PS Capture™ 外泌体流式试剂盒

PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit

　　本产品是通过运用磷酯酰丝氨酸（PS）特异性结合的 Tim4 蛋白质和磁珠的新型亲和法，可将细胞外囊泡捕获到磁珠上面，通过流式细胞仪高灵敏度检测表面标记蛋白的试剂盒。无需从细胞培养上清和体液检体中提取细胞外囊泡，即可直接定性分析表面标记蛋白。

　　使用前请准备好各表面标记蛋白对应一抗和荧光素标记的二抗或荧光素标记的一抗。 

◆检测方法

◆试剂盒内容

◆K562 细胞培养上清所含外泌体表面抗原分析

　　用本产品或其他公司产品（抗 CD81、CD9、CD63 抗体固化磁珠）固定 K562 细胞培养上清所含外泌体，与荧光标记抗 CD63、CD9、CD81 抗体结合后，通过流式细胞仪分析外泌体表面抗原。 

　　上述检测抗体均表明，本产品比其他公司产品检测外泌体表面抗原的灵敏度更高。

◆相关产品

　　COLO201 细胞培养上清、人血清、人血浆（EDTA 血浆、肝素血浆）所含外泌体表面抗原的分析

　　利用本产品对 COLO201 细胞培养上清、人血清、人血浆（EDTA 血浆、肝素血浆）的外泌体进行固定，通过PE标记小鼠 IgG 同型对照或 PE 标记抗人 CD9 抗体对外泌体进行检测。 

●　样品：COLO201 培养上清、人血清、人血浆（EDTA血浆、肝素血浆）各 100 μL

●　检测抗体：PE 标记抗 CD9 抗体

　　全部样品通过 PE 标记抗人 CD9 抗体染色，都可确认到荧光强度峰值的变化。从该结果可判断，本产品可以检测出细胞培养上清、血清、血浆中的外泌体。

更多应用说明，请点击：

新型亲和性外泌体纯化法与外泌体高灵敏度检测应用

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MagCapture™ 外泌体提取试剂盒

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常见问题

◆试剂盒规格、功能

Q1-1：本试剂盒中含有外泌体检测用的抗体吗？

A1-1：本试剂盒中不含外泌体检测用的荧光标记抗体。荧光素结合抗 CD63 抗体（产品编号：018-27641）和红色荧光色素结合抗 CD63 抗

A1-1：体（产品编号：011-27751），或者其他合适的荧光标记抗体需另行购买。

Q1-2：可以使用荧光标记二抗进行检测吗？

A1-2：可以，分离外泌体后，按照以下操作进行一抗反应、二抗反应和游离细胞计数法分析：

A1-1：① 混合未标记的一抗和外泌体捕获磁珠在室温下静置 1 h。在 20 min、40 min、1 h 的时候涡旋振荡约 5 s，搅拌磁珠；

A1-1：② 用 300 μL WB（+Enhancer）清洗 2 次；

A1-1：③ 用 WB（+Enhancer）100 倍稀释 PE 标记二抗（Jackson Immuno Research Laboratories，产品编号：115-115-164），添加②的

A1-1：     磁珠；

A1-1：④ 室温下静置 1 h。期间在 20 min，40 min，1 h 的时候涡旋振荡约 5 秒，并搅拌磁珠；

A1-1：⑤ 用 300 μL WB（+Enhancer）清洗 3 次；

A1-1：⑥ 在300 μL WB（+Enhancer）中重悬磁珠；

A1-1：⑦ 用流式细胞仪分析。

Q1-3：本试剂盒可以检测人以外的生物种的外泌体吗？

A1-3：可以。有人、小鼠、牛、猴子的使用实例。

Q1-4：MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS（产品编号： 293-77601）适用于流式细胞术吗？

A1-4：MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS是纯化外泌体的试剂盒，不是流式细胞术检测用的试剂盒。PS Capture™ 外泌体流式试剂盒的磁珠和

A1-1：Washing Buffer 的成分是根据流式细胞术检测条件而优化的，所以请使用 PS Capture™ 外泌体流式试剂盒。

◆试剂盒的操作方法、组成

Q2-1：本试剂盒的操作时间需要多久？

A2-1：样品预处理约 1 h，试剂盒所有的步骤总计需要约 2 h + 20 min。具体包括：

A1-1：①与样品反应 1 h

A1-1：②荧光标记抗体染色 1 h

A1-1：③清洗约 20 min

Q2-2：多个外泌体捕获磁珠可能与一个外泌体结合，造成磁珠聚集。这种情况下，能准确进行测试吗？

A2-2：建议根据前向角和侧向角散射光确定的单线态磁珠部分来调整设门参数，然后检测外泌体捕获磁珠在所选区域内的荧光信号。一般单线态磁

A1-1：珠占总体样本的 50%~70%。

Q2-3：如何检测已纯化的外泌体样品？

A2-3：将纯化完成的外泌体稀释成适当的浓度后，按照使用说明书的2. 细胞外囊泡的分离进行实验。稀释纯化外泌体时，请使用超纯净水 10 倍稀

A1-1：释的试剂盒配套的 Washing Buffer（10×）。可检测出纯化外泌体的浓度范围为 125~1000 ng/mL。检测抗体建议使用抗 CD63 单克隆抗

A1-1：体（3-13），红色荧光色素（635）结合（产品编号: 011-27751）。

Q2-4：用 10 种不同抗体检测时，所需的样品和磁珠的量是多少？

A2-4：请参考使用说明书的表2各反应数中试剂以及样品的使用量。表2中有说明 10 次反应量。用 367 μL 的样品和 110 μL Exosome Capture 

A1-1：Beads 反应并分离外泌体，用 WB（+Enhancer）清洗后，在 1,100 μL WB（+Enhancer）中悬浮磁珠。然后，根据3免疫染色分成 100

A1-1：μL一小份的步骤进行后续实验。

◆样品用量

Q3-1：检测使用的样品的最低量是多少？

A3-1：1 个样品需要 33 μL 左右。但是，样品中所含的细胞外囊泡较少时，请将已经过离心处理的细胞培养上清进行超滤浓缩后再上样。

A1-1：（推荐超滤管：Sartorius Vivaspin20，截留分子量 100 K，产品编号：VS2041）

◆相关产品

Q4-1：有销售磁力架吗？

A4-1：有的。FUJIFILM Wako 也供应磁珠捕获用磁力架（产品编号：290-35591）。

◆疑难

Q5-1：磁力架上的磁珠不集磁。

A5-1：本试剂盒的外泌体捕获磁珠针对流式细胞仪检测进行了优化，磁珠浓度降低。因此，有时用目测难以确认磁珠集磁。进行清洗操作前，将样

A1-1：品管在磁力架上静置至少 1 min，小心缓慢地进行移液操作且避免枪头吸到磁珠。