D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

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D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酸钠,不含氨基酸)D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

用于研究细胞自噬



  细胞自噬主要由营养饥饿引起。本产品是不含氨基酸的低营养培养基。将培养基换成本产品,能够使细胞处于饥饿状态。除了氨基酸,其他成分与 D-MEM 相同,比使用 HBSSEBSSD-PBS 效果更好,能够促进细胞自噬作用。


◆测试项目

● 无菌测试

● pH

● 渗透压

● 内毒素

● 支原体测试



组成表

D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)


案例

  培养生成 GFP-LC3 的小鼠成纤维细胞时,将培养基换成本产品,放置 1.5 小时后,可以通过 GFP-LC3 的标识看到大量的细胞发生了自噬。


D-MEM(高葡萄糖)(含有丙酮酸钠,不含氨基酸)

(资料提供:东京大学医学系研究科分子生物学领域 本田 郁子 老师、水島 老师)

 

相关产品

Anti Rat LC3, Rabbit010-22841 
 
  LC3 由细胞质合成后,立即被切断末端,转化成 LC3-Ⅰ。随后,依次在 E1 酶(Atg7)、E2 酶(Atg3)的作用下,与磷脂结合转化成 LC3-Ⅱ。LC3-Ⅱ 与自噬体膜结合。LC3 作为检测自噬的marker之一被广泛使用。
 <链接>

Anti Human Atg7, Rabbit013-22831 
 

  此为细胞自噬过程中形成自噬体所必须的因子之一。<链接>

Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit(018-22141)

  研究表明该物质与有关细胞自噬的因子结合,它是促进泛素/蛋白酶体分解成自噬蛋白质的蛋白质。<链接>

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
048-33575 D-MEM(High Glucose)with Sodium Pyruvate,  500ml 用于培养细胞

抗 Atg7 单克隆抗体(克隆号:ATG7-2) Anti Atg7 (Clone: ATG7-2) Monoclonal antibody

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抗 Atg7 单克隆抗体(克隆号:ATG7-2)                              Anti Atg7 (Clone: ATG7-2) Monoclonal antibody抗 Atg7 单克隆抗体(克隆号:ATG7-2)

Anti Atg7 (Clone: ATG7-2) Monoclonal antibody


◆背景


  自噬是进化保守的一种细胞机制,自噬体和溶酶体融合并且降解细胞质内物质再利用的过程。自噬参与了许多生理过程,如发育、感染、癌症和神经退行性疾病。ATG(自噬相关)基因通过酵母的基因筛选被鉴定出来。Atg7 作为 E1样酶在 Atg12 和 Atg8 两个类泛素结合系统中发挥作用。Atg7 转移 Atg12 到 E2样酶 Atg10,并且使 Atg12 结合到 Atg5。另一方面,Atg7 转移 Atg8 到另一个 E2样酶 Atg3,并且使 Atg8 结合到磷脂酰乙醇胺。在哺乳动物中这些 Atg 基因大部分都是保守的。Atg7 缺陷的新生儿由于无法耐受围产期饥饿,会在产后很快死亡。在神经系统中 Atg7 的条件缺失会导致含泛素聚集体的神经退行性疾病。


应用


  样本:Hela 细胞裂解物

抗 Atg7 单克隆抗体(克隆号:ATG7-2)                              Anti Atg7 (Clone: ATG7-2) Monoclonal antibody

 

 

参考文献


[1]

Klionsky and Emr, Autophagy as a regulated pathway of cellular degradation. 2000,Science, 290, 1717-21 PMID: 11099404

[2]

Mizushima et al., Autophagy fights disease through cellular self-digestion. 2008, Nature,451, 1069-75 PMID: 18305538

[3]

Tsukada and Ohsumi, Isolation and characterization of autophagy-defective mutants of Saccharomyces cerevisiae. 1993, FEBS Lett, 333, 169-74 PMID: 8224160

[4]

Komatsu et al., Impairment of starvation-induced and constitutive autophagy in Atg7-deficient mice. 2005, J Cell Biol, 169, 425-34 PMID: 15866887

[5]

Komatsu et al., Loss of autophagy in the central nervous system causes neurodegeneration in mice.2006, Nature, 441, 880-4 PMID: 16625205

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
CAC-CTB-AT7-M01 Anti ATG7 50µg

抗LC3(克隆号:LC3・1703)单克隆抗体 Anti LC3 (Clone: LC3-1703) monoclonal antibody

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抗LC3(克隆号:LC3・1703)单克隆抗体                              Anti LC3 (Clone: LC3-1703) monoclonal antibody抗LC3(克隆号:LC3・1703)单克隆抗体

Anti LC3 (Clone: LC3-1703) monoclonal antibody

应用于研究凋亡,线粒体形态和自噬的作用



◆背景


  LC3B是哺乳动物Atg8同源物之一,广泛用作自噬体标记物。合成LC3后,LC3经Atg4处理变为LC3-I。诱导自噬发生时,LC3-I的C末端甘氨酸与磷脂酰乙醇胺结合,形成与自噬体膜结合的LC3-II,且大多数LC3-II位于自噬体膜上。而自噬体与溶酶体融合后,内部物质(包括LC3-II在内)融解。LC3-II的表达水平通常与自噬体的数量相关。



◆应用


1、免疫荧光显微镜下小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)


  将小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)在添加有10%FBS(左)或无氨基酸(右)的常规DMEM中培养1小时。室温下用4%多聚甲醛固定10分钟后,再用50 μg/mL毛地黄皂苷透化5分钟。然后使用经1:100稀释的#1703抗LC3抗体对细胞进行免疫荧光显微镜检查。比例尺,20 μm。 抗LC3(克隆号:LC3・1703)单克隆抗体                              Anti LC3 (Clone: LC3-1703) monoclonal antibody

2、免疫电子显微镜下小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)


  将小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)放在不含氨基酸的DMEM中培养2小时。然后在室温下用4%多聚甲醛固定2小时,再用液氮透化。然后使用经1:10稀释的#1703抗LC3抗体对内源性LC3进行免疫电子显微镜分析(预包埋法)。金标记可通过银增强试剂盒(HQ silver enhancement kit,Nanoprobes,NY)强化。比例尺,50 μm。 抗LC3(克隆号:LC3・1703)单克隆抗体                              Anti LC3 (Clone: LC3-1703) monoclonal antibody

  仅供科学研究使用。 不可用于人类基因治疗或临床诊断。


参考文献



[1] Kabeya, Y., Mizushima, N., Ueno, T., Yamamoto, A., Kirisako, T., Noda, T., Kominami, E., Ohsumi, Y. and Yoshimori, T. LC3, a mammalian homologue of yeast Apg8p, is localized in autophagosome membranes after processing EMBO J. 19, 5720-5728. (2000)
[2] Mizushima, N., Yoshimori, T. How to interpret LC3 immunoblotting Autophagy 3:542-545 (2007) Mizushima, N., Yoshimori, T. and Levine, B. Methods in mammalian autophagy research. Cell 140; 313-326 (2010)

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
CAC-CTB-LC3-2-IC Anti LC3
 LC3抗体
50 μg

自噬研究用抗体

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自噬研究用抗体自噬研究用抗体



◆兔抗大鼠 LC3


  LC3 是芽殖酵母自噬相关蛋白 Atg8 的哺乳类类似物。LC3 在细胞质上合成后,切除C末端形成 LC3-I。LC3-I 与 E1 样泛素连接酶 Atg7、E2 样泛素连接酶 Atg3 携带的磷脂结合形成 LC3-II。LC3-II 结合形成自噬膜型。因此,LC3 被用做自噬的标志物之一。本产品可同时识别 LC3-I、LC3-II。

● 形状:抗血清。不含防腐剂、稳定剂

 抗原:合成肽,与大鼠LC3B的氨基酸序列 5-18 相当

 特异性:与人、大鼠、小鼠 LC3B 反应

  实际稀释倍率:免疫细胞化学 1:200~500(共聚焦显微镜)

  Western blotting 1:500~5,000

 推荐稀释缓冲液:1% BSA in 20 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5), 0.15 mol/L NaCl,0.1% NaN3

   背景较高情况下,请使用加了 0.1% Tween20 的稀释缓冲液。

 

小鼠 MEF 提取液 Western blotting


自噬研究用抗体

用 SDS-PAGE 分离 MEF(小鼠胎儿成纤维细胞)提取液,转至 PVDF 膜后,将本品作为第一抗体,

进行 Western blotting。
Atg7+・・・野生型,Atg7-・・・Atg7 缺失型

一抗:本品(1:5,000)、室温、反应1小时

二抗:HRP 标记 山羊抗兔 IgG(1:20,000),室温、反应1小时

(数据提供:顺天堂大学医学部生化学 第一讲座 上野隆)

HeLa 细胞的荧光染色


自噬研究用抗体

样品:经多聚甲醛固定和毛地黄皂苷处理的 HeLa 细胞

封闭液:1% BSA和含1%正常羊血清的 20 mmol/LTris-HCl(pH7.5),0.15 mol/L NaCl,0.1% NaN3、30℃、反应1小时

一抗:本品(1:500)、30℃、反应1小时
二抗:Cy3 标记羊抗兔 IgG(1:2,000)、30℃、反应1小时
(数据提供:顺天堂大学大学院医学研究科研基地ー吉川美加)

产品编号

产品名称

规格

容量

010-22841

Anti Rat LC3, Rabbit        

免疫组化用

50 μL

 


◆兔抗 SQSTM1/A170/p62


  SQSTM1/A170/p62 是泛素结合蛋白,氧化应激反应依赖性表达。SQSTM1/A170/p62 的异常化,会导致骨代谢异常、肥胖、2型糖尿病等。近来有报道称 SQSTM1/A170/p62 可与自噬相关因子 LC3 结合,因此在诱导泛素/蛋白酶体系到自噬系的蛋白质分解方面备受关注。

 形状:大肠杆菌蛋白质吸收后,2倍稀释的抗血清。防腐剂含 0.1% 的 NaN3

 抗原:小鼠 SQSTM1(A170)的氨基酸序列 254-333 重组体(N末端含 T7tag,C末端含 His tag)

 特异性:与大小鼠 SQSTM1(A170/ZIP)反应;与人 SQSTM1(A170/ZIP)反应极弱。

 实际稀释倍率:Western blotting  1:200;

  免疫组织染色  1:1,000

  免疫荧光染色  1:1,000

 

小鼠 MEF 提取液的 Western blotting


自噬研究用抗体

固定:4%多聚甲醛

包埋:石蜡包埋 

染色:亲和素-生物素- 过氧化物酶素法

一抗:本品 1:1,000

二抗:生物素标记抗兔 IgG 

(数据提供:鸟取大学 中曾一裕)

产品编号

产品名称

规格

容量

018-22141

Anti SQSTM1/A170/p62, Rabbit

SQSTM1/A170/p62抗体

免疫组化用

100 μL



◆兔抗人Atg7


  Atg7 是自噬反应中形成自噬体所必须的基因之一。能与泛素样蛋白质 Atg8 和 Atg12 结合的 E1 样泛素连接酶。

 形状:抗血清。不含防腐剂和稳定剂

 抗原:与人 Atg7 的氨基酸序列 556-571 相当的合成肽

 特异性:与人、大鼠、小鼠的 Atg7 反应

 实际稀释倍率:Western blotting  1:1,000~5,000

 推荐稀释缓冲液:1% BSA in 20mmol/L Tris-HCl(pH 7.5), 0.15mol/L NaCl, 0.1% NaN3
  ※ 背景较高的情况下,请使用加入 0.1% Tween20 的稀释缓冲液。

自噬研究用抗体

用 SDS-PAGE 分离 MEF(小鼠胎儿成纤维细胞)的提取液,转至 PVDF 膜后,以本品为第一抗体,

进行 Western blotting。

Atg7+, Atg3+ ・・・野生型、Atg7- ・・・Atg7 缺失型、 Atg3- ・・・Atg3 缺失型
一抗:本品(1:1,000)、室温、反应1小时
二抗:HRP 标记山羊抗兔 IgG(1:20,000)、室温、反应1小时
(数据提供:顺天堂大学医学部生化学第一讲座 上野隆)


产品编号

产品名称

规格

容量

013-22831

Anti Human Atg7, Rabbit     

免疫组化用

50 μL

 


◆相关产品


自噬活性化因子


产品编号

生产商编号

产品名称

规格/制造商

容量

185-01721

Resveratrol

白藜芦醇

生化学用

100 mg

181-01723

500 mg

 


自噬抑制剂


产品编号 生产商编号 产品名称 规格/制造商 容量

038-17971

Chloroquine diphosphate

磷酸氯喹

生化学用

5 g

036-17972

25 g

054-08021

E 64d

细胞生物学用

1 mg

050-08023

5 mg

129-04861

LY-294002

生化学用

5 g

125-04863

10 g

123-04864

25 g

230-02341

(+)-Wortmannin

渥曼青霉素

细胞生物学用

2 mg

236-02343

10 mg


参考文献

1). Ishii, T., et al.: Biochem. Biophys. Res. Commun., 226, 456(1996).

2). Ishii, T., et al.: J. Biol. Chem., 275, 16023(2000).

3). Komatsu, M., et al.: Cell, 131, 1149(2007).

4). Nakaso, K., et al.: Brain Res. Mol. Brain Res., 69, 155(1999).

5). Jiang,P.,et al.: Methods,75,13(2015).

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
010-22841 Anti Rat LC3, Rabbit 50 μL 免疫组化用
018-22141 Anti SQSTM1/A170/p62,   Rabbit 100 μL 免疫组化用
013-22831 Anti Human Atg7,   Rabbit  50 μL 免疫组化用

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0 CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

  CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 2.0 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流,选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化,不染溶酶体,在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明 亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染,可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。

◆特点


  ● 更明亮,更耐光,特异性染色自噬小泡

  ● 无需转染及转染效率验证

  ● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬

  ● 不染溶酶体,减少其他染料的背景干扰

   便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂


◆原理


  该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂(CAT)染料,以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡,而不会在溶酶体中聚集。


胞内物质被扩大的膜囊包裹,吞噬泡形成双层膜囊泡,成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合,和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

自噬原理图

◆应用


CYTO-ID® 绿色检测试剂2(A组)在PBS确定的吸光度和荧光图谱(499/548 nm)。


Hoechst33342(图B)在1X测定缓冲液来确定的吸光度和荧光图谱(350 /461 nm)。

的发放

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

HeLa cells使用 CYTO-ID® Green Detection Reagent 2进行染色


(A) 完全培养基 (B) 在饥饿培养基 (EBSS)中添加40 µM Chloroquine培养4 h 。在含有Chloroquine 的EBSS培养基中培养的细胞表现非常明亮的绿色荧光信号和点状结构。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0


运用流式细胞术分析Jurkat细胞的自噬


通过0.5 µM Rapamycin (RAP), 10 µM Chloroquine (CLQ)处理或不处理Jurkat细胞,或两者一起处理20 h。CYTO-ID® Green Detection Reagent 2染色30 min后,洗脱,用流式细胞仪分析。直方图叠加呈现结果。用RAP+CLQ处理细胞显示荧光有升高。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

微孔板分析HepG2细胞的自噬


HepG2经过DMSO(对照),0.5 μM Rapamycin (Rap), 10 µM Chloroquine (CLQ),或0.5 µM Rap 和10 µM CLQ同时培养20 h。细胞经过Hoechst 33342染色进行细胞数目标准化。Rap 和CLQ同时处理细胞显示自噬作用上升。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0                              CYTO-ID® Autophagy detection kit 2.0

◆相关产品


产品编号

产品名称

规格

备注

应用

ENZ-51002-25

GFP-Certified® Apoptosis/Necrosis detection kit

细胞凋亡/坏死检测试剂盒

25 assays

多重检测,区分正常、

早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞,与GFP和其他绿色荧光探针兼容。

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51002-100

100 assays

ENZ-51021-K200

Nuclear-ID® Green

hromatin condensation detection kit

细胞核绿色染色体皱缩检测试剂盒

1 Kit

高渗透性的绿色荧光染色增强了细胞凋亡诱导染色质固缩。

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-52406

NUCLEAR-ID® Red DNA stain

DNA染色试剂盒(红色荧光)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-CHM103-0200

Nuclear-ID® Blue

DNA stain   (GFP-Certified®)

Nuclear ID® 蓝色DNA染色(GFP细胞系)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-51015-KP002

Lyso-ID® Red

cytotoxicity kit (GFP-Certified®)

溶酶体细胞毒理检测试剂盒(红色荧光)(绿色细胞系)

1 Kit

快速,定量和HTS-兼容的检测活细胞毒性试剂。

荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-0025

PROTEOSTAT® Aggresome etection kit
蛋白内稳态® 聚集体 检测试剂盒

25 tests

Robust、定量的聚集小体用于神经退行性疾病,肝病和毒理学研究

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-K100

100 tests

相关产品资料请点击下载:活细胞荧光分析 Ver.3

自噬技术文章:


通过流式细胞术定量自噬解释与白血病肿瘤生长的联系

Posted By Morgan Mathieu

Tags: Autophagy, Cancer


主要参考文献


(1)


A live-cell fluorescence microplate assay suitable for monitoring vacuolation arising from drug or toxic agent treatment: J. Coleman, et al.; J. Biomol. Screen. 15, 398 (2010), 摘要;

(2)


Methods in mammalian autophagy research: N. Mizushima, et al.; Cell 140, 313 (2010),摘要;

(3)


Assays to Assess Autophagy Induction and Fusion of Autophagic Vacuoles with a Degradative Compartment, Using Monodansylcadaverine (MDC) and DQ-BSA: C.L. Vazquez & M.I. Colombo; Methods Enzymol. 452, 85 (2009),摘要;

(4)


Desmethylclomipramine induces the accumulation of autophagy markers by blocking autophagic flux: M. Rossi, et al.; J. Cell Sci. 122, 3330 (2009),  摘要;

(5)


Guidelines for the use and interpretation of assays for monitoring autophagy in higher eukaryotes: D.J. Klionsky, et al.; Autophagy 4, 151 (2008),  摘要;

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-KIT175-0200 Cyto-ID® Autophagy detection kit 2.0
 CYTO-ID®自噬检测试剂盒2.0
200 tests

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 CYTO-ID® Autophagy detection kit

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CYTO-ID® 自噬检测试剂盒CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

  CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 使用新型染料检测自噬小泡和监控活细胞自噬流,选择性标记积累的自噬小泡。染料已通过优化,不染溶酶体,在自噬前体、自噬体和自噬溶酶体里呈现出明亮的荧光。该试剂盒提供了一种无需细胞转染,可以在活细胞中监控细胞自噬的快速定量方法。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

CYTO-ID® Autophagy Detection Kit

◆特点

● 无需转染,定量监测活细胞中的自噬情况

● 免去 LC3-GFP 转染所需的时间和精力以及转染效率的验证

● 含有特殊基团的专利染料选择性地染色自噬小泡

● 试剂盒中包含已知活性的自噬抑制剂与激活剂

● 快速量化原生异质性细胞群中的自噬

● 选择性地全方位染色,可检测和区分自噬流(autophagic flux)和自噬溶酶体的积累

● 不染溶酶体,减少其他染料的背景干扰

 便于高通量筛选自噬激活剂和抑制剂

◆原理


  该产品所用探针是阳离子两亲性示踪剂(CAT)染料,以类似诱导磷脂药物的方式迅速进入到细胞中。染料的功能基团能够选择性标记与自噬通路相关的小泡,而不会在溶酶体中聚集。


胞内物质被扩大的膜囊包裹,吞噬泡形成双层膜囊泡,成为自噬体。自噬体外膜随后与溶酶体融合,和内部物质被自噬性溶酶体降解。自噬的各种调节因子也被描绘于图中。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

自噬原理图

◆应用


省时省力,无需转染即可自快速全面的标记自噬小泡


为了演示 CYTO-ID® Green detection reagent 的优势,先用 RFP-LC3 表达载体转染 HeLa 细胞,10 μM 的 Tamoxifen 处理过夜,然后用 CYTO-ID® 绿色检测试剂染色。LC3 转染法需要过夜,而 CYTO-ID® 绿色检测试剂的方法在15-30分钟内标记细胞达100%。图A:绿信号显示自噬小泡的 CYTO-ID® 绿染;图B:成功转染细胞的 RFP-LC3 表达(红色);图C:自噬体的特异性标记 LC3,与 CYTO-ID® 绿色染料标记的小泡共定位的复合图像。

的发放

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit




无转染的自噬检测


Hela细胞进行饥饿与恢复,然后使用 CYTO-ID® Green detection reagent 标记。染料可以明确检测和量化自噬及与自噬诱导相关的自噬小泡前体。图1A:稳定表达 GFP-LC3 的CHO细胞,结果显示对照组与饥饿的细胞群的相对较差的基线分离,自噬难以量化。图1B:CYTO-ID® Autophagy Detection Kit 特异性标记 LC3 蛋白依赖的自噬小泡,免去转染操作。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit


自噬积累和自噬流的可视化


可用荧光显微镜观察CYTO-ID® 自噬绿色染料检测的自噬液泡积累和自噬流。Hela细胞用以下试剂进行模拟诱导,0.2% DMSO(A)和100 μM  Clonidine hydrochloride(B)进行诱导,5 μM Loperamide hydrochloride 和 1 μM PP242 hydrate(D)在37°C诱导12小时。处理后,细胞在37℃下用CYTO-ID® Green Detection reagent 孵育10分钟,再用分析缓冲液清洗。细胞核被 Hoechst 33342 染料复染为蓝色。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit


避免非特异性溶酶体染色的背景干扰


相比其他 MDC 染色溶酶体检测,CYTO-ID® 绿色染料无溶酶体染色背景,CYTO-ID® Autophagy kit 无需紫外活细胞分析,在显微镜共标记应用中,与 Hoechst 染料兼容。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit


使用流式细胞仪通过 CYTO-ID® Autophagy Detection 

Kit 分析自噬


对照组(红线峰值)无诱导,10 uM Tamoxifen(ALX-550-095)处理 Jurkat 细胞(白血病T细胞)(蓝线峰值)。处理18小时后,细胞结合 CYTO-ID® 绿色检测试剂,然后不经过流式细胞仪清洗,进行分析。结果通过直方图呈现。对照组细胞被染色,但荧光亮度低。实验组中,CYTO-ID® 绿色荧光信号增加约2倍,表明 Tamoxifen 处理能引起 Jurkat 细胞中自噬的增加。


CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

使用 mTOR 激酶抑制剂 Rapamycin 处理 HepG2 细胞孵育过夜,结果显示 CYTO-ID® 染色信号升高。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒                              CYTO-ID® Autophagy detection kit

CYTO-ID® 绿色染料大多与 RFP-LC3蛋白共定位。0.1 μM Rapamycin(典型自噬诱导剂)处理过夜,转染 Hela 细胞表达RFP-LC3。

A: CYTO-ID® Green 染色; B: RFP-LC3; C: 合成图像。

CYTO-ID® 自噬检测试剂盒 2.0

◆相关产品

产品编号

产品名称

规格

备注

应用

ENZ-51002-25

GFP-Certified®Apoptosis/Necrosis detection kit

细胞凋亡/坏死检测试剂盒

25 assays

多重检测,区分正常、

早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞,与GFP和其他绿色荧光探针兼容。

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51002-100

100 assays

ENZ-51021-K200

Nuclear-ID®Green

hromatin condensation detection kit

细胞核绿色染色体皱缩检测试剂盒

 

1 Kit

高渗透性的绿色荧光染色增强了细胞凋亡诱导染色质固缩。

 

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-52406

NUCLEAR-ID®Red DNA stain

DNA染色试剂盒(红色荧光)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-CHM103-0200

Nuclear-ID® Blue

DNA stain   (GFP-Certified®)

Nuclear ID® 蓝色DNA染色(GFP细胞系)

200 µL

细胞可渗透的DNA染色应用广泛。

≥93%(HPLC),FC,荧光检测

ENZ-51015-KP002

Lyso-ID® Red

cytotoxicity kit   (GFP-Certified®)

溶酶体细胞毒理检测试剂盒(红色荧光)(绿色细胞系)

1 Kit

快速,定量和HTS-兼容的检测活细胞毒性试剂。

荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-0025

PROTEOSTAT®Aggresome   etection kit

蛋白内稳态聚集体 检测 试剂盒

25 tests

Robust、定量的聚集小体用于神经退行性疾病,肝病和毒理学研究

FC,荧光显微镜,荧光检测

ENZ-51035-K100

100 tests

 


处理

目的

效果

μM

诱导时间 (hrs)

细胞系

饥饿

抑制哺乳动物Rapamycin (mTOR)

激活自噬

N/A

1~4

HeLa, HepG2, Jurkat

Rapamycin

抑制哺乳动物Rapamycin (mTOR)

激活自噬

0.2

6~18

HeLa, Jurkat

PP242

mTOR ATP-竞争性抑制剂

激活自噬

1

18

HeLa

Lithium

抑制IMPase 和降低inositol 和IP3水平; mTOR依赖性

激活自噬

10,000

18

HeLa, Jurkat

Trehalose

未知, mTOR依赖性

激活自噬

50,000

6

HeLa, Jurkat

Bafilomycin A1

抑制 Vacuolar-ATPase

抑制自噬

6~9*10-3

18

HeLa, Jurkat

Chloroquine

碱化 Lysosomal pH

抑制自噬

10~50

18

HeLa, Jurkat

Tamoxifen

增加细胞内 ceramide的水平和消除PI3K的抑制效果

激活自噬

4~10

6~18

HeLa, HepG2, Jurkat

Verapamil

钙离子通道阻滞剂;降低胞浆内Ca2+水平; mTOR依赖性

激活自噬

40~100

18

HeLa, Jurkat

HydroxyChloroquine

Alkalinizes Lysosomal pH

抑制自噬 

10

18

HeLa, Jurkat

Loperamide

Ca2+ 通道阻滞剂;降低胞浆内 Ca2+浓度; mTOR依赖性

激活自噬

5

18

HeLa

Clonidine

咪唑啉-1受体激动剂; 降低 cAMP 水平; mTOR依赖性

激活自噬

100

18

HeLa

MG-132

选择性蛋白酶抑制剂

激活自噬

2~5

18

HeLa, Jurkat

Norclomipramine

碱化Lysosomal pH

抑制自噬

5-20

18

HeLa

Epoxomicin

选择性蛋白酶抑制剂

诱导聚集体

0.5

18

HeLa

Velcade®

选择性蛋白酶抑制剂

诱导聚集体

0.5

18

HeLa

Amyloid beta peptide 1-42

引起氧化应激

诱导聚集体

25

18

SK-N-SH

Cyto-ID®检测试剂盒 Q&A



Q:Cyto-ID®自噬检测试剂与活细胞孵育的最长时间是多少(几分钟/几小时/几天)?
A:我们建议 37℃ 孵育不超过 30 分钟。很多实验表明,孵育 1 小时不会伤害细胞。孵育超过 1 小时,一些细胞看上去状态不好。


Q:是否可用荧光显微镜观察 3D 培养细胞的自噬?
A:我们没有用该染料染过 3D 细胞,但是一小撮细胞是可以染色的。活体组织的话,由于染料的渗透性不好,不能进入样本的内部,所以效果不

A:想。染白细胞是可以。


Q:用双重染料染在 37℃ 孵育 30 分钟后,细胞状态不好开始皱缩。有些细胞也从板上脱离,阳性对照和 DMSO 对照没有观察到特异性染色。
A:对于比较敏感的细胞,优化流程如下:
A:1. 使用 PBS/5% FBS 或者完全培养基作为 assay buffer,最好不含酚红。
A:2. 如果细胞状态仍然不好,建议染色时间缩短至 15~20 分钟。
A:3. 减少染料的浓度至 1000× 稀释。需要显微镜观察时延长荧光照射的时间。
A:4. 可能光褪色会导致信号模糊。建议使用封片剂防止光褪色。


Q:用流式检测的话,样品在用 Cyto-ID®自噬检测试剂孵育后多久可用流式观察?操作手册是说 30 分钟。是否可以在检测之前短暂的将样品放

A:在冰上?
A:可以将样品放在冰上延长孵育的时间。一般的经验法则,尽可能缩短活细胞与染料的结合。缺氧,低温或者其他应激状态也可以诱导自噬。


Q:GFP-CertifiedTM 细胞凋亡/坏死检测试剂盒(ENZ-51002),Cyto-ID® 自噬检测试剂盒(ENZ-51031)是否可以同时染色,检测细胞凋

A:亡、坏死和自噬?
A:GFP-CertifiedTM 细胞凋亡/坏死检测试剂盒(ENZ-51002)和 Cyto-ID® 检测试剂盒(ENZ-51031)不能配合使用,因为细胞凋亡和自噬检

A:测的染料都发绿色荧光。这两个试剂盒可以平行使用。比如,用十字孢碱(Staurosporine)处理细胞,一部分样品用 GFP-CertifiedTM 细胞

A:凋亡/坏死检测试剂盒检测,一部分样品用 Cyto-ID® 检测试剂盒检测。


Q:Cyto-ID®自噬检测试剂盒(ENZ-51031)的 Cyto-ID®自噬检测试剂能否与 ProteoStat®蛋白聚集检测(ENZ-51023)的 ProteoStat®

A:检测试剂联合使用?
A:Cyto-ID®绿色自噬检测试剂与 ProteoStat®检测试剂发的荧光颜色不同,他们可用于同一实验,客户需要优化实验流程。

Q:Cyto-ID®自噬检测试剂的原理是什么?
A:染料是申请专利的。该染料是阳离子两性示踪剂(CAT)染料,跟很多阳离子化合物一样可以快速进入细胞。染料穿过细胞膜双分子层后被动

A:扩散,不需要蛋白结合或者转运子活性。可滴定部分的筛选使的染料不会再溶酶体聚集,能够标记自噬通道相关的液泡。另外,染料的发射光

A:密度增强后可以标记自噬液泡相关片层膜结构。我们可以提供染料染自噬液泡的相关数据。诱导自噬溶酶体,比如用氯喹或者baflimyocin 处

A:理后,会导致荧光变亮(250~300%)。雷帕霉素诱导自噬后能够用3-MA 抑制。在EBSS 中氨基酸缺乏会导致1 小时后在自噬液泡中染料的

A:积累,这种积累是可逆的(补充营养后即可恢复)。我们有一系列用于研究自噬的化合物(Screen-Well®Autophagy library)


Q:与单丹磺酰尸胺(MDC)相比,Cyto-ID®自噬检测试剂有哪些优势?
A:MDC 需要 365 nm UV 荧光照明,与通常流式配置的 488 nm 激发源不兼容。Cyto-ID®自噬染料是 488 nm 激发波长,绿色的发射荧光,可

A:以高亮自噬通道不同的液泡成分。需要注意的是,与 lysomotrophic 染料不同,MDC、LysoTrackerTMRed、吖啶橙主要是染溶酶体的,

A:Cyto-ID®自噬染料只能染一点点溶酶体,主要是染自噬溶酶体和早期自噬部分的选择标记物。


Q:与 GFP-LC3 转染细胞相比,Cyto-ID®自噬检测试剂盒(ENZ-51031)的优势是什么?
A:Cyto-ID®检测试剂盒(ENZ-51031)的优势在于不用转染细胞。转染很短暂,不同实验需要再购买相关试剂。由于细胞过表达,会导致

A:GFP-LC3 聚集,结果呈假阳性。转染效率低于100%,有些细胞不会表达必要的 GFP 组件。该试剂盒检测的自噬,细胞群的一致性会更好。

A:不需要每个细胞系都进行转染。也可以标记原代细胞。原代细胞不容易进行转染。


Q:有哪些细胞系或者原代细胞可用 Cyto-ID®自噬检测试剂?
A:用该试剂盒见检测过的代表性的细胞和细胞系包括肝细胞、SK-N-SH 神经瘤细胞、CHO 细胞、骨肉瘤来源细胞、黑素留细胞、乳腺癌细胞、

A:宫颈癌细胞、卵巢癌细胞、B 淋巴瘤细胞、结肠癌细胞、HepG 细胞、Jurkat T细胞、牛大动脉内皮细胞(BAEC)。


Q:Cyto-ID®自噬检测试剂能否与其他染料配合使用,区分细胞核内体和自噬内涵体?
A:Cyto-ID®红色长期示踪剂染料(ENZ-51037)能够染细胞质膜,通过细胞内吞存在于细胞中。Cyto-ID®红色染料与 Cyto-ID®自噬检测试剂

A:能够高亮异体吞噬 vs 自噬。也可以 Cyto-ID®自噬检测试剂与Lyso-ID®红色染料或者LysoTrackerTM 红色染料进行活细胞染色,荧光显微镜

A:观察。


Q:Cyto-ID®自噬检测试剂的稳定性如何?
A:荧光染料会发生光褪色,但是这种染料比荧光素更稳定。按照操作手册出来荧光染料。

Q:Cyto-ID®自噬检测试剂盒染色后是否可固定细胞?
A:在操作手册中提供了固定细胞的流程。不推荐用表面活性剂给细胞打孔,定位的荧光染料丢失。


Q:活细胞检测时,荧光信号强度可维持多长时间?
A:细胞诱导后发生自噬,在分析前染色。诱导时间少于 1 小时或者诱导几天,诱导时间取决于自噬诱导剂。我们没有在活细胞上进行长时间的染

A:色,有客户发现可以至少染色 24 小时。



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Molecular pathway of near-infrared laser phototoxicity involves ATF-4 orchestrated ER stress: I. Khan, et al.; Sci. Rep. 5, 10581 (2015), Application(s): Fluorescence microscopy autophagy assay, 摘要全文

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N-Myc and STAT Interactor regulates autophagy and chemosensitivity in breast cancer cells: B.J. Metge, et al.; Sci. Rep. 5, 11995 (2015), Application(s): Fluorescent detection,摘要全文

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Novel autophagy inducers lentztrehaloses A, B and C: S.I. Wada, et al.; J. Antibiot. (Tokyo)68, 521 (2015), Application(s): Fluorescence microscopy using Mewo melanoma and OVK18 ovarian cancer cell lines, 摘要;

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Novel small-molecule SIRT1 inhibitors induce cell death in adult T-cell leukaemia cells: T. Kozako, et al.; Sci. Rep. 5, 11345 (2015), Application(s): Flow cytometry using a variety of cancer cell lines, 摘要全文

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Novel targeting of PEGylated liposomes for codelivery of TGF-β1 siRNA and four antitubercular drugs to human macrophages for the treatment of mycobacterial infection: a quantitative proteomic study: N. Niu, et al. ; Drug Des. Devel. Ther. 9, 4441 (2015),Application(s): Autophagy of human macrophages by flow cytometry, 摘要;

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Paraptosis cell death induction by the thiamine analog benfotiamine in leukemia cells: N. Sugimori, et al.; PLoS One 10, e0120709 (2015), Application(s): Flow cytometry using HL60 leukemia cell line, 摘要全文

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Plumbagin induces G2/M arrest, apoptosis, and autophagy via p38 MAPK- and PI3K/Akt/mTOR-mediated pathways in human tongue squamous cell carcinoma cells: S.T. Pan, et al.; Drug Des. Devel. Ther. 9, 1601 (2015), Application(s): Assay, 摘要全文

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Reduced FoxO3a expression causes low autophagy in idiopathic pulmonary fibrosis fibroblasts on collagen matrix: J. Im, et al.; Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 309, L552 (2015), 摘要;

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S-Adenosyl-L-methionine-competitive inhibitors of the histone methyltransferase EZH2 induce autophagy and enhance drug sensitivity in cancer cells: T.P. Liu, et al.; Anticancer Drugs 26, 139 (2015), Application(s): Fluorescence microscopy using MDA-MB-231 breast cancer cell line, 摘要全文

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Schisandrin B inhibits cell growth and induces cellular apoptosis and autophagy in mouse hepatocytes and macrophages: implications for its hepatotoxicity: Y. Zhang, et al.; Drug Des. Devel. Ther. 9, 2001 (2015), Application(s): Flow cytometry using AML-12 hepatocyte and RAW 264.7 leukemia cell lines, 摘要全文

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The pan-inhibitor of Aurora kinases danusertib induces apoptosis and autophagy and suppresses epithelial-to-mesenchymal transition in human breast cancer cells: J.P. Li, et al.; Drug Des. Devel. Ther. 9, 1027 (2015), Application(s): Assay, 摘要全文

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产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-51031-K200 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 200 tests
ENZ-51031-0050 Cyto-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID®自噬检测试剂盒 50 tests

NBR1 ELISA kit

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细胞自噬研究 NBR1 ELISA kitNBR1 ELISA kit



       自噬(autophagy)是指从粗面内质网的无核糖体附着区脱落的双层膜包裹部分胞质和细胞内需降解的细胞器、蛋白质等成分形成自噬体(autophagosome),并与溶酶体融合形成自噬溶酶体,降解其所包裹的内容物,以实现细胞本身的代谢需要和某些细胞器的更新。自噬是继细胞凋亡(apoptosis)后,当前生命科学热门的研究领域。



自噬过程示意图


NBR1 ELISA kit

ELISA法定量检测自噬标记物——NBR1 和 p62


       NBR1 和 p62 这两个蛋白的功能类似于支架蛋白,在自噬过程中起着转运和降解蛋白的功能。NBR1和 p62 ELISA 试剂盒可以灵敏地定量检测人、大鼠、小鼠细胞裂解液中自噬标记物 NBR1 和 p62 的含量。此试剂盒具有如下优点:

● 灵敏度高,检测 NBR1 可低至 66 pg/mL、p62 可低至 100 pg/mL。

● 简便地操作步骤节省宝贵时间,减少错误。

● 结果比 Western Blot 更可靠。

● 适用于高通量筛选。

使用 p62 ELISA 试剂盒检测自噬标记物

图A图B图C

       自噬诱导药物处理人乳腺癌细胞。经药物处理6小时和12小时后,细胞裂解,使用 p62 ELISA 试剂盒定量检测、p62 抗体和 LC3-II 抗体进行免疫印迹。经药物处理后,自噬标记物表达水平有变化,p62 蛋白水平降低(A和B图),LC3-II 水平上升(C图)


产品信息

 

产品编号

产品名称

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ADI-900-211

NBR1 ELISA Kit

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AG-45A-0030

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p53/MDM2

 


自噬化合物库

       SCREEN-WELL® Autophagy Library是研究促自噬和抗自噬分子的有力工具。化合物库中包含96种已知的自噬诱导剂或者抑制剂,可作用于与自噬相关的蛋白或受体,包括:mTOR/PI3K、cAMP、热休克蛋白、钙调蛋白、表观遗传调控蛋白、细胞骨架等。

 

产品编号

产品名称

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BML-2837-0500

Autophagy Library

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BML-2837-0100

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Cyto-ID™自噬检测试剂盒

 
       Enzo 公司提供的新产品 Autophagy Detection Kit 内含 Enzo 申请专利的染料,在活细胞内可以染色,与自噬体特异性结合,在荧光显微镜下镜检。


NBR1 ELISA kit

NBR1 ELISA kit

Starvation 诱导细胞自噬,左图绿色为自噬体,右图为对照。蓝色为荧光染料 Hoechst 染细胞核。

 

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BML-PW9860-0025

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25 μL

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ADI-900-211 NBR1 ELISA kit 
NBR1酶联免疫试剂盒
1×96孔等

ER-ID® 绿色检测试剂盒、高尔基体/内质网/细胞核检测试剂盒 ER-ID® Green assay kit、Organelle-ID RGB® III assay kit

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细胞凋亡/自噬检测试剂盒ER-ID® 绿色检测试剂盒、高尔基体/内质网/细胞核检测试剂盒                              ER-ID® Green assay kit、Organelle-ID RGB® III assay kit


细胞自噬检测试剂盒 Cyto-ID® Autophagy Detection Kit – ENZ-51031

   

  该染料进行过优化,可在活细胞内进行实验,无需细胞转染。


  2014 年 6 月的 Nature 杂志刊登细胞自噬在抗帕金森病方面,抑制位于线粒体中的去泛素酶 USP30 的活性会增强神经元中受损线粒体的自噬和清理,有益于帕金森病的治疗。2013 年 7 月 Journal of Clinical Investigation 杂志刊登研究Ⅱ型糖尿病个体自噬作用可抑制毒性的胰岛淀粉样多肽(IAPP)的过量积累,从而保护胰腺  β 细胞免于受损。研究者希望早日找到保护胰腺  β 细胞的靶点以开发出型糖尿病的新疗法。美国加州大学洛杉矶分校的生物学家发现,果蝇机体和大脑的衰老延缓与激活肠道或神经系统中的关键的能量传感器 AMPK 基因后引起的自噬过程加快密切相关。Cyto-ID® 自噬检测试剂盒是 Enzo 公司的拳头产品,该产品可代替传统 LC3-GFP 法,通过荧光示踪物来选择性检测自噬通路中的各种囊泡包括自噬前体、自噬体和自溶酶体,用于流式细胞仪,无需转染,就能在荧光显微镜下跟踪活细胞的自噬过程进行定量分析,或用流式细胞仪进行高通量筛选,甚至能标记原代细胞。并且该产品可以进行自噬通路的动力学分析,为研究者展现自噬体形成和消除之间的动态平衡。Cyto-ID® 自噬检测试剂盒也可以与检测其他细胞器的染料结合使用:与 Mito-ID® Red 联用区分检测细胞自噬和线粒体自噬,与 PROTEOSTAT® Protein aggregation assay 联用检测聚集小体及小体中的变性蛋白,与 Lyso-ID ® Red detection kit(GFP-Certified)联用区分检测自噬体和溶酶体,与 Lyso-ID® Red cytotoxicity kit(GFP-Certified)kit 联用监测自噬与细胞毒性的相关性。

原理


  该试剂盒利用专利性的染料,可选择性对前自噬体、自噬体和自噬性溶酶体进行染色,在荧光下显绿色,而对溶酶体的染色极少。

◆优点特色


● 无需进行细胞转染代替传统的 GFP-LC3 法
● 新颖的荧光探针可特异性地检测最低溶酶体背景的自噬囊泡
● 特别适用于筛选自噬激活剂与抑制剂


ER-ID® 绿色检测试剂盒、高尔基体/内质网/细胞核检测试剂盒                              ER-ID® Green assay kit、Organelle-ID RGB® III assay kit

Starvation 诱导细胞自噬,左图绿色为自噬体,右图为对照。蓝色为荧光染料 Hoechst 染细胞核。

General Cells

Cancer Cells

osteosarcoma-derived cells

melanoma cells

hepatocytes

ovarian cancer cells

Jurkat T cells

breast cancer cells

bovine aortic endothelial cells

cervical adenocarcinoma cells

B-lymphoblastoid cells

colon adenocarcinoma cells

Chinese hamster ovary (CHO) cells

SK-N-SH neuroblastoma cells

相关产品资料请点击下载:活细胞荧光分析 Ver.3

※ 本页面产品仅供研究用。研究以外不可使用。

相关产品

产品名称

特点

分析试剂盒

p62 ELISA kit

用于自噬研究,高效、定量的 p62 ELISA 试剂盒,可检测低至 100 pg/mL的 p62 进行。

NBR1 ELISA kit

率先投放市场,用于自噬研究的 NBR1 定量检测试剂盒,可检测65 pg/mL的 NBR1。

SCREEN-WELL® Autophagy library

不同结构和机制的化合物,用于胞内和体外研究,促进/抗自噬分子的作用机制。

抗体

LC3, mAb (2G6) (fluorescein labeled)

识别所有单体(LC3-I)和 PE 交联(LC3-II)形式的人LC3/GABARAP 蛋白 (Atg8 同系物 ) 。

LC3, mAb (5H3)

识别人 LC3。识别两种形式的内源性 LC3。

LC3B, mAb (2G6)

识别人、小鼠、大鼠、猴和仓鼠 LC3B。识别两种形式的内源性   LC3B。

LC3B, mAb (5F10)

识别人、小鼠、大鼠、狗和仓鼠 LC3B。识别这两种形式的内源性LC3B。

小分子

3-Methyladenine

PI3 激酶抑制剂,著名的自噬抑制剂。

Rapamycin

具有强效免疫抑制剂的活性。它与 FKBP12 形成的复合物结合一个效应子,从而抑制 IL-2 和其它生长因子。

Cyto-ID® 检测试剂盒 Q&A

Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂与活细胞孵育的最长时间是多少(几分钟/几小时/几天)?
A:    我们建议37℃孵育不超过30分钟。很多实验表明,孵育1小时不会伤害细胞。孵育超过1小时,一些细胞看上去状态不好。


Q:    是否可用荧光显微镜观察3D培养细胞的自噬?
A:    我们没有用该染料染过3D细胞,但是一小撮细胞是可以染色的。活体组织的话,由于染料的渗透性不好,不
能进入样本的内部,所以效果

          想。染白细胞是可以。


Q:    用双重染料染在37℃孵育30分钟后,细胞状态不好开始皱缩。有些细胞也从板上脱离,阳性对照和 DMSO 对
照没有观察到特异性染色。

A:    对于比较敏感的细胞,优化流程如下:
          1. 使用 PBS/5%FBS 或者完全培养基作为 assay buffer,最好不含酚红。
          2. 如果细胞状态仍然不好,建议染色时间缩短至15~20分钟。
          3. 减少染料的浓度至 1000× 稀释。需要显微镜观察时延长荧光照射的时间。
          4. 可能光褪色会导致信号模糊。建议使用封片剂防止光褪色。

Q:    用流式检测的话,样品在用 Cyto-ID® 自噬检测试剂孵育后多久可用流式观察?操作手册是说30分钟。是否可以在检测之前短暂的将样品

          冰上?

A:    可以将样品放在冰上延长孵育的时间。一般的经验法则,尽可能缩短活细胞与染料的结合。缺氧,低温或者其他应激状态也可以诱导自噬。


Q:    GFP-Certified™ 细胞凋亡/坏死检测试剂盒(ENZ-51002),Cyto-ID® 自噬检测试剂盒(ENZ-51031)是
否可以同时染色,检测细胞

          亡,死和自噬?

A:    GFP-Certified™ 细胞凋亡/坏死检测试剂盒(ENZ-51002)和Cyto-ID® 检测试剂盒(ENZ-51031)不能配合使用,因为细胞凋亡和自噬

          染料都发绿色荧光。这两个试剂盒可以平行使用。比如,用十字孢碱(Staurosporine)处理细胞,一部分样品用GFP-CertifiedTM

          亡/坏死检测试剂盒检测,一部分样品用Cyto-ID® 检测试剂盒检测。


Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂盒(ENZ-51031)的Cyto-ID® 自噬检测试剂能否与ProteoStat® 蛋白聚集检测(ENZ
-51023)的ProteoStat® 

          试剂联合使用?

A:    Cyto-ID® 绿色自噬检测试剂与 ProteoStat® 检测试剂发的荧光颜色不同,他们可用于同一实验,客户需要优化实验流程。


Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂的原理是什么?
A:    染料是申请专利的。该染料是阳离子两性示踪剂(CAT)染料,跟很多阳离子化合物一样可以快速进入细
胞。染料穿过细胞膜双分子层后被

          散,不需要蛋白结合 或者转运子活性。可滴定部分的筛选使的染料不会再溶酶体聚集,能够标记自噬通道相关的液泡。另外,染料的

          密度增强后可以标记自噬液泡相关片层膜结构。我们可以提供染料染自噬液泡的相关数据。


          诱导自噬溶酶体,比如用氯喹或者 baflimyocin 处理后,会导致荧光变亮(250~300%)。雷帕霉素诱导自噬后能够用 3-MA 抑制。在 

          EBSS 酸缺乏会导致1小时后在自噬液泡中染料的积累,这种积累是可逆的(补充营养后即可恢复)。我们有一系列用于研究自噬的

          化合物(Screen-Well® Autophagy library)


Q:    与单丹磺酰尸胺(MDC
相比,Cyto-ID® 自噬检测试剂有哪些优势?

A:    MDC 需要 365 nm UV荧光照明,与通常流式配置的488n激发源不兼容。Cyto-ID® 自噬染料是488 nm激发波长,绿色的发射荧光,可以

          自噬通道不同的液泡成分。需要注意的是,与 lysomotrophic 染料不同,MDC,LysoTrackerTMRed,吖啶橙主要是染溶酶体的, 

          Cyto- ID®自噬染料只能染一点点溶酶体,主要是染自噬溶酶体和早期自噬部分的选择标记物。


Q:    与GFP-LC3转染细胞相比,Cyto-ID® 自噬检测试剂盒(ENZ-51031
的优势是什么?

A:    Cyto-ID® 检测试剂盒(ENZ-51031)的最大优势是不用转染细胞。转染很短暂,不同实验需要再购买相关试剂。由于细胞过表达,会导

          致 GFP-LC3 聚集,结果呈假阳性。转染效率低于100%,有些细胞不会表达必要的 GFP 组件。该试剂盒检测的自噬,细胞群的一致性会更

          好。不需个细胞系都进行转染。也可以标记原代。细胞原代细胞不容易进行转染。


Q:    有哪些细胞系或者原代细胞可用 Cyto-ID® 自噬检测试剂?
A:    用该试剂盒见检测过的代表性的细胞和细胞系包括肝细胞,SK-N-SH 神经瘤细胞,CHO 细胞,骨肉瘤来源细
胞,黑素留细胞,乳腺癌细胞,

          颈癌胞,卵巢癌细胞,B淋巴瘤细胞,结肠癌细胞,HepG 细胞,Jurkat T 细胞,牛大动脉内皮细胞(BAEC)。


Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂能否与其他染料配合使用,区分细胞核内体和自噬内涵体?
A:    Cyto-ID® 红色长期示踪剂染料(ENZ-51037)能够染细胞质膜,通过细胞内吞存在于细胞中。Cyto-ID® 
色染料与 Cyto-ID® 自噬检测试

          能够高亮异体吞噬vs自噬。也可以 Cyto-ID® 自噬检测试剂与 Lyso-ID® 红色染料或者 LysoTracker™ 红色染料进行活细胞染色,荧光显微

          镜观察。


Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂的稳定性如何?
A:    荧光染料会发生光褪色,但是这种染料比荧光素更稳定。按照操作手册出来荧光染料。

Q:    Cyto-ID® 自噬检测试剂盒染色后是否可固定细胞?
A:    在操作手册中提供了固定细胞的流程。不推荐用表面活性剂给细胞打孔,定位的荧光染料丢失。

Q:    活细胞检测时,荧光信号强度可维持多长时间?
A:    细胞诱导后发生自噬,在分析前染色。诱导时间少于1小时或者诱导几天,诱导时间取决于自噬诱导剂。我们没有在活细胞上进行长时间的

          色,有客户发现可以至少染色24小时。


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
ENZ-51025-K500 ER-ID® Green assay kit 
ER-ID® 绿色检测试剂盒
500 assays/100 assays
ENZ-51032-K100 Organelle-ID RGB® III assay kit 
高尔基体/内质网/细胞核检测试剂盒
500 assays/100 assays

SCREEN-WELL® Autophagy library Screen-Well自噬化合物库 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

BML-2837-0100

1 Library 咨询


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 包含96 种已知的自噬诱导剂或者抑制剂,可作用于与自噬相关的蛋白或受体 浓度:溶于DMSO(10mM)

CYTO-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID自噬检测试剂盒 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ENZ-51031-K200

200 tests 7,030.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 申请专利的荧光染料,可以特异性监测活细胞中的自噬。特异性检测细胞内的自噬泡,包括前自噬体,自噬体和自噬溶酶体。试剂盒组分中包括雷帕霉素,自噬诱导剂,可以作为阳性对照。
常用监测细胞自噬的方式是构建LC3-GFP(绿色荧光蛋白)融合蛋白,LC3蛋白可以和自噬体膜发生特异性结合,GFP作为示踪剂。但是构建LC3-GFP融合基因,转染,表达需要一定时间,而且LC3-GFP表达不理想也会影响细胞自噬的检测。该试剂盒采用申请专利的自噬荧光检测试剂,免去转染表达的时间,特异性高于LC3。
可用于高通量筛选。

CYTO-ID® Autophagy detection kit CYTO-ID自噬检测试剂盒 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ENZ-51031-0050

50 tests 3,420.00


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细胞自噬定量检测试剂盒,可在活细胞内进行实验,无需细胞转染。

传统的GFP-LC3法需要进行细胞转染,GFP-LC3的转染效果和表达效果影响自噬的检测。

特别适用于筛选自噬激活剂与抑制剂 

应用:流式细胞仪,荧光显微镜, 荧光检测和高通量筛选 

试剂盒组成: Cyto-ID® 绿色检测试剂(自噬检测试剂)

                      Hoechst 33342 核染色

                      自噬诱导剂(Rapamycin)

                      自噬诱导剂(Chloroquine)

SCREEN-WELL® Autophagy library Screen-Well 自噬 化合物库 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
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(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

BML-2837-0500

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p62 ELISA kit P62酶联免疫试剂盒 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:-80℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ADI-900-212-0001

96 wells 8,860.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 p62是抑制和诱导自噬的双重标记物。
定量检测p62
当p62表达量减少时,LC3-II仍然会维持高水平,作为自噬标记物,p62可能会更好的监测自噬现象。
ELSIA方法比免疫印迹法相比,具有更高的灵敏度,更好的重复性,可用于高通量筛选。
灵敏度: 100pg/ml (625 – 40,000pg/ml) 
检测时间: 3小时
检测物种:人,大鼠和小鼠
样品类型:细胞裂解液。文献报道可用于外周血单核细胞裂解液。
保存:标准品保存于-80℃,其余保存在4℃。

Beclin-1 polyclonal antibody 自噬基因Beclin1多抗 品牌:Enzo


品牌:Enzo
CAS No.:
储存条件:+4℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

ADI-905-721-100

100 µg 6,100.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 自噬基因Beclin 1多抗 宿主:兔  物种特异性: 人,小鼠,大鼠
应用: IHC(2µg/ml) WB(0.5-1.0µg/ml)