PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测 PROTEOSTAT® Protein aggregation assay

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assayPROTEOSTAT® 蛋白聚集检测

  某些肽链在经过错误折叠后很容易形成聚集,在生物技术和制药领域,这些聚集会严重影响蛋白的生产和应用。许多以蛋白多肽为基础研发的药物具有极大的应用前景,可是蛋白因错误折叠而导致构象发生变化形成聚集,使蛋白失活,最终影响药物疗效,造成不可估计的损失。污染物导致的蛋白聚集包括宿主细胞蛋白、非蛋白微粒和蛋白的损伤形式。

  基于此 Enzo Life Sciences 推出了新产品 PROTEOSTAT® Protein Aggregation Assay,内含红色荧光信号染料,可特异性结合聚集蛋白,进行检测。具有广泛的检测范围,可有效检测可见和不可见的蛋白微粒。



 ◆原理

  蛋白聚集严重影响以蛋白为基础研发的药物。在药物制剂中,蛋白聚集在生物活性和免疫原性方面影响药效。

  蛋白聚集发生在生产过程的各个阶段包括细胞培养、纯化、生产、储存、运输等方面。制药工业希望在生物工艺中找到新的方法,可用于检测、追踪、定量分析影响蛋白聚集的因素。

  近年来以冻干稳定形式存在的蛋白聚集体作为标准品,可以准确地定量检测蛋白聚集,加上新颖的只需在酶标仪里即可实验的 PROTEOSTAT® protein aggregation assay,可对蛋白检测方法进行优化。

  在这篇文章中,使用已知浓度的聚集 IgG 标准品作为标准曲线,通过 PROTEOSTAT® protein aggregation assay/standards 对 IgG 的聚集水平进行检测,集中分析了制药工业中常见的3种聚集形式。

  ●    热诱导聚集

  ●    机械诱导聚集

  ●    冷冻和反复冻融诱导聚集


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay

◆优点特色


 ● 高通量筛选方法用于流式细胞仪平台监测蛋白稳定性

 ● 在荧光微孔板中即可进行简单、灵敏、均一地检测

 ● 不需分离目的蛋白或稀释样品

 ● 与传统蛋白聚集检测染料相比更灵敏,信号更明亮

 ● 优化的缓冲液和辅料用于蛋白制剂研发

 ● 检测灵敏度可低至亚微摩尔级别,含量在1%-5%的聚集蛋白也能被检测出

 ● 在广泛的 PH(4-10)和离子强度范围都可使用,提供至少两个数量级的线性动态范围

 ● 使用 PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测标准品可对溶液中的聚集蛋白精确定量

 ● 可检测蛋白多肽聚集程度,可用于筛选蛋白聚集激活剂或抑制剂


在蛋白聚集实验研究中,将 PROTEOSTAT® protein aggregation assay 和 Synergy Mx Multi-Mode Microplate reader 联用,可适合用于监测由温度、机械损伤和反复冻融所引起的蛋白聚集。

稳定的蛋白颗粒作为标准品可快速建立标准曲线,加快定量分析蛋白聚集响应。这个检测方法能够可靠地检测到浓缩抗体制剂中小于 0.2% 的聚集蛋白,线性动态范围为2个数量级。

PROTEOSTAT® protein aggregation assay 和 PROTEOSTAT® protein aggregation standards 检测蛋白聚集特点在于操作简单,能够检测低水平的蛋白聚集情况,只需 30 分钟,就能够得到完整的分析结果。


案例一


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay


不同搅拌速率对蛋白聚集的影响


案例二


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay


蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集

使用本产品检测后,可知搅拌速度越快,蛋白聚集程度越大。

蓝色曲线为对照,没有搅拌速度在 300 rpm 下,绿色曲线与红色曲线分别表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情况与天然蛋白的聚集情况。使用本产品检测后,可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。

使用流式细胞仪结合PROTEOSTAT® 蛋白聚集分析试剂盒使用例


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay


A PROTEOSTAT® 蛋白聚集分析试剂盒检测 IgG 聚集标准品 B PROTEOSTAT® 蛋白聚集分析试剂盒检测硅油滴 C PROTEOSTAT® 蛋白聚集分析试剂盒检测 IgG 聚集标准品和硅油滴的混合物。

使用流式细胞仪结合 PROTEOSTAT® 蛋白聚集分析试剂盒检测 IgG 聚集标准品,可与其他非蛋白微粒如油滴区别开来,且无须考虑样品微粒大小(经检测 >97% 的 IgG 聚集标准品都小于2μm)。

案例・应用

材料和方法

  

Enzo Life Sciences 推出了 PROTEOSTAT® protein aggregation assay 和 PROTEOSTAT® protein aggregation standards,利用荧光分子信号染料可特异性结合聚集蛋白和多肽,在微孔板中即可检测。

探针在溶液中是不发出荧光的,当与聚集蛋白的四级结构结合时会发出明亮的荧光。一旦聚集标准品发生重组,它们将含有0-12.5% 的聚集蛋白,总蛋白浓度维持在1mg/mL。

通过粒子分析成像鉴定标准品发现90%的蛋白聚集体长度为2-10 μm,约9%的蛋白聚集体长度为 10-20 μm,约 0.7% 的蛋白聚集体为长度大于 20 μm。

Synergy™ Mx Multi-Mode Microplate Reader(BioTek Instruments)可用于所有蛋白聚集分析。它的激发波长为 500 nm,发射波长为 600 nm,激发和发射狭缝宽度为 9 nm,便于检测 PROTEOSTAT® 染料。Thioflavin T 染料可以在激发单色器激发波长为 435 nm,发射波长为 495 nm,都在激发和发射狭缝宽度为 9 nm 的条件下进行检测。

 


结果


在 96 孔微板中检测比较 PROTEOSTAT® 和 Thioflavin T 染料与蛋白聚集的结合能力。纯化的兔抗羊 lgG(4.26 mg/mL)在 pH 2.7 的盐酸水溶液中,80℃ 温度下孵育 90 分钟后会形成蛋白聚集体。

聚集信号由聚合体和单体混合比例不同决定的,但总的 lgG 蛋白浓度仍然是 60 μg/mL。在 50 mM 磷酸钾,pH 7,3 μM ProteoStat 检测试剂或 5 μM Thioflavin T 染料中读数。这些浓度在以前做过预实验,已经确定是最优的浓度。

在蛋白和染料一起孵育 15 分钟后使用 BioTek Synergy Mx Microplate Reader 读数。所用的板为 Greiner µClear® black,clear bottom 96-well microplates (Greiner Bio One)。

在相同情况下,PROTEOSTAT® 染料的荧光强度比 Thioflavin T 染料高 100 倍。对于浓度为 1.2 μg/mL的聚集体,ProteoStat 染料的信噪比为 12.8,而 Thioflavin T 染料的信噪比仅为 1.2,表明 PROTEOSTAT® 染料在蛋白聚集检测中更准确、灵敏度更高。

正因为由此显著的优势,PROTEOSTAT® protein aggregation assay 和 ProteoStat protein aggregation standards 通常能够共同用于各种常规形式的蛋白聚集检测。

 


监控热诱导聚集


当蛋白受到提高温度刺激会加速其聚集。羊 lgG(4 mg/mL)在各个时期都处于搅拌速度 400 rmp,100 mM 磷酸钠,pH 7.2,温度 60℃ 下。

在每个时间点,25 μL lgG 用于测量。首先样本在 1× assay buffer 中稀释4倍后,得到的蛋白最终浓度为 1 mg/mL 。在每个孔中加入 98 μL 的检测蛋白和 2 μL 的 PROTEOSTAT® Detection Reagent Loading Solution,每个时间点都做平行孔。

同时,PROTEOSTAT® protein aggregation standards 中含有稳定的、高质量的对照样本,用来做标准曲线。

如图1所示,使用 PROTEOSTAT® 染料检测羊 lgG 在热诱导下的聚集情况,生成的曲线表明不同阶段 lgG 蛋白聚集的情况。

在刚开始阶段蛋白聚集情况较少,接着观察到生长阶段聚集体开始形成,最后生长率降低直至变成0,表明蛋白单体已几乎消失,差不多完全形成聚集体。


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay

1:热诱导羊 IgG 蛋白聚集

 


监控机械诱导聚集


虽然普遍认为机械搅拌会加速蛋白聚集形成,但目前机械外力造成蛋白聚集形成的原理还不是十分明确。在药物研发中,可能受到抽真空或者过滤等产生的机械外力使蛋白药物形成聚集。

羊抗鼠 lgG(10 mg/mL)溶解在含有 10 mM 的磷酸钠,150 mM Nacl,0.05% 叠氮化钠,pH 7.2 的溶液中。机械搅拌的实验条件如下:室温、4 mL 的平底褐色玻璃瓶中加入 200 μL lgG 溶液,使用 Variomag® Poly electronic stirrer(2Mag-USA),以 990 rpm 速度进行搅拌。搅拌棒体积为1.0×0.4×0.2 cm3

在每个时间点,取10 μL lgG 用于检测。样品在 1×assay buffer 中稀释 10 倍后,得到的蛋白最终浓度为 1 mg/mL。在每个孔中加入 98 μL 的检测蛋白和 2 μL 的 PROTEOSTAT® Detection Reagent Loading Solution,每个时间点都做平行孔。

用 PROTEOSTAT® protein aggregation standards 作为标准曲线,定量检测机械搅拌诱导产生的蛋白聚集。在上述实验条件下,蛋白聚集与时间成正比例关系(图2)。


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay

2:机械诱导样抗鼠 IgG 蛋白聚集

 


监控冷冻和反复冻融诱导聚集


冷冻对于蛋白稳定是至关重要的,因为在冷冻过程中会导致溶液的浓度发生变化。羊抗鼠 lgG(10 mg/mL)溶解在 10mM 的磷酸钠,150 mM Nacl,0.05% 叠氮化钠,pH 7.2 的溶液中。样品保存在 -20℃,反复冻融数次。

在每个时间点,取10 μL lgG 用于检测。样品在 1×assay buffer 中稀释 10 倍后,得到的蛋白最终浓度为 1 mg/mL。在每个孔中加入 98 μL 的检测蛋白和 2 μL 的 PROTEOSTAT® Detection Reagent Loading Solution,每个时间点做平行孔。

用 PROTEOSTAT® protein aggregation standards 作标准曲线,定量检测反复冻融诱导产生的蛋白聚集体。实验表明反复冻融也会诱导产生蛋白聚集。与热诱导引起蛋白聚集一样,会观察到一条S型曲线图。


PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测                              PROTEOSTAT® Protein aggregation assay

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-51023-KP050 PROTEOSTAT® Protein aggregation assay
 PROTEOSTAT ®  蛋白聚集检测
50 tests
ENZ-51023-KP002 PROTEOSTAT® Protein aggregation assay 2×96 tests

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

蛋白聚集小体检测试剂盒PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit

 


◆原理


PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

聚集小体(Aggresome)是由一群不正常堆叠在一起的蛋白质所形成的包涵体(Inclusion Bodies)。聚集小体的出现往往也表明细胞正处于某种应激状态,比如高温、病毒感染、活性氧自由基攻击等。聚集体通常是响应细胞应激而形成,并通过分离错误折叠的蛋白质提供细胞保护机制,最终导致它们被自噬清除。此外,蛋白质聚集体的形成是多种人类疾病的标志,例如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症、肌萎缩侧索硬化症或酒精性肝病。

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit中包含的 PROTEOSTAT® 是一种分子转子染料,在溶液中沿着单个中心键的自由分子内旋转可防止荧光产生。当它特异地插入到错误折叠和聚集的蛋白中的交叉β-sheet四级结构中,旋转受到抑制并导致发出强烈的荧光。

PROTEOSTAT® 聚集小体检测试剂盒提供了一种快速、特异、定量的方法来标记细胞中的聚集小体,且无需进行人工蛋白定点突变。PROTEOSTAT® 染料已在广泛的条件下对多种小分子调节剂进行验证,适用于具有治疗价值的化学物的筛选。此外,本试剂盒还适用于多重免疫荧光,以在自噬和聚集体形成的背景下研究您的目标分子。

◆试剂盒组成

组分

包装

PROTEOSTAT® Aggresome Detection Reagent

10 μL

Hoechst 33342 Nuclear Stain

50 μL

Proteasome Inhibitor (MG-132)

120 nM

10×Assay Buffer

25 mL

 ◆特点


● 提供基于细胞的灵敏的药物反应性测定,以在真实的细胞环境中识别与神经退行性疾病相关的抑制剂

● 可靠且简单的检测,不需要非生理性蛋白质突变或基因工程细胞系

● 作用条件广泛,适用于筛选具有潜在治疗价值的小分子化合物

● 已进行优化以兼容免疫染色

● 可通过流式细胞术轻松量化聚集体和相关包涵体

● 可用于神经退行性疾病、肝病、毒理学研究等的研究 

 ◆案例・应用

 

■ 应用实例 1:流式细胞术检测聚集小体

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

流式细胞术的分析:Jurkat细胞在37°C下用 0.2% DMSO对照或用5 µM MG-132诱导过夜。处理后,将细胞固定并与PROTEOSTAT® 染料一起孵育,无需洗涤即通过流式细胞术在FL3通道中使用488 nm激光进行分析。在 MG-132处理的细胞中,红色荧光信号增加约3倍。所描述的测定允许评估蛋白质聚集的影响。



■ 应用实例 2:PROTEOSTAT® 染料与荧光染料的应用


PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒


荧光显微镜:含有蛋白聚集体的HeLa细胞,用 5 µM MG-132蛋白酶体抑制剂(右)处理12小时,通过 PROTEOSTAT®(红色)检测并用Hoechst 33342复染。左侧的为未经处理的对照。



PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒


荧光显微镜:含有蛋白聚集体的HeLa细胞,用 5μM MG-132蛋白酶体抑制剂处理12小时,通过PROTEOSTAT® 聚集体染料(左上)检测,显示与荧光素-p62抗体(右上)和复合图像(中下)的共定位



■ 应用实例 3:不同搅拌速率对蛋白聚集的影响

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

使用本产品检测后,可知搅拌速度越快,蛋白聚集程度越大。

■ 应用实例 4蛋氨酸氧化可抑制蛋白聚集

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

蓝色曲线为对照,没有搅拌;在搅拌速度在300 rpm下, 绿色曲线与红色曲线分别表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情况。

使用本产品检测后,可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。

■ 应用实例 5 内质网应激相关细胞自噬产生蛋白聚集小体

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

分别25,50,75 mmCQ,100 nM的thapsigargin(TG)或5mM的MG-132处理K562细胞24小时。然后在温室下用PROTEOSTAT® (1:10,000)固定并透化细胞30min。接着在BD流式细胞仪LSR II的蓝色610/20 nm的通道分析细胞(30,000)。

图片来源:Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.

■ 应用实例 6

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

K562 细胞分别使用Thapsigargin (Tg, 0.1 µM)、25、50 和 75 µM 氯喹 (CQ) 用试剂处理以诱导内质网应激和不完全自噬 24 h。使用蛋白酶体抑制剂 MG-132 (5 µM) 作为阳性对照处理24 h。将沉淀的细胞固定并透化。然后,根据制造商的说明,使用 300 µL PROTEOSTAT® 和 1 µg/mL DAPI(用于细胞周期测定)在室温下标记细胞30min。确定每个处理的S期的 Aggresome 倾向因子 (APF) 高于G1和高于S期的G2m的相对增加,并与对照值进行比较。与对照组相比,ER 应激诱导剂、Tg 和 50 µM CQ在S期比G1更能引起蛋白聚集体上调,但蛋白酶体抑制剂 MG-132 和 50 µM CQ 在 G2m 期比S期更显著地下调聚集体。

图片来源:Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit                              蛋白聚集小体检测试剂盒

PROTEOSTAT® Aggresome Detection Kit

PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测试剂盒 Q&A


1.Q: PROTEOSTAT® 热稳定检测试剂盒(ENZ-51027),蛋白聚集检测试剂盒(ENZ-51023)

1.Q: PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测试剂盒(ENZ-51035)的区别?

1.A: 1)PROTEOSTAT®染料属于分子轮子染料(molecular rotor dye)。在溶液状态不发荧光(由于在中心的碳-碳单键周围的自由转动,

                    分离了探针的不同芳香部分)。由于分子轮子染料接触到蛋白聚集体后,会封闭进入原纤维,形成β折叠,具有高强度荧光。类似于

                    染核酸碱基的EB 一样。

1.A: 2)PROTEOSTAT® 热稳定检测试剂盒(ENZ-51027)用于直接监测热诱导蛋白变性引起的蛋白聚集,不检测蛋白非折叠而暴露的疏

                    部分。该试剂盒用于检测蛋白缓冲液,其他添加成分对蛋白稳定性的影响,在特定条件下多少温度时蛋白会聚集。

1. A 3)蛋白聚集检测试剂盒(ENZ-51023)用于检测液体状蛋白或者多肽形成聚集的情况。可用于确认蛋白保存的最优形态,筛选促进或

                    者抑制蛋白聚集的试剂,检测分子伴侣的活性。与标准品或者已知浓度样品一起使用,可定量检测蛋白聚集。

1. A 4)PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测试剂盒(ENZ-51035)检测变性蛋白,包括活细胞内聚集体或者聚集体样包涵体。PROTEOSTAT® 

                    蛋白聚集检测染料在聚集小体形成时,接触到聚集蛋白时会变的更明亮,可用流式或者荧光显微镜检测。


2.Q: 使用ENZ-51035 时,是否可以终止并在在40℃过夜保存,第二天继续实验?

  A: 建议可以在加染料前终止。荧光强度在液体中会成倍降低。而且染料与蛋白长时间孵育后,会影响蛋白聚集。


3.Q: 阳性对照染色不好。

  A: 染料没有避光保存。染色时候没有避光,需要染色后立即检测。聚集蛋白不是液体。延长离心会使聚集蛋白沉淀。不要离心聚集蛋

                白(样品或者对照)。


4.Q: 蛋白信号饱和。

  A: 蛋白样品的浓度很高。用1×Assay Buffer 稀释样品。


5.Q: 阴性对照观察到高荧光强度。

  A: 样品含有干扰物质。该试剂可以与常规使用的缓冲液(PBS,Tris,HEPES)和赋形剂(海藻糖和蔗糖)使用,不过不要使用高浓度的吐温 

                20(比如:0.2%)


6.Q: 蛋白与PROTEOSTAT® 检测试剂结合是否是可逆的?

  A: PROTEOSTAT® 检测试剂与聚集蛋白的相互作用是非供价结合。所以,理论上是可逆的。但是我们没有尝试将染料从样品中去除。


7.Q: 在药物应激检测中,细胞是否可以经胰酶消化后去检测细胞中的蛋白聚集?

  A: 胰酶可以与PROTEOSTAT® 聚集检测试剂盒配套使用。细胞消化后,表面活性剂加入给细胞打孔。更大的聚集体仍然是不溶的,可

                以通过离心沉淀。小的聚集体通过超滤分离。表面活性剂,膜和可溶蛋白可洗掉,PROTEOSTAT® 检测试剂可用于残留蛋白。


8.Q: 在研究细胞蛋白聚集时,如何设置阳性对照?

  A: MG 132 处理的细胞可作为阳性对照。


9.Q: 细胞裂解液是否可用PROTEOSTAT® 蛋白聚集检测试剂检测?

  A: 检测细胞裂解液是有挑战的,表面活性剂会引起高背景。可以过滤去除表面活性剂。更大的聚集体仍然是不可溶的,可以通过

                离心沉淀。小的聚集体通过超滤分离。表面活性剂,膜和可溶蛋白可洗掉,PROTEOSTAT® 检测试剂可用于残留蛋白。


10.Q:   PROTEOSTAT® 染料是否可以检测~300kDa 的蛋白二聚体?

   A: PROTEOSTAT® 可以检测从单体到二聚体转变的蛋白,结合分子筛层析法。但是信号会变的更强烈,因为聚集体更大。


11.Q: 如果样品稀释到低浓度(比如0.5mg/mL)是否会改变聚集蛋白的百分比含量?

   A: 聚集蛋白的百分比(聚集蛋白占总蛋白的比例)将保持不变。聚集蛋白的浓度会降低,信号也会减弱。

   A: 如果用未聚集蛋白稀释样品,聚体蛋白的百分比会变化。


12.Q: PROTEOSTAT® 试剂盒是否可用于研究原核细胞样品的蛋白聚集?

   A: 如果膜部分去除的话,是可以检测原核细胞的。如果膜没有分离,染料会聚集在膜上,引起高背景值。


13.Q: PROTEOSTAT® 是否可检测革兰氏阴性菌的蛋白聚集?

   A: 革兰氏阴性菌外层膜的脂多糖会影响。操作手册中提到的打孔缓冲液将移除大多数细菌的内层膜,破坏革兰氏阴性菌的外层膜。所以

                   可以观察革兰氏阴性菌的聚集和包涵体。


14.Q:   当其他蛋白共染时,如何优化减少FITC 发射过滤装置的信号?

   A: 染料的激发和发射光谱见操作手册P8。光谱显示会与FITC 有些重叠。FITC 可以与该染料一起使用,用488nm激发波长和515nm 发

                   射波长。如果FITC 有荧光的话就会起作用。否则,PROTEOSTAT® 染料会有溢出。建立设立一个不带有FITC 标记的抗体作为对照。

                   另外,可用Cy5 或者Coumarin 标记的抗体解决这个问题。

1.

A fast and specific method to screen for intracellular amyloid inhibitors using bacterial model systems: S. Navarro, et al.; Eur. J. Med. Chem. (2015), Application(s): Confocal microscopy, Abstract;


2.

Amyloidogenic lysozymes accumulate in the endoplasmic reticulum accompanied by the augmentation of ER stress signals: Y. Kamada, et al.; Biochim. Biophys. Acta 1850, 1107 (2015), Application(s): Microscopy, Abstract;

Conophylline protects cells in cellular models of neurodegenerative diseases by inducing mammalian target of rapamycin (mTOR)-independent autophagy: Y. Sasazawa, et al.; J. Biol. Chem. 290, 6168 (2015), Abstract;


3.

Decreased proteasomal function accelerates cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice: Y. Yamada, et al.; Lab. Invest. 95, 625 (2015), Application(s):Aggresome detection by fluorescence microscopy in fibroblasts, Abstract;


4.

Defective autophagy is a key feature of cerebral cavernous malformations: S. Marchi, et al.; EMBO Mol. Med. 7, 1403 (2015), Application(s): Aggresome detection in aggregated proteins and aggresome‐like inclusion bodies in fixed and permeabilized samples,AbstractFull Text

5.

Fibril growth and seeding capacity play key roles in α-synuclein-mediated apoptotic cell death: A.L. Mahul-Mellier, et al.; Cell Death Differ. 22, 2107 (2015), Abstract;


6.

In vitro administration of gold nanoparticles functionalized with MUC-1 protein fragment generates anticancer vaccine response via macrophage activation and polarization mechanism: T. Mocan, et al.; J. Cancer 6, 583 (2015), Application(s): Aggresome detection by fluorescence microscopy in peritoneal macrophages, AbstractFull Text

7.

Intensified autophagy compromises the efficacy of radiotherapy against prostate cancer: M.I. Koukourakis, et al.; Biochem. Biophys. Res. Commun. 461, 268 (2015),Application(s): Fluorescence microscopy , Abstract;

Mevalonate pathway regulates cell size homeostasis and proteostasis through autophagy: T.P. Miettinen, et al.; Cell Rep. 13, 2610 (2015), Application(s): Flow cytometry analysis of protein aggregation using Jurkat, U2OS, Kc167 and HUVEC cells, Abstract;


8.

MiR-29b replacement inhibits proteasomes and disrupts aggresome+autophagosome formation to enhance the antimyeloma benefit of bortezomib: S. Jagannathan, et al.; Leukemia 29, 727 (2015), Application(s): Detection of protein aggregates by fluorescence microscopy in multiple myeloma cell lines, Abstract; Full Text

9.

Molecular chaperone GRP78 enhances aggresome delivery to autophagosomes to promote drug resistance in multiple myeloma: M.A. Abdel Malek, et al.; Oncotarget 6, 3098 (2015), Application(s): Confocal Microscopy, AbstractFull Text

10.

Monitoring of dipeptidyl peptidase-IV (DPP-IV) activity in patients with mucopolysaccharidoses types I and II on enzyme replacement therapy – Results of a pilot study: K. Hetmanczyk, et al.; Clin. Biochem. (2015), Application(s): Plasma DPP-IV enzyme assay, Abstract;


11.

Pressure overload-induced cardiac dysfunction in aged male adiponectin knockout mice is associated with autophagy deficiency: J.W. Jahng, et al.; Endocrinology 156, 1667 (2015),Abstract;

Protein kinase C-dependent growth-associated protein 43 phosphorylation regulates gephyrin aggregation at developing GABAergic synapses: C.Y. Wang, et al.; Mol. Cell. Biol.35, 1712 (2015), Abstract;

Schwann cells contribute to neurodegeneration in transthyretin amyloidosis: T. Murakami, et al.; J. Neurochem. 134, 66 (2015), Abstract;


12.

Cationic polystyrene nanospheres induce autophagic cell death through the induction of endoplasmic reticulum stress: H.W. Chiu, et al.; Nanoscale 7, 736 (2014), Abstract;

Direct visualization of HIV-enhancing endogenous amyloid fibrils in human semen: S.M. Usmani, et al.; Nat. Commun. 5, 3508 (2014), Application: Amyloid detection in semen,Abstract;


13.

Distinct patterns of HSP30 and HSP70 degradation in Xenopus laevis A6 cells recovering from thermal stress: S. Khan, et al.; Comp. Biochem. Physiol. A Mol. Integr. Physiol. 168, 1 (2014), Application(s): Detection of aggresomes in Xenopus laevis cells using fluorescence microscopy, Abstract;

Dynein function and protein clearance changes in tumor cells induced by a kunitz-type molecule, amblyomin-x: M.T. Pacheco, et al.; PLoS One 9, e111907 (2014), Application(s):Detection of aggresomes by flow cytometry, AbstractFull Text

14.

Higher vulnerability and stress sensitivity of neuronal precursor cells carrying an alpha-synuclein gene triplication: A. Flierl, et al.; PLoS One 9, e112413 (2014), Application(s):Detection of protein aggregates by fluorescence microscopy and flow cytometry in neuronal precursor cells, AbstractFull Text

15.

Human stefin B role in cell's response to misfolded proteins and autophagy: M. Polajnar, et al.; PLoS One 9, e102500 (2014), Application(s): Detection of protein aggregates in primary astrocytes, AbstractFull Text

16.

Novel estradiol analogue induces apoptosis and autophagy in esophageal carcinoma cells: E. Wolmarans, et al.; Cell Mol. Biol. Lett. 19, 98 (2014), Abstract;


17.

Preconditioning stimulus of proteasome inhibitor enhances aggresome formation and autophagy in differentiated SH-SY5Y cells: Y. Bang, et al.; Neurosci. Lett. 566, 263 (2014),Abstract;


18.

 Protein deubiquitination during oocyte maturation influences sperm function during fertilisation, antipolyspermy defense and embryo development: Y.J. Yi, et al.; Reprod. Fertil. Dev. (2014), Application(s): Detection of protein aggregates in oocytes, Abstract;


19.

Protein expression pattern of PAWP in bull spermatozoa is associated with sperm quality and fertility following artificial insemination: C.E. Kennedy, et al.; Mol. Reprod. Dev. 81, 436 (2014), Abstract;

Serine/threonine kinase 16 and MAL2 regulate constitutive secretion of soluble cargo in hepatic cells: J.G. In, et al.; Biochem. J. 463, 201 (2014), Abstract;


20.

SGTA regulates the cytosolic quality control of hydrophobic substrates: L. Wunderley, et al.; J. Cell. Sci. 127, 4728 (2014), Application(s): Dual staining with ProteoStat® dye, Abstract;Full Text

21.

T he small heat shock protein B8 (HSPB8) confers resistance to bortezomib by promoting autophagic removal of misfolded proteins in multiple myeloma cells: M. Hamouda, et al.; Oncotarget 5, 6252 (2014), Application(s): Analysis of velcade resistant multiple myeloma human cells by WB, Assay, AbstractFull Text

22.

Aldosterone and angiotensin II induce protein aggregation in renal proximal tubules: M.U. Cheema, et al.; Physiol. Rep. 1, e00064 (2013), Application(s): Labeling of kidney homogenates, labeled particles sorted by flow cytometry and identification by LC-MS/MS ,AbstractFull Text

23.

Covalent and allosteric inhibitors of the ATPase VCP/p97 induce cancer cell death: P. Magnaghi, et al.; Nat. Chem. Biol. 9, 548 (2013), Application(s): Detection of aggresomes in human colon carcinoma HCT116 cells using fluorescence microscopy, Abstract;


24.

Environmental stresses induce misfolded protein aggregation in plant cells in a microtubule-dependent manner: Y. Nakajima, et al.; Int. J. Mol. Sci. 14, 7771 (2013),Application(s): Detection of aggresomes using fluorescence microscopy, AbstractFull Text

25.

In vitro changes in mitochondrial potential, aggresome formation and caspase activity by a novel 17-β-estradiol analogue in breast adenocarcinoma cells: D.S. Nkandeu, et al.; Cell. Biochem. Funct. 31, 566 (2013), Abstract;

Increased generation of cyclopentenone prostaglandins after brain ischemia and their role in aggregation of ubiquitinated proteins in neurons: H. Liu, et al.; Neurotox. Res. 24, 191 (2013), Abstract;

26.

Macrolide antibiotics block autophagy flux and sensitize to bortezomib via endoplasmic reticulum stress-mediated CHOP induction in myeloma cells: S. Moriya, et al.; Int. J. Oncol.42, 1541 (2013), Application(s): Detection of aggresomes using flow cytometry, Abstract;Full Text

27.

Mst1 inhibits autophagy by promoting the interaction between Beclin1 and Bcl-2: Y. Maejima, et al.; Nat. Med. 19, 1478 (2013), Application(s): Detection of aggresomes in mouse heart sections using fluorescence microscopy, AbstractFull Text

28.

N-terminally truncated forms of human cathepsin F accumulate in aggresome-like inclusions: B. Jeric, et al.; Biochim. Biophys. Acta 1833, 2254 (2013), Application(s):Detection of aggresomes using fluorescence microscopy, Abstract;


29.

The ubiquitin proteasome system regulates the stability and activity of the glucose sensor glucokinase in pancreatic beta cells: A. Hofmeister-Brix, et al.; Biochem. J. 456, 173 (2013),AbstractFull Text

30.

VCP Phosphorylation-Dependent Interaction Partners Prevent Apoptosis in Helicobacter pylori-Infected Gastric Epithelial Cells: C.C. Yu, et al.; PLoS One 8, e55724 (2013),Application(s): Aggresome detection in AGS human gastric epithelial cells, AbstractFull Text

31.

Zerumbone, an electrophilic sesquiterpene, induces cellular proteo-stress leading to activation of ubiquitin-proteasome system and autophagy: K. Ohnishi, et al.; BBRC 430, 616 (2013), Application(s): Aggresome detection in mouse hepatocytes, Abstract;


32.

Autophagy in idiopathic pulmonary fibrosis: A.S. Patel, et al.; PLoS One 7, e41394 (2012),Application(s): Detection of aggresomes in lung tissue sections using fluorescence microscopy, AbstractFull Text

33.

Decreased proteasomal activity causes age-related phenotypes and promotes the development of metabolic abnormalities: U. Tomaru, et al.; Am. J. Pathol. 180, 963 (2012),Abstract;


34.

Mutations in the area composita protein αT-catenin are associated with arrhythmogenic right ventricular cardiomyopathy: J. van Hengel, et al.; Eur. Heart J. 34, 201 (2012),Abstract;


35.

Quantitative analysis of α-synuclein solubility in living cells using split GFP complementation: A. Kothawala, et al.; PLoS One 7, e43505 (2012), Application(s):Aggresome detection in HeLa cells, AbstractFull Text

36.

Multiple aggregates and aggresomes of C-terminal truncated human αA-crystallins in mammalian cells and protection by αB-crystallin: I. Raju, et al.; PLoS One 6, e19876 (2011), Application(s): Aggresome detection in HeLa cells, AbstractFull Text

37.

Novel Cell- and Tissue-Based Assays for Detecting Misfolded and Aggregated Protein Accumulation Within Aggresomes and Inclusion Bodies: D. Shen, et al.; Cell Biochem. Biophys. 60, 173 (2011), AbstractFull Text

38.

Inhibitors of protein aggregation and toxicity: H. Amijee, et al.; Biochem. Soc. Trans. 37, 692 (2009), AbstractFull Text

39.

Autophagy-mediated clearance of aggresomes is not a universal phenomenon: E. Wong, et al.; Hum. Mol. Genet. 17, 2570 (2008), AbstractFull Text

40.

Chemical and biological approaches synergize to ameliorate protein-folding diseases: T.W. Mu, et al. ; Cell 134, 769 (2008), AbstractFull Text

41.

Inhibitors of the proteasome suppress homologous DNA recombination in mammalian cells: Y. Murakawa, et al.; Cancer Res. 67, 8536 (2007), Abstract;


42.

p62SQSTM1 forms protein aggregates degraded by autophagy and has a protective effect on huntingtin-induced cell death: G. Bjørkøy, et al.; J.Cell Biol. 171, 603 (2005), Full Text

43.

Therapeutic effects of cystamine in a murine model of Huntington's disease: A. Dedeoglu, et al.; J. Neurosci. 22, 8942 (2002), Full Text

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-51035-K100 PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 
PROTEOSTAT®蛋白聚集小体检测试剂盒
100 tests
ENZ-51035-0025 PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 
PROTEOSTAT® 蛋白聚集小体检测试剂盒
25 tests

PROTEOSTAT® Protein aggregation assay ProteoStat 蛋白聚集检测 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ENZ-51023-KP050

50 tests 2,950.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 定量检测蛋白聚集体(可见的或者在显微镜下可见的)

简单,灵敏,均一的检测方法。

可用流式细胞仪和荧光显微镜检测。

曾经检测的样品:20uM聚集的溶酶体,20uM天然溶酶体,含有5%聚集体。

试剂盒组分:ProteoStat®检测试剂(红色),ProteoStat® 阳性对照ProteoStat® 阴性对照,10×ProteoStat® 检测缓冲液。

可配套ProteoStat® Protein Aggregation Standards(ENZ-51039)使用。

规格:50次

PROTEOSTAT® Protein aggregation standards PROTEOSTAT® 蛋白聚集标准品 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ENZ-51039-KP002

2×96 wells 3,570.00


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 市面上唯一的蛋白聚集标准品。
蛋白聚集的标准品是IgG。试剂盒组分:
需要与ProteoStat® Protein Aggregation assay (产品货号 ENZ-51023) 配套使用。
试剂盒包括 12.5%, 6.25%, 3.13%, 1.56%, 0.78%, 0.39%, 0.20% 和0% 聚集的对照。
可用流式进行检测。