PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

发表于2024年5月7日由上海金畔生物科技有限公司

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Q&A
参考文献

蛋白聚集小体检测试剂盒 PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

PROTEOSTAT^® Aggresome detection kit

◆原理

聚集小体（Aggresome）是由一群不正常堆叠在一起的蛋白质所形成的包涵体（Inclusion Bodies）。聚集小体的出现往往也表明细胞正处于某种应激状态，比如高温、病毒感染、活性氧自由基攻击等。聚集体通常是响应细胞应激而形成，并通过分离错误折叠的蛋白质提供细胞保护机制，最终导致它们被自噬清除。此外，蛋白质聚集体的形成是多种人类疾病的标志，例如阿尔茨海默氏症、帕金森氏症、肌萎缩侧索硬化症或酒精性肝病。

PROTEOSTAT^® Aggresome detection kit中包含的 PROTEOSTAT^®是一种分子转子染料，在溶液中沿着单个中心键的自由分子内旋转可防止荧光产生。当它特异地插入到错误折叠和聚集的蛋白中的交叉β-sheet四级结构中，旋转受到抑制并导致发出强烈的荧光。

PROTEOSTAT^®聚集小体检测试剂盒提供了一种快速、特异、定量的方法来标记细胞中的聚集小体，且无需进行人工蛋白定点突变。PROTEOSTAT^®染料已在广泛的条件下对多种小分子调节剂进行验证，适用于具有治疗价值的化学物的筛选。此外，本试剂盒还适用于多重免疫荧光，以在自噬和聚集体形成的背景下研究您的目标分子。

◆试剂盒组成

组分	包装
PROTEOSTAT^® Aggresome Detection Reagent	10 μL
Hoechst 33342 Nuclear Stain	50 μL
Proteasome Inhibitor (MG-132)	120 nM
10×Assay Buffer	25 mL

◆特点

●　提供基于细胞的灵敏的药物反应性测定，以在真实的细胞环境中识别与神经退行性疾病相关的抑制剂

●　可靠且简单的检测，不需要非生理性蛋白质突变或基因工程细胞系

●　作用条件广泛，适用于筛选具有潜在治疗价值的小分子化合物

●　已进行优化以兼容免疫染色

●　可通过流式细胞术轻松量化聚集体和相关包涵体

●　可用于神经退行性疾病、肝病、毒理学研究等的研究

◆案例・应用

■　应用实例 1：流式细胞术检测聚集小体

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

流式细胞术的分析：Jurkat细胞在37°C下用 0.2% DMSO对照或用5 µM MG-132诱导过夜。处理后，将细胞固定并与PROTEOSTAT^® 染料一起孵育，无需洗涤即通过流式细胞术在FL3通道中使用488 nm激光进行分析。在 MG-132处理的细胞中，红色荧光信号增加约3倍。所描述的测定允许评估蛋白质聚集的影响。

■　应用实例 2：PROTEOSTAT^® 染料与荧光染料的应用

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

荧光显微镜：含有蛋白聚集体的HeLa细胞，用 5 µM MG-132蛋白酶体抑制剂（右）处理12小时，通过 PROTEOSTAT^®（红色）检测并用Hoechst 33342复染。左侧的为未经处理的对照。

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

荧光显微镜：含有蛋白聚集体的HeLa细胞，用 5μM MG-132蛋白酶体抑制剂处理12小时，通过PROTEOSTAT^®聚集体染料（左上）检测，显示与荧光素-p62抗体（右上）和复合图像（中下）的共定位

■　应用实例 3：不同搅拌速率对蛋白聚集的影响

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

使用本产品检测后，可知搅拌速度越快，蛋白聚集程度越大。

■　应用实例 4：蛋氨酸氧化可抑制蛋白聚集

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

蓝色曲线为对照，没有搅拌；在搅拌速度在300 rpm下，绿色曲线与红色曲线分别表示蛋氨酸被氧化后的蛋白聚集情况。

使用本产品检测后，可知蛋氨酸被氧化后可抑制蛋白聚集。

■　应用实例 5 ：内质网应激相关细胞自噬产生蛋白聚集小体

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

分别25，50，75 mmCQ，100 nM的thapsigargin（TG）或5mM的MG-132处理K562细胞24小时。然后在温室下用PROTEOSTAT® （1：10,000）固定并透化细胞30min。接着在BD流式细胞仪LSR II的蓝色610/20 nm的通道分析细胞（30,000）。

图片来源：Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.

■　应用实例 6

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

K562 细胞分别使用Thapsigargin (Tg, 0.1 µM)、25、50 和 75 µM 氯喹 (CQ) 用试剂处理以诱导内质网应激和不完全自噬 24 h。使用蛋白酶体抑制剂 MG-132 (5 µM) 作为阳性对照处理24 h。将沉淀的细胞固定并透化。然后，根据制造商的说明，使用 300 µL PROTEOSTAT^®和 1 µg/mL DAPI（用于细胞周期测定）在室温下标记细胞30min。确定每个处理的S期的 Aggresome 倾向因子 (APF) 高于G1和高于S期的G2m的相对增加，并与对照值进行比较。与对照组相比，ER 应激诱导剂、Tg 和 50 µM CQ在S期比G1更能引起蛋白聚集体上调，但蛋白酶体抑制剂 MG-132 和 50 µM CQ 在 G2m 期比S期更显著地下调聚集体。

图片来源：Courtesy of the Flow Cytometry Core Facility, Blizard Institute, Queen Mary University of London, London, UK.

PROTEOSTAT® Aggresome detection kit 蛋白聚集小体检测试剂盒

PROTEOSTAT^® Aggresome Detection Kit

PROTEOSTAT^® 蛋白聚集检测试剂盒 Q&A

1．Q：　PROTEOSTAT^® 热稳定检测试剂盒（ENZ-51027），蛋白聚集检测试剂盒（ENZ-51023）

1．Q：　和PROTEOSTAT^® 蛋白聚集检测试剂盒（ENZ-51035）的区别？

1．A：　1）PROTEOSTAT^®染料属于分子轮子染料（molecular rotor dye）。在溶液状态不发荧光（由于在中心的碳-碳单键周围的自由转动，

分离了探针的不同芳香部分）。由于分子轮子染料接触到蛋白聚集体后，会封闭进入原纤维，形成β折叠，具有高强度荧光。类似于

染核酸碱基的EB 一样。

1．A：　2）PROTEOSTAT^® 热稳定检测试剂盒（ENZ-51027）用于直接监测热诱导蛋白变性引起的蛋白聚集，不检测蛋白非折叠而暴露的疏

水部分。该试剂盒用于检测蛋白缓冲液，其他添加成分对蛋白稳定性的影响，在特定条件下多少温度时蛋白会聚集。

1．　A　3）蛋白聚集检测试剂盒（ENZ-51023）用于检测液体状蛋白或者多肽形成聚集的情况。可用于确认蛋白保存的最优形态，筛选促进或

者抑制蛋白聚集的试剂，检测分子伴侣的活性。与标准品或者已知浓度样品一起使用，可定量检测蛋白聚集。

1．　A　4）PROTEOSTAT^® 蛋白聚集检测试剂盒（ENZ-51035）检测变性蛋白，包括活细胞内聚集体或者聚集体样包涵体。PROTEOSTAT^®

蛋白聚集检测染料在聚集小体形成时，接触到聚集蛋白时会变的更明亮，可用流式或者荧光显微镜检测。

２．Q：　使用ENZ-51035 时，是否可以终止并在在40℃过夜保存，第二天继续实验？

　　A：　建议可以在加染料前终止。荧光强度在液体中会成倍降低。而且染料与蛋白长时间孵育后，会影响蛋白聚集。

３．Q：　阳性对照染色不好。

　　A：　染料没有避光保存。染色时候没有避光，需要染色后立即检测。聚集蛋白不是液体。延长离心会使聚集蛋白沉淀。不要离心聚集蛋

白（样品或者对照）。

４．Q：　蛋白信号饱和。

　　A：　蛋白样品的浓度很高。用1×Assay Buffer 稀释样品。

５．Q：　阴性对照观察到高荧光强度。

　　A：　样品含有干扰物质。该试剂可以与常规使用的缓冲液(PBS,Tris,HEPES)和赋形剂（海藻糖和蔗糖）使用，不过不要使用高浓度的吐温

20（比如：0.2%）

６．Q：　蛋白与PROTEOSTAT^® 检测试剂结合是否是可逆的？

　　A：　PROTEOSTAT^® 检测试剂与聚集蛋白的相互作用是非供价结合。所以，理论上是可逆的。但是我们没有尝试将染料从样品中去除。

７．Q：　在药物应激检测中，细胞是否可以经胰酶消化后去检测细胞中的蛋白聚集？

　　A：　胰酶可以与PROTEOSTAT^® 聚集检测试剂盒配套使用。细胞消化后，表面活性剂加入给细胞打孔。更大的聚集体仍然是不溶的，可

以通过离心沉淀。小的聚集体通过超滤分离。表面活性剂，膜和可溶蛋白可洗掉，PROTEOSTAT^® 检测试剂可用于残留蛋白。

８．Q：　在研究细胞蛋白聚集时，如何设置阳性对照？

　　A：　MG 132 处理的细胞可作为阳性对照。

９．Q：　细胞裂解液是否可用PROTEOSTAT^® 蛋白聚集检测试剂检测？

　　A：　检测细胞裂解液是有挑战的，表面活性剂会引起高背景。可以过滤去除表面活性剂。更大的聚集体仍然是不可溶的，可以通过

离心沉淀。小的聚集体通过超滤分离。表面活性剂，膜和可溶蛋白可洗掉，PROTEOSTAT^®检测试剂可用于残留蛋白。

１０．Q： PROTEOSTAT^® 染料是否可以检测~300kDa 的蛋白二聚体？

　　　A：　PROTEOSTAT^®可以检测从单体到二聚体转变的蛋白，结合分子筛层析法。但是信号会变的更强烈，因为聚集体更大。

１１．Q：　如果样品稀释到低浓度（比如0.5mg/mL）是否会改变聚集蛋白的百分比含量？

　　　A：　聚集蛋白的百分比（聚集蛋白占总蛋白的比例）将保持不变。聚集蛋白的浓度会降低，信号也会减弱。

　　　A：　如果用未聚集蛋白稀释样品，聚体蛋白的百分比会变化。

１２．Q：　PROTEOSTAT^® 试剂盒是否可用于研究原核细胞样品的蛋白聚集？

　　　A：　如果膜部分去除的话，是可以检测原核细胞的。如果膜没有分离，染料会聚集在膜上，引起高背景值。

１３．Q：　PROTEOSTAT^®是否可检测革兰氏阴性菌的蛋白聚集？

　　　A：　革兰氏阴性菌外层膜的脂多糖会影响。操作手册中提到的打孔缓冲液将移除大多数细菌的内层膜，破坏革兰氏阴性菌的外层膜。所以

可以观察革兰氏阴性菌的聚集和包涵体。

１４．Q：当其他蛋白共染时，如何优化减少FITC 发射过滤装置的信号？

　　　A：　染料的激发和发射光谱见操作手册P8。光谱显示会与FITC 有些重叠。FITC 可以与该染料一起使用，用488nm激发波长和515nm 发

射波长。如果FITC 有荧光的话就会起作用。否则，PROTEOSTAT^® 染料会有溢出。建立设立一个不带有FITC 标记的抗体作为对照。

另外，可用Cy5 或者Coumarin 标记的抗体解决这个问题。

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42.	p62SQSTM1 forms protein aggregates degraded by autophagy and has a protective effect on huntingtin-induced cell death: G. Bjørkøy, et al.; J.Cell Biol. 171, 603 (2005), Full Text
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产品编号	产品名称	产品规格	产品等级
ENZ-51035-K100	PROTEOSTAT^®Aggresome detection kit PROTEOSTAT^®蛋白聚集小体检测试剂盒	100 tests	–
ENZ-51035-0025	PROTEOSTAT^® Aggresome detection kit PROTEOSTAT^® 蛋白聚集小体检测试剂盒	25 tests	–

Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)酶试剂盒Takara

发表于2024年3月3日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	3788	Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)	100 Rxns each	￥1,188

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无标题文档

Transgene Detection Primer Set for Real Time (Mouse)

■ 制品内容（100次量^*1）

包含以下6对引物
GFP_primer-1^*2	(2 μM each)	500 μl
GFP_primer-2^*3	(2 μM each)	500 μl
lacZ_primer-1^*4	(2 μM each)	500 μl
lacZ_primer-2^*4	(2 μM each)	500 μl
Reference_primer-1^*5	(2 μM each)	500 μl
Reference_primer-2^*6	(2 μM each)	500 μl

1 使用TB Green Premix ExTaq* II试剂配制25 μl反应体系的使用次数。
*2 GFP_primer-1是在EGFP和AcGFP1相同序列区域设计的引物对 (Primer Mix)。
*3 GFP_primer-2是在EGFP特异区域设计的引物对 (Primer Mix)，不能检出AcGFP1基因。
*4 lacZ_primer-1，2是分别在lacZ (β-galactosidase)基因两个不同区域设计的引物对 (Primer Mix)。
*5 Reference_primer-1是扩增小鼠第15号染色体上的Ywhaz 基因一部分的引物对 (Primer Mix)。
*6 Reference_primer-2是扩增小鼠第4号染色体上的Raver2 基因一部分的引物对 (Primer Mix)。

■ 各制品信息

Primer名称	扩增片段大小
GFP_primer-1	127 bp
GFP_primer-2	162 bp
lacZ_primer-1	96 bp
lacZ_primer-2	141 bp
Reference_primer-1	115 bp
Reference_primer-2	89 bp

■ 制品说明

转基因鼠中作为导入基因的报告基因，GFP (EGFP、AcGFP1) 和lacZ 基因被广泛使用。通过Real Time PCR方法对报告基因进行检测，可以筛选导入基因个体。
本制品中还含有作为内参照使用的小鼠基因组DNA检测用的Primer Mix （检测Ywhaz基因和Raver2基因），使用Primer Mix （检测Ywhaz基因和Raver2基因）可以应用相对定量法对各种样品间导入的基因量进行比较。

■ 保存

-20℃。

页面更新：2021-02-08 15:00:18

ミトコンドリア膜電位検出キット JC-1 MitoMP Detection Kit　同仁化学研究所

发表于2023年12月27日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

JC-1 MitoMP Detection Kit

05 細胞染色用色素

JC-1 MitoMP Detection Kit

細胞染色用色素
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

ミトコンドリア膜電位検出キット

製品コード

MT09　 JC-1 MitoMP Detection Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥23,800	349-09401

キット内容

1 set	JC-1 Dye Imaging Buffer (10x)	100 nmol x1 11 ml x1

試験成績書

SDSダウンロード

ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

技術情報の目次

なぜミトコンドリア膜電位が見られているか
JC-1の化学構造と性質
操作の流れ
初めてでも使いやすい
実験例：脱分極による評価
実験例：アポトーシス誘導時の評価
実験例：ミトコンドリアスーパーオキサイドと膜電位の同時測定
実験例：マイトファジー誘導とミトコンドリア膜電位変化の検出
実験例：ミトコンドリア膜電位、老化、細胞周期との関連性

実験例：ミトコンドリア膜電位、老化、細胞周期との関連性

細胞周期のG2/M 期に作用して細胞増殖を停止させ、細胞老化を誘導することが知られているDoxorubicin(DOX) をA549 細胞へ添加後、Cell Cycle Assay Solution Blue （製品コード：C549）/ Deep Red（製品コード：C548）でA549 細胞における細胞周期の変化と、Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal（製品コード：SG03）で細胞老化、本製品でミトコンドリア膜電位の変化を確認しました。

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

Cell Cycle Assay Solution Blue
老化細胞検出キット

Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（U2OS, HeLa）	蛍光顕微鏡	T. Namba, "BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites ", Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386.
2)	細胞（Neuron）	蛍光顕微鏡	I. Kawahata, L. Luc Bousset, R. Melki and K. Fukunaga , "Fatty Acid-Binding Protein 3 is Critical for α-Synuclein Uptake and MPP⁺-Induced Mitochondrial Dysfunction in Cultured Dopaminergic Neurons ", Int J Mol Sci., 2019, 20, 5358.
3)	細胞（3T3L1, C2C12）	プレートリーダー	M. Kurano, K. Tsukamoto, T. Shimizu, H. Kassai, K. Nakao, A. Aiba, M. Hara and Yatomi , "Protection Against Insulin Resistance by Apolipoprotein M/Sphingosine 1-Phosphate ", Diabetes, 2020, DOI: 10.2337/db19-0811.
4)	細胞（ALM)	プレートリーダー	T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner , "The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.", Cancer Discov, 2019, 9,
5)	細胞（マクロファージ)	蛍光顕微鏡	G. Yang, M. Fan, J. Zhu, C. Ling, L. Wu, X. Zhang, M. Zhang, J. Li, Q. Yao, Z. Gu and X. Cai, "A multifunctional anti-inflammatory drug that can specifically target activated macrophages massively deplete intracellular H₂O₂and produce large amounts CO for a highly efficient treatment of osreoarthritis" , Biomaterials, 2020, doi:10.1016/j.biomaterials.2020.120155.
6)	細胞（ARPE-19)	蛍光顕微鏡	J. H. Quan, F. F. Gao, H. A. Ismail, J. M. Yuk, G. H. Cha, J. Q. Chu and Y. H. Lee, "Silver Nanoparticle-Induced Apoptosis in ARPE-19 Cells Is Inhibited by Toxoplasma gondii Pre-Infection Through Suppression of NOX4-Dependent ROS Generation", Int J Nanomedicine , 2020, 15, 3695–3716.
7)	細胞（A549)	フローサイトメーター	C. N. D’Alessandro-Gabazza, T. Yasuma, T. Kobayashi, M. Toda1, A. M. Abdel-Hamid, H. Fujimoto, O. Hataji, H. Nakahara, A. Takeshita, K. Nishihama, T. Okano, H. Saiki, Y. Okano, A. Tomaru, V. F. D’Alessandro, M. Shiraishi, A. Mizoguchi, R. Ono, J. Ohtsuka, M. Fukumura, T. Nosaka, X. Mi, D. Shukla, K. Kataoka, Y. Kondoh, M. Hirose, T. Arai, Y. Inoue, Y. Yano, R. I. Mackie, I. Cann and E. C. Gabazza, "Inhibition of lung microbiota-derived proapoptotic peptides ameliorates acute exacerbation of pulmonary fibrosis", Nat. Comm., 2022, doi:10.1038/s41467-022-29064-3.

よくある質問

Q 1キットあたりの使用回数の目安は？

目安となる使用回数の目安は、下記を参考にしてください。

装置	容器	回数	液量
フローサイトメーター	－	100回	0.5 ml/回
蛍光顕微鏡マイクロプレートリーダー	35 mm dish	25 枚	2 ml/枚
	8 well チャンバースライド	30 枚	200 µl/well
	96 well マイクロプレート	5 枚	100 µl/well

* 容器毎で使用する液量によって使用回数は変わります。容器と液量を予め確認の上、ご使用ください。

Q JC-1染色後の細胞の洗浄には、HBSSの代わりにPBSを使用できますか？: A

細胞へのダメージを軽減するため、HBSSの使用を推奨しております。HBSSがお手元にない場合は培地での洗浄を推奨します。

Q 血清入り培地を使用してもいいですか？: A

細胞洗浄やWorking Solutionに血清入り培地を使用して頂いて構いません。蛍光観察時はImaging Bufferを推奨しますが、血清入り培地をご使用の場合はフェノールレッド不含培地を推奨します。

Q 染色後の細胞固定化、または細胞固定化後の染色は可能ですか？: A

固定化によりミトコンドリアが脱分極するため、染色後の固定及び固定化後の染色は出来ません。

Q 薬剤処理したサンプルをコントロールと比較したところ、赤と緑の両方の蛍光値が増加(又は減少)しました。結果をどのように解釈すればよいのでしょうか？: A

赤色と緑色の蛍光比を比較してください。
薬剤処理サンプルとコントロールの各々で赤色蛍光値/緑色蛍光値の比を算出してください。
両者を比較して蛍光比が低い程ミトコンドリア膜電位が低下していると考えられます。

(赤/緑の比で評価する理由)
JC-1は膜電位依存的に細胞に蓄積するため、細胞の状態により細胞あたりのJC-1の濃度は異なる場合があります¹⁾²⁾。(コントロールと薬剤処理サンプルでは細胞の状態が異なるため、JC-1の蓄積濃度が異なります。)
また、JC-1はミトコンドリア膜電位が高い状態では凝集し緑から赤色に蛍光がシフトします。この凝集体の量は膜電位の程度に依存する³⁾ことから、赤/緑の比でサンプル間のミトコンドリア膜電位を比較することができます。

＜参考文献＞
1)   Cossarizza, A. et al., Biochem Biophys Res Commun., 1993, 197(1), 40.
2)   Perelman, A. et al., Cell Death and Disease, 2012, 3, e430
3)   Smiley, S. T. et al., Proc. Nail. Acad. Sci., 1991, 88, 3671.

取扱条件

取扱条件
1.安衛法, 2.保存方法：冷蔵

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TaKaRa qPCR Salmonella Detection Kit China Standard酶试剂盒Takara

发表于2023年12月16日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

TaKaRa qPCR Salmonella Detection Kit China Standard
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	RR264	TaKaRa qPCR Salmonella Detection Kit China Standard	40 Rxns	￥1,550

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■ 制品内容 (25 μl反应×40次量)

Premix Ex Taq™ (Probe qPCR) (2X Conc.)^*1	500 μl
ROX Reference Dye (50X Conc.)^*2	20 μl
ROX Reference Dye II (50X Conc.)^*2	20 μl
Salm P1 Primer (10 μM)	20 μl
Salm P2 Primer (10 μM)	20 μl
Probe for Salm (25X)	40 μl
Salm Positive Control (5×10⁵ copies/μl)^*3	30 μl
RNase Free dH2O	1 ml

1 内含TaKaRa Ex Taq* HS，dNTP Mixture，Mg²⁺, Tli RNaseH等。 2 只使用在Life Technologies等的Real Time PCR扩增仪上，用以校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。StepOnePlus Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye，7500 Fast Real-Time PCR System使用ROX Reference Dye II 。使用Thermal Cycler Dice™ Real Time System II 时不必添加。 3 Salm Positive Control仅作为反应性能监测的对照，浓度仅供参考。实验时请使用阳性标本提取的DNA作为阳性对照。

【各种引物序列】

引物名称	引物序列
Salm P1 Primer	5′- CTCACCAGGAGATTACAACATGG -3′
Salm P2 Primer	5′- AGCTCAGACCAAAAGTGACCATC -3′
Probe for Salm	5′- FAM-CACCGACGGCGAGACCGACTTT-TAMRA -3′

序列参考《SN/T 1059.7-2010 进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法》。

■ 制品说明

沙门氏菌(Salmonella) 是重要的肠道致病菌，这一类细菌在自然界中分布很广，其中有2,500多种被确认为血清型。近年来由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急剧增加。本试剂盒是根据中华人民共和国出入境检验检疫行业标准《SN/T 1059.7-2010 进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法》开发的用于定性检测沙门氏菌的Real Time PCR试剂盒。试剂盒中采用一种 2X浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。制品中的DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，与Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的PCR扩增，大大提高PCR的扩增效率，能进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。


■ 保存
-20℃
注意：	Premix Ex Taq（Probe qPCR）4℃保存（稳定性高达6个月）。运输储存全程需要高度防污染。收货后4℃保存。使用前轻轻颠倒以确保试剂完全溶解并充分混匀。可在-20℃长期保存，一旦融解请于4℃保存，并在6个月之内使用完。

■ 注意事项

1. Real Time PCR扩增仪的使用请按照仪器说明书进行。

2. 判断为阳性的样品，要用微生物学方法进行再确认，参照SN0170。

3. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。

区域1：反应液的配制及分装。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。

区域2：检测样品的制备。此时不要开闭装有扩增产物或检测样品的Tube管。

区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。

由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。

4. 本制品是使用Real Time PCR扩增仪对结果进行分析、判定。当Real Time PCR扩增仪的Auto功能不适合时，将会导致结果判定错误。此时可参照Real Time PCR扩增仪说明书进行手动设定。

5. 使用Premix Ex Taq (2X Conc.) 时，请上下颠倒轻轻混合均匀，避免起泡，经轻微离心后使用。试剂没有混匀时反应性能会有所下降，本制品不能用振荡器混匀。Premix Ex Taq (2X Conc.) 于-20℃保存时容易形成沉淀，此时，轻轻用手握一会儿或室温放置一段时间后，颠倒混匀可以完全融解。

页面更新：2019-06-18 15:49:26

CycleavePCR™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0酶试剂盒Takara

发表于2023年12月16日由上海金畔生物科技有限公司

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CycleavePCR^™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	CY205	CycleavePCR^™ Salmonella Detection Kit Ver.2.0	50 Rxns	￥2,003

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无标题文档

■ 制品内容 (25 μl × 50次量)

2X Cycleave Reaction Mixture (2X conc.)	625 μl
SIN Primer/Probe Mix (FAM、ROX标记) (5X conc.)^*	250 μl
dH2O	1 ml
SIN Positive Control	150 μl (30次反应量)

* 含荧光标记探针，应避光保存。引物由SHIMADZU CORPORATION生产制造。

Limited Use Label License：[M46]

■ 制品说明

沙门氏菌 (Salmonella) 是与E.Coil 和Shigella同属于一群的重要肠道致病菌，这一类细菌在自然界中分布很广，其中有2,500多种被确认为血清型。近年来由于Salmonella Enteritidis引起的食物中毒急剧增加。
本制品是对大部分沙门氏菌都具有的基因－侵袭蛋白A (invasion protein A，invA) 基因进行快速、准确检出的Real Time PCR试剂盒。在PCR反应中每个循环包括三个过程：模板变性、引物退火、聚合酶作用下的延伸，该反应可以实现目的基因的指数倍扩增，使用Real Time PCR可实时监测扩增过程。制品中使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可防止在循环反应前因引物错配、引物二聚体所产生的非特异性扩增。
该检测使用了Cycling Probe法。Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光，通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。
制品中检测沙门氏菌invA基因的探针荧光物质使用了FAM标记，内参照检测用探针的荧光物质使用了ROX标记，在同一反应管内对沙门氏菌invA基因及内参照 (Internal Control) 同时进行扩增，通过两种不同荧光标记探针可以对invA基因和内参基因同时检定，实现双通道同步检测。其中，对内参照反应的检测，可以监控反应是否正常进行，防止假阴性结果的产生。本检测无需电泳，简单快速，灵敏度高、特异性强。

■ 保存

-20℃。

■ 注意事项

1. Real Time PCR仪的使用请按照说明书进行。
2. 如果杂合探针、引物因混入核酸酶而被降解，则不能准确进行检测。实验者的汗液和唾液也会带入核酸酶，操作时应注意。
3. PCR反应是灵敏度非常高的反应。为防止污染，建议从反应液的配制到检测的实验过程中，设定以下3个实验区域，并进行物理性隔离。

区域1：反应液的配制及分装。
区域2：检测样品的制备。
区域3：向反应液中添加检测样品，进行反应、检出。
由于本制品使用Real Time PCR法，扩增反应与检测同时进行，反应后的扩增产物不需要再进行电泳。为了避免污染，严禁从Tube管中取出扩增产物。

4. 使用本制品获得的结果是以Real Time PCR仪的分析为基础来判定的。如果Real Time PCR仪的任一功能出现问题都可能导致错误的判定结果，因此，要依据仪器说明书来正确设置Real Time PCR仪。

页面更新：2022-06-21 09:25:23

TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set酶试剂盒Takara

发表于2023年12月15日由上海金畔生物科技有限公司

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TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6601	TaKaRa PCR Mycoplasma Detection Set	100 Rxns	￥1,402

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■ 制品内容 (50 μl反应×100 次量)

MCGp F1 Primer (20 pmol/μl)	50 μl
MCGp R1 Primer (20 pmol/μl)	50 μl
MCGp F2 Primer (20 pmol/μl)	50 μl
MCGp R2 Primer (20 pmol/μl)	50 μl
Control Template (1 ng/μl)	50 μl

■ 制品说明

本制品是通过PCR方法检测培养细胞等生物材料中支原体的Primer Sets。常规培养法进行支原体检出需要一周时间，使用本Kit通过PCR扩增及电泳分析进行支原体检出只需数个小时，操作方便简单。使用本Kit能检出几种不同种类的支原体(M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. salivarium, M. hominis, M. pulmonis, M. arthritidis, M. neurolyticum, M. hyopneumoniae, M. capricolum) 以及尿素原体 (UreaPlasma) 属中的1种(U. urealyticum)。当与TaKaRa Taq或TaKaRa Ex Taq 结合使用，可以获得更好的扩增效果。

■ 保存

-20℃。

■ 试剂盒原理

原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的DNA序列及长度在Mycoplasma各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。本制品是在编码16S和23S rRNA的DNA上设计一对F1/R1引物，扩增编码16S和23S rRNA的 DNA间隔区，然后在编码16S和23S rRNA的DNA间隔区的保守区上设计一条F2引物，在编码23S rRNA的DNA上设计一条R2引物进行套式PCR。此反应体系只特异性扩增Mycoplasma DNA，检出灵敏度与特异性都很高。表1中包括本Kit中的4条引物序列及与之相对应的12种Mycoplasma的16S-Spacer-23S区域中的序列。

页面更新：2018-09-05 09:19:59

CycleavePCR™ Mycoplasma Detection Kit酶试剂盒Takara

发表于2023年12月15日由上海金畔生物科技有限公司

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CycleavePCR^™ Mycoplasma Detection Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	CY232	CycleavePCR^™ Mycoplasma Detection Kit	50 Rxns	￥1,502

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无标题文档

■ 制品内容 (25 μl反应×50次量)

2X CycleavePCR Reaction Mix	625 μl
Myco. Primer/Probe Mix (5X conc.)^*1	250 μl
RNase Free dH2O	1 ml
Myco.Positive Control^*2 (1×10⁶ Copies/μl)	20 μl
Proteinase K	50 μl

1 荧光标记探针应避光保存。 2 如果混入其他试剂中，会影响PCR反应的准确性，因此，建议同其他组份分开保存，以防止污染。

Limited Use Label License：[M46]

■ 制品说明

本制品以支原体 (Mycoplasma) 的16S rRNA为目的基因，利用Real Time PCR对支原体进行高通量、特异性检出的试剂盒。使用本制品能高感度地检测出培养细胞中至少10种支原体M. arginini， M. hominis， M. hyorhinis， M. orale， M. salivarium， M. fermentas， M. bovis，M. arthritidis，M. pirum，M. pneumoniae) 以及Acholeplasma属中的1种 (A. laidlawii)。
本制品使用了改良后的Hot Start法用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS，可以有效地抑制在配制反应液时发生的引物错配及引物二聚体引起的非特异性PCR扩增，大大提高PCR的检测灵敏度。
本制品采用Cycling Probe法进行检测，Cycling Probe法是由RNA和DNA构成的杂合探针与RNase H组合使用的高灵敏度检出法，能够高效率地检出扩增过程中及扩增结束时的目的基因片段。Cycling Probe内部含有RNA碱基，一端标记荧光物质，另一端标记荧光淬灭物质，当探针处于完整状态时，由于荧光淬灭作用抑制荧光物质发出荧光，但当探针与扩增产物中的互补序列杂交后，RNase H在RNA部分将探针切断，淬灭抑制作用解除，荧光物质发出荧光。通过测定荧光强度，能够实时监控扩增产物量。如果探针的RNA部分与模板不匹配，RNaseH就不能在RNA部分将探针切断。试剂盒中使用的探针是与支原体16S rRNA碱基互补的RNA，故可针对支原体进行高灵敏度的特异性检出。

■ 保存

-20℃。

页面更新：2022-06-21 09:37:10

In situ Apoptosis Detection Kit酶试剂盒Takara

发表于2023年12月7日由上海金畔生物科技有限公司

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In situ Apoptosis Detection Kit
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	MK500	In situ Apoptosis Kit	20 Rxns	￥1,842
Takara	MK501	Labeling Safe Buffer	500 μl x 10	￥4,306
Takara	MK502	TdT Enzyme	50 μl × 10	￥2,203
Takara	MK503	Anti-FITC HRP Conjugate	1.5 ml × 5	￥1,683
Takara	MK504	Control Slide	10 Slides	Inquire
Takara	MK505	Permeabilisation Buffer	1 ml x 10	Inquire

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■ 制品内容^*4 (Code No. MK500 20 次量)

1. Labeling Safe Buffer

500 μl × 2

2. TdT Enzyme^*1

50 μl × 2

3. Anti-FITC HRP Conjugate^*2

1.5 ml × 1

4. Control Slides^*3

2 slides

5. Permeabilisation Buffer

1.0 ml × 2

*1：TdT Enzyme是来源于E. coli的重组蛋白质。
*2：兔多克隆抗体。
*3：Control Slides是大鼠乳腺组织的石蜡包埋组织切片。作为阳性对照使用时，需要进行脱石蜡处理，请参照说明书中“操作方法，C. 石蜡包埋组织切片”的实验操作方法。在脱石蜡和Proteinase K处理后，请参考操作方法中的检测方法。
* 4 每个组份可以单独购买

（1）Labeling Safe Buffer（Code No. MK501）		500 μl×10
（2）TdT Enzyme（Code No. MK502）		50 μl×10
（3）Anti-FITC HRP Conjugate （Code No. MK503）		1.5 ml×5
（4）Control Slides（Code No. MK504）		2 slides×5
（5）Permeabilisation Buffer（Code No. MK505）		1.0 ml×10

■ 制品说明

细胞凋亡（Apoptosis）是生命个体中的调控基因，为了维持个体生命，调控细胞进行新陈代谢，促使不需要的细胞或者具有危险性的细胞自我凋亡的现象，与细胞的生长、分化、生理现象（特别在免疫方面）有着密切关系。近期研究表明，细胞凋亡在癌细胞的发生过程中，或在放射线、热能等物理因素以及药物等化学因素对癌细胞生长的抑制、癌细胞的消失、癌细胞的分化诱导过程中都起着重要作用。因此，近期在癌症控制研究方面，细胞凋亡也为科研人员所广泛关注。
发生细胞凋亡现象的特征之一，是染色体DNA以核小体为单位（185 bp）进行DNA片断化，这些DNA片段可以通过DNA的末端标记法进行组织学检定。本试剂盒使用了TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）法，通过对in situ标记DNA片段的检测，可以有效地检定局部组织或单个细胞中的细胞凋亡现象。

■ 保存

1、2、5: -20℃
3: 4℃（第一次融解后请于4℃保存）
4: 室温

■ 试剂盒原理

TUNEL法利用TdT酶的作用，对凋亡细胞中的片断化DNA的3’-OH游离末端进行高效特异性标记fluorescein-dUTP，然后使用荧光显微镜或流式细胞仪直接进行观察。对掺入的fluorescein，同时也可以通过过氧化物酶标记的抗fluorescein抗体进行检出，与显色化学物质反应后可以使用光学显微镜进行观察。

■ 试剂盒特性

1. 操作简便：使用Ready-to-Use型试剂。
2. 高灵敏度：可以单一检出初期的凋亡细胞。
3. 高特异性：与坏死细胞相比，能特异性染色凋亡细胞。
4. 使用灵活：可应用于组织切片、固定细胞等。
可使用荧光显微镜、光学显微镜等观察实验结果。
可以单独购买组份。
5. 高正确性：配有阳性对照，可以确认试剂盒的有效性及用于熟悉实验流程。
6. 高安全性：Buffer中不含危险试剂，如二甲砷酸钠。

页面更新：2020-12-17 13:55:29

NUCLEOLAR-ID® Green detection kit 细胞核仁-ID绿色检测试剂盒（荧光显微镜）品牌：Enzo

发表于2023年12月1日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Enzo
CAS No.：
储存条件：-80℃
纯度：–

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
ENZ-51009-500	–	1 Kit	–	2,970.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动，恕不另行通知，确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

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细胞内核仁特异性染色，能与其他核复染染料兼容(Hoechst 33342, Draq5™, Vybrant® DyeCycle™ Ruby, Nuclear-ID® Red dyes)

应用：荧光显微镜检测荧光检测组分: Nucleolar-ID®绿色检测试剂, 50 µL

放线菌素D 对照, 125 µg（处理后的细胞，荧光强度减弱）

10×检测缓冲液, 15 mL

ROS-ID® NO Detection kit 一氧化氮检测试剂盒（荧光显微镜）品牌：Enzo

发表于2023年12月1日由上海金畔生物科技有限公司

品牌：Enzo
CAS No.：
储存条件：-80℃
纯度：–

产品编号 (生产商编号)	等级	规格	运输包装	零售价(RMB)	库存情况	参考值
ENZ-51013-200	–	1 Kit	–	2,860.00	–	–

* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用

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荧光显微镜实时检测活细胞中的NO产量

应用：荧光显微镜检测荧光检测组分：NO检测试剂 (Red), 60 µl NO 诱导剂(L-Arginine), 100 µl NO清除剂 (c-PTIO), 400 nmoles 10X洗涤缓冲液，15 ml

Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)酶试剂盒Takara

发表于2023年11月26日由上海金畔生物科技有限公司

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品，欢迎访问官网了解更多产品信息。

Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6167	Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)	100 次	￥931

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无标题文档

■ 制品内容 (25 μl反应×100 次量)

Retrovirus Primer Mix for Provirus, Human (10 pmol/μl each)	50 μl
Retrovirus Probe for Provirus, Human (10 pmol/μl)^*	50 μl
hIFNγ Primer Mix for Provirus (10 pmol/μl each)	50 μl
hIFNγ Probe for Provirus (10 pmol/μl)^*	50 μl
DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/μl)	15 μl
EASY Dilution (for Real Time PCR)	1 ml × 4

* 荧光标记探针应避光保存。

Limited Use Label License: [M46]

■ 制品说明

本制品是利用Real Time PCR方法对以MLV(murine leulcemia Virus: 鼠白血病病毒) 为基础的逆转录病毒 (Retrovirus) 载体向人体正常细胞中导入基因时，测定前病毒拷贝数的试剂盒。前病毒 (Provirus) 是指逆转录病毒基因组整合至宿主DNA中的状态，此状态称为前病毒。
本制品与CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 组合使用，通过测定导入基因的人体正常细胞基因组DNA来测定前病毒拷贝数。另外，本制品扩增的区域为MLV的包装信号区，因此，可以测定大部分以MLV为基础的逆转录病毒载体导入人体正常细胞后的前病毒拷贝数。
传统的前病毒测定方法是把导入基因的宿主细胞克隆后，通过Southern blotting方法进行测定，计算出前病毒的平均拷贝数。计算平均拷贝数需要大量克隆进行Southern blotting，此方法耗时、费力。使用本制品不需要进行细胞的克隆即可简单地计算出前病毒的拷贝数。
与本制品组合使用的CycleavePCR Core Kit是采用Cycling探针法进行Real Time PCR反应的专用试剂盒，具有检出特异性高的优势，能够抑制背景基因组DNA的影响，从而简单、准确地对目的基因进行定量分析。

■ 保存

-20℃。

■ 注意事项

1. 应先配制各种试剂的混合液，将dH2O、buffer 、酶等配制成Master Mix，可以减少试剂的损失及分装、混合的次数，使反应试剂体积更准确，防止实验结果之间产生误差。
2. 使用前将CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的TaKaRa Ex Taq HS和Tli RNase H II轻离心至Tube底部后再使用；由于酶保存液中含有50%的甘油，粘度高，分取时应慢慢吸取；酶类制品应在实验前从-20℃中取出，使用后立即放入-20℃保存。
3. CycleavePCR Core Kit (Code No.: CY501) 中含有的10×CycleavePCR Buffer在保存过程中有时会产生沉淀物，溶解后不影响使用。Vortex使其完全溶解后再使用。
4. 分装试剂时务必使用新的枪头 (Tip)，以防止样品间污染。

页面更新：2022-06-21 10:30:48

Pluripotent Cell Detection酶试剂盒Takara

发表于2023年11月24日由上海金畔生物科技有限公司

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Pluripotent Cell Detection
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Cellartis	Y20010	hES-Cellect^™	150 μg	￥6,395

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检测多能性细胞用抗体
(Monoclonal Antibodies for Detecting Pluripotent Cells)

Cellect系列单克隆抗体用于鉴别、分析、分离具有发育多能性的人类胚胎干细胞（ES）和诱导干细胞（iPS）。本系列抗体特异性地识别具有发育多能性的干细胞表面的抗原，而这些抗原在干细胞定向分化后会被弱化调控。

■ 产品特点

· hES-Cellect is high-purity monoclonal antibodies that recognize surface markers specific to pluripotent cells
· hES-Cellect can be used without cell fixation or permeabilization to detect and select live cells

Product Name	Human ES Cells	Human iPS Cells
hES-Cellect	×	×

■ 产品应用

· Identification and/or isolation of human ES and iPS cells by immunocytochemistry, flow cytometry,and magnetic cell separation
· Separation of human pluripotent stem cells from feeder cells and differentiated progeny
· Early identification of reprogrammed human iPS cell clones

■ 产品详情请点击：

页面更新：2021-09-06 15:49:24

Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)酶试剂盒Takara

发表于2023年10月13日由上海金畔生物科技有限公司

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Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Takara	6167	Provirus Copy Number Detection Primer Set,Human (for Real Time PCR)	100 Rxns	￥931

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无标题文档

■ 制品内容 (25 μl反应×100 次量)

Retrovirus Primer Mix for Provirus, Human (10 pmol/μl each)	50 μl
Retrovirus Probe for Provirus, Human (10 pmol/μl)^*	50 μl
hIFNγ Primer Mix for Provirus (10 pmol/μl each)	50 μl
hIFNγ Probe for Provirus (10 pmol/μl)^*	50 μl
DNA Control Template for Provirus, Human (200 pg/μl)	15 μl
EASY Dilution (for Real Time PCR)	1 ml × 4

* 荧光标记探针应避光保存。

Limited Use Label License: [M46]

■ 制品说明

■ 保存

-20℃。

■ 注意事项

页面更新：2022-06-21 09:23:11

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection　同仁化学研究所

发表于2023年9月29日由上海金畔生物科技有限公司

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ECGreen-Endocytosis Detection

04 細胞内蛍光プローブ

ECGreen-Endocytosis Detection

細胞内蛍光プローブ

エンドサイトーシス検出試薬

より正確にエンドサイトーシスを可視化できる
生細胞でエンドサイトーシスを追跡できる
pH変化に対する応答性が高い

製品コード

E296　 ECGreen-Endocytosis Detection

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
40 μl	￥45,000	342-09751

＜使用回数の目安＞ 40 μl あたり、35 mm dish 20 枚、μ-Slide 8 well 20 枚

試験成績書

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ご購入方法
お問い合わせ

マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English

技術情報

技術情報の目次

従来法の課題を解決
直接的にエンドソームを可視化
pH変化への応答性が高い
実験例：薬剤を用いた初期エンドソームの観察
実験例：エンドサイトーシス経路を介したエクソソーム取り込みの可視化
実験例：浮遊細胞を用いた温度依存的なエンドサイトーシス変化の観察
応用例：エンドソームの局在の時間変化
ECGreenの蛍光特性
関連製品

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡	Y. Miyakawa, M. Otsuka, K. Sekiba, K. Funato, K. Koike, "Humanized virus-suppressing factor inhibits hepatitis B virus infection by targeting viral cell entry ", Heliyon, 2021, doi:10.1016/j.heliyon.2021.e07586.
2)	細胞（皮膚線維芽細胞）	蛍光顕微鏡	H. L. Marko, N. C. Hornig, R. C. Betz, P. Holterhus, J. Altmüller, H. Thiele, M. Fabiano, H. Schweikert, D. Braun, Ul Schiweizer, "Genomic variants reducing expression of two endocytic receptors in 46,XY differences of sex development", Hum. Mutat. 2022, doi:10.1002/humu.24325.
3)	細胞（HeLa）	蛍光顕微鏡	K. Qiu, R. Seino, G. Han, M. Ishiyama, Y. Ueno, Z. Tian, Y. Sun, J. Diao, "De Novo Design of A Membrane-Anchored Probe for Multidimensional Quantification of Endocytic Dynamics", Adv. Healthcare Mater., 2022, doi:10.1002/adhm.202102185.

よくある質問

Q 落射型顕微鏡でも観察できますか。: A

共焦点顕微鏡での観察を推奨しておりますが、落射型顕微鏡でも観察は可能です。

小社ではDAPI filter set (Ex : 360/40 nm, Em : 460/50 nm)で検出した実績があります。

図1. 落射型顕微鏡での観察

Q 血清含有培地で染色できますか？

血清含有培地での染色も可能です。
HeLa細胞では血清含有培地で作成したworking solutionを用いて24時間まで細胞毒性なく染色した実績があります。
細胞毒性の評価は小社製品「　Cell Counting Kit-8　」を用いて確認しています。

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection　同仁化学研究所

図. Cell Counting Kit-8を用いた細胞毒性試験（24時間）

取扱条件

規格
性状：	黄緑色液体
含量：	試験適合

取扱条件
1.危険物第4類　第3石油類　危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法：冷凍
危険・有害シンボルマーク

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マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit　同仁化学研究所

发表于2023年9月14日由上海金畔生物科技有限公司

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Mitophagy Detection Kit

05 細胞染色用色素

Mitophagy Detection Kit

細胞染色用色素
細胞機能解析
ミトコンドリア関連

マイトファジー検出キット

製品コード

MD01　 Mitophagy Detection Kit

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
1 set	￥37,200	344-91901

キット内容

1 set	・Mtphagy Dye ・lyso Dye	5 μg x 1 30 μg x 1

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ご購入方法
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マニュアル

取扱説明書日本語
取扱説明書 English
プロトコルマイトファジ―を検出したい

技術情報

検出原理

Mtphagy Dyeによるマイトファジー検出機構

マイトファジー検出キット Mitophagy Detection Kit　同仁化学研究所

本製品の測定原理・使用例が記載された論文は、参考文献4)をご覧ください。

マイトファジーのリアルタイム観察

HeLa細胞をCCCP処理し、マイトファジー検出試薬（MtphagyDye）及びミトコンドリア染色試薬（MitoBright LT Green）にて共染色しタイムラプス撮影(6時間)しました。

＜検出条件＞
装置：LSM-700 Laser scanning confocal microscope (LSCM)
　　　(Carl Zeiss, Oberkochen, Germany)
励起波長：MitoBright LT Green 488 nm
　　　　MtphagyDye 555 nm
対物レンズ：63 倍
撮影時間　：6 時間
撮影インターバル：15 秒

技術や使用製品に関する補足

長期滞留性・血清培地中で使用可能

【ミトコンドリア染色試薬】

・MitoBright LT Green

・MitoBright LT Red

・MitoBright LT Deep Red

参考文献

参考文献を表示する

文献No.	対象サンプル	装置	引用（リンク）
1)	細胞（HeLa）	フローサイトメーター	J. Koniga, C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, "Mitochondrial contribution to lipofuscin formation", Redox Biology, 2017, 11, 673.
2)	細胞（KB）	蛍光顕微鏡	K. Kameyama, "Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with folate-appended methyl-β-cyclodextrin", International Journal of Nanomedicine, 2017, 12, 3433.
3)	細胞（SH-SY5Y, 初代ラット皮質神経細胞）	蛍光顕微鏡	E. F. Fang, T. B. Waltz, H. Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K. Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G. Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, "Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway", Scientific Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208.
4)	細胞（HeLa、Parkin発現HeLa）	蛍光顕微鏡	H. Iwashita, S. Torii, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, "Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule", ACS Chem. Biol., 2017, 12, (10), 2546.
5)	細胞（Cardiomyocytes）	フローサイトメーター	Y. Feng, NB. Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, "Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.", Br. J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329.
6)	細胞（HCT116）	蛍光顕微鏡	K. M. Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, "Dual targeting system by supramolecular complex of folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic acid for the treatment of colorectal cancer.", Int. J. Biol. Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149.
7)	細胞（Parkin-HeLa）	プレートリーダー	N. Furuya, S. Kakuta, K. Sumiyoshi, M. Ando, R. Nonaka, A. Suzuki, S. Kazuno, S. Saiki and N. Hattori, "NDP52 interacts with mitochondrial RNA poly(A) polymerase to promote mitophagy.", EMBO Rep. ., 2018, doi: 10.15252/embr.201846363.
8)	細胞（NKT）	フローサイトメーター	L. Zhu, X. Xie, L. Zhang, H. Wang, Z. Jie, X. Zhou, J. Shi, S. Zhao, B. Zhang, X. Cheng and S. Sun, "TBK-binding protein 1 regulates IL-15-induced autophagy and NKT cell survival", Nature Communications., 2018, 9, (1), doi:10.1038/s41467-018-05097-5.
9)	細胞（HeLa）	フローサイトメーター	K. Araki, K. Kawauchi, W. Sugimoto, D. Tsuda, H. Oda, R. Yoshida and K. Ohtani, "Mitochondrial protein E2F3d, a distinctive E2F3 product, mediates hypoxia-induced mitophagy in cancer cells", Commun Biol., 2019, DOI: 10.1038/s42003-018-0246-9.
10)	細胞（Bovine Sertoli）	蛍光顕微鏡	E. Adegoke, S. Adeniran, Y. Zeng, X. Wang, H. Wang, C. Wang, H. Zhang, P. Zheng and G. Zhang , "Pharmacological inhibition of TLR4/NF-κB with TLR4-IN-C34 attenuated microcystin-leucine arginine toxicity in bovine Sertoli cells.", J Appl Toxicol., 2019,doi: 10.1002/jat.3771.
11)	組織（マウス）	蛍光顕微鏡	E. F. Fang, Y. Hou, K. Palikaras, B. A. Adriaanse, J. S. Kerr, B. Yang, S. Lautrup, M. M. Hasan-Olive, D. Caponio, X. Dan, P. Rocktaschel, D. L. Croteau, M. Akbari, N. H. Greig, T. Fladby, H. Nilsen, M. Z. Cader, M. P. Mattson, N. Tavernarakis and V. A. Bohr, "Mitophagy inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in models of Alzheimer's disease.", Nat. Neurosci. ., 2019,DOI:10.1038/s41593-018-0332-9.
12)	細胞（HepG2）	蛍光顕微鏡	Iwasawa, T. Shinomiya, N. Ota, N. Shibata, K. Nakata, I. Shiina, and Y. Nagahara , "Novel Ridaifen-B Structure Analog Induces Apoptosis and Autophagy Depending on Pyrrolidine Side Chain", Biological and Pharmaceutical Bulletin., 2019, 42, (3), 401-410, doi: 10.1248/bpb.b18-00643.
13)	細胞（U2OS）	蛍光顕微鏡プレートリーダー	T. Namba, "BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites ", Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386.
14)	細胞（ラット：INS-1）	蛍光顕微鏡	A. Inamura, S. M. Hirayama, and K. Sakurai, Loss of Mitochondrial DNA by Gemcitabine Triggers Mitophagy and Cell Death', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, 1977.
15)	細胞（HRCEpiC, HRPTEpic）	プレートリーダー	Y. Zhao and M. Sun, Metformin rescues Parkin protein expression and mitophagy in high glucose-challenged human renal epithelial cells by inhibiting NF-κB via PP2A activation., Life Sci.., 2020, DOI:10.1016/j.lfs.2020.117382.
16)	細胞（RAES）	蛍光顕微鏡	N. Liu, J. Wu, L. Zhang, Z. Gao, Y. Sun, M. Yu, Y. Zhao, S. Dong, F. Lu and W. Zhang , "Hydrogen Sulphide modulating mitochondrial morphology to promote mitophagy in endothelial cells under high‐glucose and high‐palmitate ", J. Cell. Mol. Med., 2017, 21, (12), 3190.
17)	細胞（BAECs）	蛍光顕微鏡	N. Kajihara, D. Kukidome, K. Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E. Araki, "Low glucose induces mitochondrial reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial cells", J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750.
18)	細胞（HT22）	蛍光顕微鏡	M. Jin, H. Ni and L. Li, "Leptin Maintained Zinc Homeostasis Against Glutamate-Induced Excitotoxicity by Preventing Mitophagy-Mediated Mitochondrial Activation in HT22 Hippocampal Neuronal Cells.", Front Neurol, 2018, 9, (9), 332.
19)	細胞（BMDMs）	フローサイトメーター	D. Bhatia, K. P. Chung, K. Nakahira, E. Patino, M. C. Rice, L. K. Torres, T. Muthukumar, A. M. Choi, O. M. Akchurin and M. E. Choi , "Mitophagy-dependent macrophage reprogramming protects against kidney fibrosis", JCI Insight, 2019, 4, (23), e132826.
20)	細胞（U2OS）	蛍光顕微鏡	J. Zheng, D. L. Croteau, V. A. Bohr and M. Akbari, "Diminished OPA1 expression and impaired mitochondrial morphology and homeostasis in Aprataxin-deficient cells. ", Nucleic Acids Res., 2019, 47, (8), 4086.
21)	細胞（HT22）	蛍光顕微鏡	D. D. Wang, M. F. Jin, D. J. Zhao and H. Ni, "Reduction of Mitophagy-Related Oxidative Stress and Preservation of Mitochondria Function Using Melatonin Therapy in an HT22 Hippocampal Neuronal Cell Model of Glutamate-Induced Excitotoxicity", Front Endocrinol (Lausanne), 2019, 10, 550.
22)	細胞（CD4⁺T-cells, HeLa）	蛍光顕微鏡フローサイトメーター	A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, C. A. Dunn, A. K. Singh, F. Macian, A. M. Cuervo, R. Sen and L. Ferrucci, "Age-associated changes in human CD4+ T cells point to mitochondrial dysfunction consequent to impaired autophagy.", Aging (Albany NY)., 2019, 11, (21), 9234-9263.
23)	細胞（ALM）	フローサイトメーター	T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner, "The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.", Cancer Discov., 2019, 9, (7), 919.
24)	細胞（PK-15）	蛍光顕微鏡	Y. Zhang, R. Sun, X. Li and W. Fang, "Porcine Circovirus 2 Induction of ROS Is Responsible for Mitophagy in PK-15 Cells via Activation of Drp1 Phosphorylation", Viruses., 2020, 12, (3), 289.
25)	細胞（HCE）	蛍光顕微鏡	Y. Huo, W. Chen, X. Zheng, J. Zhao, Q. Zhang, Y. Hou, Y. Cai, X. Lu and X. Jin , "The protective effect of EGF-activated ROS in human corneal epithelial cells by inducing mitochondrial autophagy via activation TRPM2.", J. Cell. Physiol., 2020, DOI: 10.1002/jcp.29597.
26)	細胞（ラット：心筋細胞）	蛍光顕微鏡	Y. Sun, F. Lu, X. Yu, B. Wang, J. Chen, F. Lu, S. Peng, X. Sun, M. Yu, H. Chen, Y. Wang, L. Zhang, N. Liu, H. Du, D. Zhao and W. Zhang, "Exogenous H2S Promoted USP8 Sulfhydration to Regulate Mitophagy in the Hearts of db/db Mice.", Aging Dis., 2020, 11, (2), 269.
27)	細胞（HCFs）	蛍光顕微鏡	R. Tanaka, M. Umemura, M. Narikawa, M. Hikichi, K. Osaw, T. Fujita, U. Yokoyama, T. Ishigami, K. Tamura and Y. Ishikawa, "Reactive fibrosis precedes doxorubicin-induced heart failure through sterile inflammation.", ESC Heart Fail., 2020, 7, (2), 588.
28)	細胞（VSMCs）	蛍光顕微鏡	C. Duan, L. Kuang, X. Xiang, J. Zhang, Y. Zhu, Y. Wu, Q. Yan, L. Liu and T. Li, "Drp1 regulates mitochondrial dysfunction and dysregulated metabolism in ischemic injury via Clec16a-, BAX-, and GSH- pathways ", Cell Death Dis., 2020, 11, 251.
29)	細胞（Bovine Sertoli）	蛍光顕微鏡	E. O. Adegoke, W. Xue, N. S. Machebe, S. O. Adeniran, W. Hao, W. Chen, Z. Han, Z. Guixue and Z. Peng, "Sodium Selenite inhibits mitophagy, downregulation and mislocalization of blood-testis barrier proteins of bovine Sertoli cell exposed to microcystin-leucine arginine (MC-LR) via TLR4/NF-kB and mitochondrial signaling pathways blockage.", Ecotoxicol. Environ. Saf., 2018, 116, 165.
30)	細胞（HeLa）	蛍光顕微鏡	D. Takahashi, J. Moriyama, T. Nakamura, E. Miki, E. Takahashi, A. Sato, T. Akaike, K. I. Nakama and H. Arimoto, "AUTACs: Cargo-Specific Degraders Using Selective Autophagy. ", Mol. Cell, 2019, 76, (5), 797.
31)	細胞（primary hepatocyte）	蛍光顕微鏡	H. Kim, J. H. Lee and J. W. Park, "IDH2 deficiency exacerbates acetaminophen hepatotoxicity in mice via mitochondrial dysfunction-induced apoptosis.", Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 2019, 1865, (9), 2333.
32)	細胞（C3H10T1/2s）	蛍光顕微鏡	M. S. Rahman and Y. S. Kim, "PINK1-PRKN mitophagy suppression by Mangiferin promotes a brown-fat-phenotype via PKA-p38 MAPK signalling in murine C3H10T1/2", Metabolism, 2020, 101, 154228.
33)	細胞（NHEKs）	蛍光顕微鏡	S. Ikeoka and A. Kiso , "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020, 54(3), 252.
34)	細胞（MIN6-M9）	蛍光顕微鏡	R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, "Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER", 2022, iScience, doi:10.1016/j.isci.2022.104603.

よくある質問

Q 既存法に対する利点を教えてください。: A

pHセンサーKeimaタンパク質を用いた検出方法と比較して、本キットは低分子蛍光試薬を用いるため、蛍光タンパク質を発現させる必要がありません。また、一般的なライブセルイメージング用の蛍光試薬と同様の操作方法で染色、観察することができます。

Q DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？: A

Mtphagy Dye、Lyso Dyeともに、調製後、-20℃で保存してください。調製後1か月間安定です。使用量に応じて小分けして保存することをお勧めします。

Q Working solutionは、どのくらい安定ですか？: A

保存できません。用時調製してください。

Q 培地中のフェノールレッドは測定に影響しますか？: A

観察する際、共焦点レーザー顕微鏡をご使用であれば殆どフェノールレッドの影響はありませんが、落射型蛍光顕微鏡をご使用の場合はフェノールレッドによるバックグラウンドが観察されます。（下記観察データを参照）そのため落射型蛍光顕微鏡をご使用になる際は、Working solutionまたは染色時にはフェノールレッド不含の培地またはHBSSをご使用ください。

Q 蛍光顕微鏡の推奨フィルターを教えてください。: A

各試薬に応じて以下のフィルターを推奨します。

　Mtphagy Dye：　励起（500～560 nm）、蛍光（670～730 nm）
　Lyso Dye：　　　励起（350～450 nm）、蛍光（500～560 nm）

取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「蛍光顕微鏡による測定例」もご参考ください。

Q 多重染色時の注意点を教えてください。: A

Mtphagy Dyeは一般的なRed系の蛍光色素に比べストークスシフトが長いため、Deep Redの蛍光色素と共染色する時には特に注意が必要です。
つまりMtphagy Dyeは500–560 nmで励起し、670-730 nmで蛍光を検出するため、Deep Redの蛍光検出波長と重なります。そのため、Deep Redの色素が励起されない波長でMtphagy Dyeを励起し、一方でMtphagy Dyeが励起されない波長でDeep Redの色素を励起する必要があります。

［漏れ込みの事例］
① MitoBright Deep Redのみを添加した細胞（Mtphagy Dyeは添加していない条件）を用意した。
② MitoBright Deep Redの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下右図）。
③ Mtphagy Dyeの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下左図）。
④ ③にてMitoBright Deep Red由来の蛍光が観察された（下左図）。

※上記の様に蛍光の漏れ込みが確認された場合、下記をご参照ください。

[漏れ込み時の対処法]

○励起フィルター変更による対処
　上記の確認例にある通りEx 561 nmではMitoBright Deep Redも励起されていることから、Mtphagy Dyeの励起波長をより500 nmに近いレーザーまたはフィルターに変更しMitoBright Deep Redが励起されない条件に設定する。

○励起強度および蛍光検出感度の調整による対処
　MitoBright Deep Redの蛍光がMtphagy Dyeの観察波長に漏れ込んでいる場合、蛍光が観察されないレベルまで励起強度または観察時の感度を下げる。
その後、変更したそれぞれの観察条件でMtphagy Dyeの蛍光が検出できることを確認する。

[漏れ込みの確認方法]
Mtphagy Dye、Lyso Dye（リソソーム染色試薬）、MitoBright Deep Red（ミトコンドリア染色試薬）を用いた三重染色時の確認

1. 細胞を3つのdishまたはwellに準備する。
　（Mtphagy Dye、Lyso Dye、MitoBright Deep Redは、それぞれ異なるdishまたはwell中の細胞に加え染色する）
2. Mtphagy DyeおよびMitoBright Deep Redをそれぞれの細胞に添加する。（血清不含培地中）
3. 37℃で30分間培養する。
4. マイトファジー誘導条件（飢餓培養など）にて培養する。
5. Lyso Dyeを上記2.で使用していない細胞へ添加する。（血清不含培地中）
6. 37℃で30分間培養する。
7. それぞれの試薬に滴した励起波長、蛍光波長で観察する。
8. 使用している試薬以外の観察波長で、蛍光の漏れ込みがないことを確認する。

［観察条件］
　Lyso Dye：Ex 350-450 nm、Em 500-560 nm
　Mtphagy Dye： Ex 500-560 nm、Em 670-730 nm
　MitoBright Deep Red： Ex 640 nm、Em 656-700 nm

取扱条件／SDS

規格
性状：
Mtphagy Dye：	試験適合
Lyso Dye：	試験適合

取扱条件

取扱条件
1.保存方法：冷蔵,遮光, 2.窒素置換,吸湿注意

SDSダウンロード

JC-1 MitoMP Detection Kit

JC-1 MitoMP Detection Kit

ミトコンドリア膜電位検出キット

マニュアル

技術情報

実験例：ミトコンドリア膜電位、老化、細胞周期との関連性

技術や使用製品に関する補足

細胞周期測定試薬

老化細胞検出キット

参考文献

よくある質問

取扱条件

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参考文献

よくある質問

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