaliella Tertiolecta by Zn-induced Phytochelatin Synthesis", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2002, 293, 653.
7) A. Sakudo, D. C. Lee, K. Saeki, Y. Nakamura, K. Inoue, Y. Matsumoto, S. Itohara and T. Onodera, "Impairment of Superoxide Dismutase Activation by N-Terminally Truncated Prion Protein (PrP) in PrP-deficient Neuronal Cell Line", Biochem. Biophys. Res. Commun., 2003, 308, 660.
8) J.-H. Zhu, X. Zhang, J. P. Mcclung and X. G. Lei, "Impact of Cu,Zn-Superoxide Dismutase and Se-Dependent Glutathione Peroxidase-1 Knockouts on Acetaminophen-Induced Cell Death and Related Signaling in Murine Liver", Exp. Biol. Med., 2006, 231, 1726.
9) H. R. Rezvani, S. Dedieu, S. North, F. Belloc, R. Rossignol, T. Letellier, H. de Verneuil1, A. Taieb1, F.Mazurier, "HIF-1α: a Key Ffactor in the Keratinocyte Response to UVB Exposure", J. Biol. Chem., 2007, 10, 1074.
10) S. Goldstein and G. Czapski, "Comparison Between Different Assays for Superoxide Dismutase-like Activity", Free Rad. Res. Comms., 1991, 12, 5.
11) R. H. Burdon, V. Gill and C. Rice-Evans, "Reduction of a Tetrazolium Salt and Superoxide Generation in Human Tumor Cells (HeLa)", Free Rad. Res. Commun., 1993,18, 369.
12) Y. Sakurai, I. Anzai and Y. Furukawa, "A Primary Role for Disulfide Formation in the Productive Folding of Prokaryotic Cu,Zn-superoxide Dismutase", J. Biol. Chem., 2014, 289(29), 20139.
13) A. Weichert, A. S. Besemer, M. Liebl, N. Hellmann, I. Koziollek-Drechsler, P. Ip, H. Decker, J. Robertson, A. Chakrabartty, C. Behl and A. M. Clement, "Wild-type Cu/Zn superoxide dismutase stabilizes mutant variants by heterodimerization", Neurobiol. Dis., 2014, 62, 479.
14) J. M. Hartney, T. Stidham, D. A. Goldstrohm, R. E. Oberley-Deegan, M. R. Weaver, Z. Valnickova-Hansen, C. Scavenius, R. K.P. Benninger, K. F. Leahy, R. Johnson, F. Gally, B. Kosmider, A. K. Zimmermann, J. J. Enghild, E. Nozik-Grayck and R. P. Bowler, "A common polymorphism in extracellular superoxide dismutase affects cardiopulmonary disease risk by altering protein distribution", Circ Cardiovasc Genet, 2014, 7(5), 659.
15) J. Wu, Y. Sun, Y. Zhao, J. Zhang, L. Luo, M. Li, J. Wang, H. Yu, G. Liu, L. Yang, G. Xiong, J. Zhou, J. Zuo, Y. Wang and J. Li, "Deficient plastidic fatty acid synthesis triggers cell death by modulating mitochondrial reactive oxygen species", Cell Res., 2015, 25(5), 621.
16) E. Harunari, C. Imada, Y. Igarashi, "Konamycins A and B and Rubromycins CA1 and CA2, Aromatic Polyketides from the Tunicate-Derived Streptomyces hyaluromycini MB-PO13^T'", J. Nat. Prod., 2019, 82, (6), 1609-1615.
17) N. Kajihara, D. Kukidome, K. Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E. Araki, "Low glucose induces mitochondrial reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial cells", J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18) H- J. Kim, H- J. Kim, J. Jeon, K- C. Nam, K- S. Shim, J- H. Jung, K. S. Kim, Y. Choi, S- H. Kim, A. Jang, Comparison of the quality characteristics of chicken breast meat from conventional and animal welfare farms under refrigerated storage', Poultry Science., 2020, 99, 1788-1796.
19) T. Shoji, S. Masumoto, N. Moriichi, Y. Ohtake, T. Kanda, Administration of Apple Polyphenol Supplements for Skin Conditions in Healthy Women: A Randomized, Double-Blind, Placebo-Controlled Clinical Trial', Nutrients., 2020, 12, (1071), .
20) Y. Hirata, Y. Ito, M. Takashima, K Yagy, K. Oh-Hashi, H. Suzuki, K. Ono, K. Furuta and M. Sawada, Novel Oxindole-Curcumin Hybrid Compound for Antioxidative Stress and Neuroprotection.', ACS Chem. Neurosci.., 2020, 11, (1), 76-85.

よくある質問

Q SOD様活性と試薬の発色の関係について教えてください。: A

SOD様活性が強いと試薬の発色は弱くなります。また、SOD様活性が弱いと試薬の発色は強くなります。下記をご参照ください。

＜キットの原理＞

WST-1はスーパーオキサイド（以下、2O₂^–）によって還元されることで、WST-1 formazanに変化し発色します。SOD様活性を持つ物質がサンプル中に存在するとキサンチンオキシダーゼ（XO）を介して発生する2O₂^–を除去しますので、還元されるWST-1の量が少なくなります。2O₂^–がWST-1の還元に使われるか、SOD様活性により除去されるかの競争反応により発色の度合いが変化します（下図）。併せて製品ページの「技術情報：測定原理」もご参照ください。

・SOD様活性が弱い場合

・SOD様活性が強い場合

Q Mn-SODとCu, Zn-SOD 及びEC(extracellular)-SODの測り分けはできますか？: A

サンプル溶液にKCN（potassium cyanide）またはDDC（Diethyldithiocarbamate）を添加することでCu, Zn-SOD 及びEC(extracellular)-SODの活性を阻害し、Mn-SOD の活性が測定できます。

【測定例】
・SODのサンプル溶液にKCNまたはDDCを終濃度が1-10 mmol/l となるように添加し、室温にて5分間インキュベートする。
・インキュベート後の溶液（20 μl）を用いて、SOD Assay Kit-WSTのマニュアルに従ってSOD様活性を測定する。

*注意点*
・KCNやDDCの濃度およびインキュベーション時間は、サンプルによって検討が必要となります。下記の論文を参考してください。
・ユニット（U）算出の際は、KCN又はDDC添加により希釈されたサンプルの希釈倍率を考慮して計算して下さい。

1) Greenough MA, Volitakis I, Li QX, Laughton K, Evin G, Ho M, Dalziel AH, Camakaris J, Bush AI, “Presenilins promote the cellular uptake of copper and zinc and maintain copper chaperone of SOD1-dependent copper/zinc superoxide dismutase activity”, J Biol Chem., 2011, 286, 9776.

2) Hajime Fujimoto, Jun-ichi Taguchi, “Manganese superoxide dismutase polymorphism affects the oxidized low-density lipoproteininduced apoptosis of macrophages and coronary artery disease.”, European Heart Journal. 2008. 29, 1267.

3) A. Dacanay, S. C. Johnson, R. Bjornsdottir, R. O. Ebanks, N. W. Ross, M. Reith, R. K. Singh, J. Hiu, and L. L. Brown, "Molecular Characterization and Quantitative Analysis of Superoxide Dismutases in Virulent and Avirulent Strains of Aeromonas salmonicida subsp. salmonicida"Journal of Bacteriology, 2003, 185 (15), 4336.

1) Heikkila RE, Cabbat FS, Cohen G. “In vivo inhibition of superoxide dismutase in mice by diethyldithiocarbamate”, J Biol Chem., 1976, 251, 2182.

Q SODキットを使用して、測定した際の[unit]算出の方法はどのようにすればよいのでしょうか？: A

SOD活性の定義としましては、チトクロムｃ法の時も同様ですが、「IC50=1U:発色を50％阻害する時のSODの活性を示す濃度」になります。

このキットでの1Uの定義は、「WSTの発色を50%阻害する時のSODの活性」です。
従って、サンプルを希釈していき、IC50の時の希釈倍率のSODの活性が1Uです。

「U」は「単位」ですので、これを「量」に換算します。

この時、タンパク量を容量で算出するのか、重量で算出するのかで、1U/mlもしくは1U/mg proteinと表示します。

カタログに記載している阻害曲線は、活性既知のSODを希釈し測定しています。
たまたまIC50値が1U/ml付近になっています。

<50％阻害するサンプル濃度を1Uとする方法：ユニットをWST法として表現>
例：サンプルのIC50値の希釈倍率を x10.75　とする。

（このキットでは測定に使用するサンプル量が20μl、全量が240μl）

IC50を示す測定時のサンプル希釈率は「10.75倍」になります。
　–>『10.75倍に希釈された液、「20 μl中」に存在する SOD 量が1単位である』
　となります。

単位で考えると、測定時のものが「１U」ですので、希釈前サンプルは「10.75U」　となります。

アッセイで添加したのは20 μ （0.02 ml)ですので、サンプル 1 mlあたりのunit数を計算する。

アッセイで添加する20 μl中に1単位含まれるので
10.75/0.02 = 537.5 U/ml

SOD抽出過程（前処理）で希釈が生じていれば、元々の試料の活性は前処理での希釈を計算して
希釈率ｘ537.5 = ○ U/ml of サンプル

となります。

＊ここでは容量に換算しております。
　例えば：血液であれば　「○ U/ml of blood」など
　タンパク量や質量(mg)に換算したい場合は、さらに別途換算してください。

Q 酸化ストレスの指標としてSOD様活性はよく測定されますが、 SOD様活性の他に酸化ストレスマーカーとなるものはありますか？: A

酸化ストレスマーカーについてまとめた資料を作成しております。
カスタマーサポートの視点から、各酸化ストレスマーカーの特徴・測定サンプルの前処理方法などを記載しておりますので、ご参照ください。

下記URLよりダウンロード可能です。

「はじめての酸化ストレスマーカー測定プロトコル～カスタマーサポートの視点から～」

Q SOD様活性を測定する方法としてはどのようなものがありますか？: A

一番一般的に知られている方法は
・チトクロムｃ法

　です。その他

・NBT法

・エピネフリン法

・亜硝酸法

・ESR法

などが知られております。

NBT法はxanthine/xanthine oxidaseをスーパーオキサイド産生系とし、テトラゾリウム塩の還元反応を利用しており、操作が簡便であることから汎用されております。

しかし、生成するホルマザンが不溶性の沈殿物であることやNBTがxanthine oxidaseと直接反応することから100％阻害率を測定できないなどの問題がありました。

弊社のWST法は、発色基質として「WST-1」を使用しこれらの問題を解決しております。

（測定原理はNBTと同様とお考え下さい）

Q superoxideとWST-1の反応の阻害が０（発色が100％）となるところが全く発色しません。酵素(Xanthine oxidase)が失活しているのでしょうか？: A

酵素(Xanthine oxidase)は失活していなくても、働いていない場合があります。酵素溶液は懸濁液になっていますので静置して置くと酵素が沈んでしまいます。良く振ってからご使用ください。上澄みだけを取ってしまうとsuperoxideは全く発生しませんので発色もしません。

Q 脂溶性成分は測定できますか？: A

本キットは水溶性サンプルの測定を主な対象としており、水に溶解できないサンプルは測定出来ません。なお、脂溶性物質を低濃度域で溶解可能な場合は、DMSOやエタノールに一度溶解後、蒸留水やPBSで出来る限り希釈し、測定してください。
注意①サンプル中にDMSOは5%、エタノールは25%含まれますと測定に影響します。溶媒濃度を測定に影響しない濃度まで希釈しご使用ください。

注意②検討の際は、必ずBlank2とBlank3を測定し、誤発色等の影響がないかご確認ください。

Q SOD Assay Kit – WSTは食品等の測定も可能となっておりましたが、必要な前処理の方法を教えて下さい。: A

下記のような方法により処理し、測定を行うことが出来ます。

<茶葉>
茶葉資料10 gに蒸留水400 mlを加えてホモジナイズ処理し、5 ℃で48時間静置して抽出し、ろ過(No.2:アドバンテック東洋(株))した後、さらにメンブレンフィルター(pore size 0.45μm:富士フィルム(株))で処理する。
<ワイン>
直接メンブランフィルターでろ過し、測定試料とする。
緑茶や赤ワイン等はそのもの自体に着色がありますが、100倍程度に希釈すると測定に対する色の影響は回避できます。
<植物・野菜類>
1)蒸留水(野菜の重量に対し5倍量程度）で4 ℃、1分間ホモジナイズする。
2)ホモジネートをろ紙でろ過し、ろ液(水での抽出物）を凍結乾燥する。
3)凍結乾燥したものを0.1 mol/lリン酸バッファー(pH7.4)に溶かし、これを測定試料とする。溶かしたものはなるべく早く使用する。
＊上記試料により得られた活性値は、水による抽出物の凍結乾燥後の重量もしくはホモジナイズ前の野菜重量当りの活性値とする。

【参考文献】
日本食品科学工学会誌,2002, 49(1),25～31.
日本食品科学工学会誌,2002, 49(10),679～682.

-注-
食品中にはキットのに使用している色素を直接発色させてしまう還元物質が多く存在します。これまで得られている報告では20～100倍に希釈する事によりその影響を押さえることが出来ております。

Q 測定に影響を与える物質にはどのようなものがありますか？: A

アスコルビン酸、グルタチオン(還元型)など還元性物質は正誤差を与えます。
これらの物質が下記の濃度存在した場合10％程度の吸光度の上昇が認められますが、
吸光度の上昇は[blank2]として差し引くことにより影響は回避できます。
・ascorbic acid：0.1 mmol/l

・glutathione,reduced form：5 mmol/l

・bovine serum albumin(BSA)：5% w/v

（BSAは吸光度の上昇は見られませんが、SOD様活性を示しますのでこれよりも高濃度にならないようにして下さい）

Q 組織の前処理に使用するショ糖緩衝液はどのように調製すればよいですか？

下記の調製例をご参照ください。

＜ショ糖緩衝液 1000mlを調製する場合＞

試薬	使用量（モル濃度）
ショ糖	85.57 g（0.25 mol/l）
2-Amino-2-hydroxymethyl-1,3-propanediol （トリス緩衝剤）	1.21 g（0 mmol/l）
2NA(EDTA・2Na)	372 mg（1 mmol/l）