SPR00SIA1-默克millipore纯水柱SmartPak DQ3纯化柱

  • 型号 SPR00SIA1
  • 品牌 Merck Millipore密理博
  • 【简单介绍】

    默克millipore纯水柱SmartPak DQ3纯化柱 Direct-Q系统专为用水量较小的用户设计,可直接由自来水制备纯水和超纯水,适应实验室不同的应用需要。超纯水可用于色谱分离流动相制备,分光光度法空白和标准溶液的制备,光谱或其他分析技术,以及生化实验缓冲液的配制。

    产品名称:纯化柱

    规格型号:SmartPak DQ3
    产品货号:SPR00SIA1
    品牌|厂商:MERCK MILLIPORE|默克 密理博

    一体化Smartpak纯化柱便于简单且快速地进行更换

    用活性炭预处理自来水,接着用反渗透法纯化水,然后再用离子交换树脂纯化水

    一般应用

    玻璃器皿清洗

    增湿器、高压高温灭菌器、清洗机进水

    Milli-Q? 超纯水系统的进水

    直接生产 III 级实验室用水,产水流速可达 16L/h特性

     

    预过滤柱装置包含三种纯化培养基

    对反渗透膜的自行维护

    带高回收回路的先进反渗透技术将水消耗充分降低 50%

    稳定的产水流速

    在对细菌敏感的应用中使用可选配的 UV 灯 可以获得*的水质

    所有系统功能都可以通过袖珍键盘操作访问并显示在背光屏幕上

     

    Direct-Q系统专为用水量较小的用户设计,可直接由自来水制备纯水和超纯水,适应实验室不同的应用需要。超纯水可用于色谱分离流动相制备,分光光度法空白和标准溶液的制备,光谱或其他分析技术,以及生化实验缓冲液的配制。纯水可用于常规玻璃器皿的洗涤和润洗。Direct-Q 3 UV系统专门配置了一个185/245nm双波长紫外灯,生产低于TOC水平的超纯水,尤其适合对有机物敏感的应用。创新的小体积远程取水器让您取水更便捷。

    默克millipore纯水柱SmartPak DQ3纯化柱 SPR00SIA1

    详情说明:
    SPR00SIA1-默克millipore纯水柱SmartPak DQ3纯化柱

CP2ALLRESCN-默克Millipore明澈A2纯化柱

  • 型号 CP2ALLRESCN
  • 品牌 Merck Millipore密理博
  • 【简单介绍】

    默克Millipore明澈A2纯化柱
    说明:Q-GARD A2纯化柱
    数量/包装:1
    产品名称:Q-GARD 纯化柱
    适用系统:MILLIPORE密理博实验室纯水超纯水系统明澈-D 24 UV
    订货号:CP2ALLRESCN

    默克Millipore明澈A2纯化柱 CP2ALLRESCN

     

    说明:Q-GARD A2纯化柱 数量/包装:1 产品名称:Q-GARD 纯化柱 适用系统:MILLIPORE密理博实验室纯水超纯水系统明澈-D 24 UV 订货号:CP2ALLRESCN

     

    选配件:

     

    储水水箱

    可从Millipore水箱中选择容积为30L至350L不等的产品,以达到*纯水储量

     

    纯水取水器:取水触手可及

    从明澈-D系统可以选择纯水取水水枪,将储水水箱里的纯水通过取水水枪送到水池、清洗口、清洗机、老化箱等需要纯水的地方,从而极大的方便使用。

     

    挂墙组件

    将明澈-D安装在墙上或柜下,可节省空间。

     

    保护装置

    о漏水传感器–放置于地上,如果地板上有水,此传感器可使系统停止进水。

    о液位传感器–将水箱液位信息传输给Milli-Q系统,以根据用户选择的等级启动或停止水纯化操作。当水箱空时,安全液面可阻止空气进入超纯水中。

    о254nm UV灯:该UV灯为选配装置,从水箱入口上游处开始安装,可将即纯水中的细菌含量减少至原来的1/1000

     

    终端过滤装置

    可供选择的终端精制器,为您的研究带来Z适合的水质:

    BioPak、Millipak精制器。

     

    MERCK MILLIPORE默克密理博实验室纯水超纯水系统明澈-D 24 UV是您Z“忠实可靠的实验室纯水伙伴”,它能满足您对实验室纯水系统Z根本的需求。

    默克Millipore明澈A2纯化柱 CP2ALLRESCN

QGARDT1X1-密理博millipore Q-Gard T1预纯化柱

  • 型号 QGARDT1X1
  • 品牌 Merck Millipore密理博
  • 【简单介绍】

    密理博millipore Q-Gard T1预纯化柱 QGARDT1X1
    产品名称:Q-Gard T1预纯化柱

    产品货号:QGARDT1X1

    品牌:密理博|Millipore

    密理博货号: QGARDT1X1

    纯化方式:

    · 活性碳

    · 离子交换

    · LeFil™ 和 OrganeFil™ 配方填料

    密理博millipore Q-Gard T1预纯化柱 QGARDT1X1

     

    产品名称:Q-Gard T1预纯化柱

    产品货号:QGARDT1X1

    品牌:密理博|Millipore

    密理博货号: QGARDT1X1

    纯化方式:

    · 活性碳

    · 离子交换

    · LeFil™ 和 OrganeFil™ 配方填料

     

    密理博millipore Q-Gard T1预纯化柱 QGARDT1X1

    订购信息:

     

    QGARDT1X1 Q-GARD T1 PACK (1/PK)

    QGARDT2X1 Q-GARD T2 PACK (1/PK)

    QGARDT3X1 Q-GARD T3 PACK (1/PK)

    QGARDTBX1 Q-GARD T BORON PACK (1/PK)

    QGARDTL01 QGARD TL POLISHING PACK

     

QTUM0TIX1-密理博纯水柱Quantum TIX 纯化柱纯水机耗材

  • 型号 QTUM0TIX1
  • 品牌 Merck Millipore密理博
  • 【简单介绍】

    密理博纯水柱Quantum TIX 纯化柱纯水机耗材 QTUM0TIX1
    Quantum TIX (Ionex 树脂) 纯化柱
    商标名:Quantum
    数量/包装:1
    选择器标准:labwater
    产品名称:Quantum TIX 柱

     

    说明:

    Quantum TIX (Ionex 树脂) 纯化柱

    商标名:

    Quantum

    数量/包装:

    1

    选择器标准:

    labwater

    产品名称:

    Quantum TIX 柱

    产品应用:

    特别用于去除离子

    RephiLe 货号: M1001MTIX
    密理博货号: QTUM0TIX1
    纯化方式:

      离子交换
        LeFilTM 配方填料

    RephiSolo U Pack TIX 超纯化柱可为 Millipore 下述系统提供更换耗材:

        Milli-Q Advantage A10                        维护方案 
        Milli-Q Reference                               维护方案 
        Milli-Q Integral                                   维护方案  

    密理博纯水柱Quantum TIX 纯化柱纯水机耗材 QTUM0TIX1

    QTUM0TIX1-密理博纯水柱Quantum TIX 纯化柱纯水机耗材

SPR00SIA1-Millipore密理博DQ3纯化柱

  • 型号 SPR00SIA1
  • 品牌 Merck Millipore密理博
  • 【简单介绍】

    Millipore密理博DQ3纯化柱 SPR00SIA1
    产品名称:纯化柱
    规格型号:SmartPak DQ3
    产品货号:SPR00SIA1
    品牌|厂商:MERCK MILLIPORE|默克 密理博

    一体化Smartpak纯化柱便于简单且快速地进行更换

    用活性炭预处理自来水,接着用反渗透法纯化水,然后再用离子交换树脂纯化水

    Millipore密理博DQ3纯化柱 SPR00SIA1

    产品名称:纯化柱

    规格型号:SmartPak DQ3
    产品货号:SPR00SIA1
    品牌|厂商:MERCK MILLIPORE|默克 密理博

    一体化Smartpak纯化柱便于简单且快速地进行更换

    用活性炭预处理自来水,接着用反渗透法纯化水,然后再用离子交换树脂纯化水

    一般应用

    玻璃器皿清洗

    增湿器、高压高温灭菌器、清洗机进水

    Milli-Q? 超纯水系统的进水

    直接生产 III 级实验室用水,产水流速可达 16L/h特性

     

    预过滤柱装置包含三种纯化培养基

    对反渗透膜的自行维护

    带高回收回路的先进反渗透技术将水消耗充分降低 50%

    稳定的产水流速

    在对细菌敏感的应用中使用可选配的 UV 灯 可以获得*的水质

    所有系统功能都可以通过袖珍键盘操作访问并显示在背光屏幕上

     

    Direct-Q系统专为用水量较小的用户设计,可直接由自来水制备纯水和超纯水,适应实验室不同的应用需要。超纯水可用于色谱分离流动相制备,分光光度法空白和标准溶液的制备,光谱或其他分析技术,以及生化实验缓冲液的配制。纯水可用于常规玻璃器皿的洗涤和润洗。Direct-Q 3 UV系统专门配置了一个185/245nm双波长紫外灯,生产低于TOC水平的超纯水,尤其适合对有机物敏感的应用。创新的小体积远程取水器让您取水更便捷。

    Millipore密理博DQ3纯化柱 SPR00SIA1

    产品详情:

    SPR00SIA1-Millipore密理博DQ3纯化柱

WB120204-英国whatman FTA蛋白纯化试剂

  • 型号 WB120204
  • 品牌 GE whatman沃特曼
  • 【简单介绍】

    英国whatman FTA蛋白纯化试剂 WB120204
    Whatman FTA纯化试剂 FTA REAGENT 500ML用于纯化保存在FTA卡上的核酸,确保得到高质量的DNA用于PCR或SNP分析,除去亚铁血红素,PCR抑制剂和其它潜在污染物,采用无毒,低盐的水溶液进行洗提FTA基因卡托盘,可同时放置2张FTA基因卡用于全自动液流分配/加样系统,托盘规格符合SBS标准订.

    英国whatman FTA蛋白纯化试剂  WB120204

     

    Whatman FTA纯化试剂 FTA REAGENT 500ML用于纯化保存在FTA卡上的核酸,确保得到高质量的DNA用于PCR或SNP分析,除去亚铁血红素,PCR抑制剂和其它潜在污染物,采用无毒,低盐的水溶液进行洗提FTA基因卡托盘,可同时放置2张FTA基因卡用于全自动液流分配/加样系统,托盘规格符合SBS标准订.

    简单介绍:

    FTA纯化试剂&FTA基因卡托盘产品展台为您精选FTA纯化试剂&FTA基因卡托盘产品,FTA纯化试剂

    ●用于纯化保存在FTA卡上的核酸

    ●确保得到高质量的DNA用于PCR或SNP分析

    ●除去亚铁血红素,PCR抑制剂和其它潜在污染物

    ●采用无毒,低盐的水溶液进行洗提FTA基因卡托盘

    ●可同时放置2张FTA基因卡用于全自动液流分配/加样系统

    ●托盘规格符合SBS标准订

     

    FTA纯化试剂&FTA基因卡托盘的详细介绍:

    FTA纯化试剂&FTA基因卡托盘

    产品介绍:

    FTA纯化试剂

    ●用于纯化保存在FTA卡上的核酸

    ●确保得到高质量的DNA用于PCR或SNP分析

    ●除去亚铁血红素,PCR抑制剂和其它潜在污染物

    ●采用无毒,低盐的水溶液进行洗提

     

    FTA基因卡托盘

    ●可同时放置2张FTA基因卡用于全自动液流分配/加样系统

    ●托盘规格符合SBS标准
    GE whatman FTA微型卡用于DNA采集、纯化和分析的普通FTA卡

    英国whatman FTA蛋白纯化试剂  WB120204

    订购信息:

    WB120204-英国whatman FTA蛋白纯化试剂

PA标签系统 重组蛋白纯化检测用

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用

重组蛋白纯化检测用

PA标签系统

PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用

PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用

◆特点


● 通过树脂再生,降低运行成本

● 超高亲和性抗体,实现高回收率、高纯度纯化

● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中,有效纯化蛋白

● PA标签系统是使用可识别肽标签(12个氨基酸残基)的单抗(NZ-1)。日本开发的亲和性纯化标签系统。

● NZ-1单抗对PA tag具有高亲和性和特异性,可应用于Western Blotting、细胞流式分析、免疫组化(ICC)。

   通过免疫沉淀,可纯化PA标签融合蛋白以及树脂再生。

● PA标签系统,可一步纯化高纯度PA标签融合蛋白。

 


◆PA标签系统


  Fujii, Y. et al., "PA tag: A versatile protein tagging system using a super high affi nity antibody against a dodecapeptide derived from human podoplanin.", Protein Exp. Purif., 95, 240-247(2014).



Fujii, Y. et al.


  新型亲和标签系统“PA tag”的应用方法~蛋白的纯化及检测~

  蛋白科学学会档案, 7, e075 (2014)



◆PA标签表达载体案例


PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用

 


载体

表达模式

宿主细胞

MCS启动子

pCAG

瞬时表达

灵长类(人、猴)、犬细胞等粘着细胞
  和啮齿动物细胞

CAG

和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击参考。)

测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品现货说明书中。

另外可点击和光主页/TARGET标签,查看序列信息、Multi Cloning Site(MCS)信息。

◆用PA标签从培养上清中亲和提纯的案例


PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用

数据提供:大阪大学 蛋白研究所附属蛋白分析先进研究中心  

分子创制学研究室 高木淳一老师,藤井勇树老师

 


◆Protocol目的蛋白的纯化


1.哺乳类动物细胞转染(HEK293T)
  转染处于40-60%融合状态的细胞
  培养基:D-MEM, 5%FBS

2.回收培养上清和吸附蛋白树脂
  转染48-72小时后,回收约420 mL培养上清,加入8 mL抗PA标签抗体琼脂糖珠,混合2小时(2-10℃)

3.树脂回收
  用50 mL的纯化柱。回收步骤2)中的琼脂糖

4.树脂洗涤
  加入珠4倍量的TBS 缓冲液(20 mM Tris-HCl, 150 mM NaCl),清洗5次

5.PA标签肽从树脂中竞争性洗脱
  加入经1×TBS溶液, pH 7.5溶解过的PA 标签肽(终浓度0.1 mg/mL),体积量需为珠的一倍,

  然后分10次回收PA标签融合蛋白X

6.SDS-PAGE
  样品量
  c. sup:5 μL, flow through:5 μL, wash:5 μL,
  肽洗脱(1-10):各10 μL

  可纯化PA标签融合蛋白X且不依赖PA标签。→可实现极高纯度的亲和纯化。

 


◆通过PA tag降低背景的方法

PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用
                可在含有高浓度NaCl的TBS溶液中,通过前清洗去除杂质蛋白!!

M: Marker
I: input 100ng分
P: 纯化前样品
1: wash片段①
2: wash片段②
3: wash片段③
4: wash片段④
5: wash片段⑤
6: wash片段⑥
7: wash片段⑦
8: wash片段⑧
9: wash片段⑨
10: 酸洗脱①
11: 酸洗脱②
12: 酸洗脱③
13: 酸洗脱④
14: 酸洗脱⑤

 

  在20 mL的昆虫细胞溶解液中加入蛋白Z,使其浓度变为1.0 mg/L后,添加200 μL抗PA标签抗体琼脂糖珠,4℃温度条件下,搅拌3小时。

  分别用不同浓度的TBS溶液(0.15 M、0.5 M、1.0 M NaCl)进行调整,用琼脂糖珠50倍量清洗。在回收的各珠中加入0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl(pH 2.7),室温条件下平稳震动5 min。

  离心后回收上清,用1 M Tris-HCl (pH 9.0)做中和处理。

  SDS-PAGE后进行银染,比较去除污染蛋白之后,不同浓度下的结果。


◆使用案例:Western Blotting

PA标签系统                              重组蛋白纯化检测用
数据提供:东北大学研究生院医学系研究科 

地域革新领域 加藤 幸成老师,金子   美华老师

NZ-1显示出与天然抗体具有相同的高检测灵敏度。

Lane 1

一抗:抗IDH1抗体(RcMab-1), 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
 Lane 2

一抗:抗PA tag抗体, 1 μg/mL

二抗:抗大鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
Lane 3

一抗:抗DYKDDDDK标签抗体, 3.5 μg/mL

二次抗体:抗小鼠IgG-HRP标签, 1000倍稀释
 
样品量:各10 μg
曝光时间:10分钟

 


◆PA标签系列


产品名称

子类克隆号

适用实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗PA标签, 大鼠单抗

Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody

大鼠IgG2a
  NZ-1

IP, WB, FCM, ICC

免疫化学用

016-25861

200 μL

012-25863

1 mL

HRP标签单抗

抗PA标签, 大鼠单抗,过氧化酶结合

Anti PA tag, Rat Monoclonal Antibody, Peroxidase Conjugated

大鼠IgG2a

NZ-1

WB

免疫化学用

015-25951

200 μL

011-25953

1 mL

 


产品名称

子类克隆号

规格

产品编号

包装

抗体结合琼脂糖珠

抗PA标签抗体琼脂糖珠

Anti PA tag Antibody Beads

大鼠IgG2a   NZ-1

免疫化学用

012-25841

2 mL(Net 1 mL)

018-25843

10 mL

(Net 5 mL)

016-25844

50 mL

(Net 25 mL)

 识别N端、C端的PA标签
 使用载体:4% 琼脂糖
 溶液组成:1 x PBS (pH7.2), 0.05 w/v%叠氮化钠
 抗体结合量:参见标签记载
 结合容量:1 mL本品可结合约0.015-1.0 mg的PA标签融合蛋白

抗体结合磁珠

MagCaptureTM HP 抗PA标签抗体磁珠

MagCapture™ HP Anti PA tag Antibody Magnetic Beads

大鼠IgG2a   NZ-1

免疫化学用

137-18751

2 mL

溶液组成:1×TBS(pH 7.4), 50% glycerol, 0.05 w/v% sodium azide

 


产品名称

备注

规格

产品编号

包装

PA标签肽

PA tag Peptide

含量(HPLC)95%以上

基因研究用

167-25501

5 mg

163-25503

25 mg

清洗溶液

PA标签清洗溶液

PA tag Washing Solution

已过滤消毒
即用型

基因研究用

169-27261

50 mL

 


产品名称

可选Marker

产品编号

包装

大肠杆菌

动物细胞

瞬时载体

pCAG-Ble PA 标签-C

pCAG-Ble PA tag-C

Bleomycin

161-26861

20 μg

pCAG-Ble PA 标签-N 信号 增加型

pCAG-Ble PA tag-N Signal Plus

Bleomycin

168-26871

20 μg

pCAG-Bsd PA 标签-C

pCAG-Bsd PA tag-C

Blasticidin S

165-26881

20 μg

pCAG-Bsd PA 标签-N 信号 增加型

pCAG-Bsd PA tag-N Signal Plus

Blasticidin S

162-26891

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-C

pCAG-Hyg PA tag-C

Hygromycin B

165-26901

20 μg

pCAG-Hyg PA 标签-N 信号 增加型

pCAG-Hyg PA tag-N Signal Plus

Hygromycin B

162-26911

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-C

pCAG-Neo PA tag-C

Kanamycin

G418

169-26921

20 μg

pCAG-Neo PA 标签-N 信号 增加型

pCAG-Neo PA tag-N Signal Plus

Kanamycin

G418

166-26931

20 μg



◆相关产品


内参照

下表为Western Blot实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin, Monoclonal Antibody,   Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白, 单抗

Anti α-Tubulin, Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin, Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白, 单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody
  抗GAPDH, 单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH, Monoclonal Antibody, Peroxidase   Conjugated
  抗GAPDH, 单抗, 过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I,无动物源成分(通用型)

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液(不含EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V (无EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI,DMSO溶液,用于植物(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII,DMSO溶液,组氨酸标签蛋白(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点(pI)

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

(KD(M))

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

(培养上清)

+

+

+++++

背景

(细胞裂解物)

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点(pI)

3.97

4.00

3.56

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

单抗边界强度

(KD(M))

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

(培养上清)

++++

+++

+++

++++

背景

(细胞裂解物)

++++

++++

+++

++++

  本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同,特异性也会有所变化,因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

TARGET标签系统 重组蛋白纯化检测用

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

重组蛋白纯化检测用

TARGET标签系统


TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用


◆特点


● 通过树脂再生,降低运作成本

● 温和洗脱、清洗,实现高纯度

● 在动物细胞表达系(HEK293T细胞、CHO细胞等)中有效纯化蛋白


  TARGER标签系统使用的是可识别肽标签(21个氨基酸残基)的单抗(P20.1),是日本开发的亲和纯化标签系统。

  TARGET标签系统实践证明,即使在传统系统都难以进行高纯度蛋白纯化的动物细胞表达系中,也可有效地进行亲和纯化。



◆TARGET标签系统


  A rapid screening method for cell lines producing singly-tagged recombinant proteins using the“ TARGET tag”system. Tabata S. et al., J. Proteomics, 2010 Aug 5;73(9):1777-85.

 


◆TARGET 标签表达载体示意图


TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

 


产品选择


载体

表达模式

宿主细胞

MCS启动子

pEBMulti

非整合型稳定表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞

CAG

pCAG

瞬时表达

灵长类(人、猴)、狗细胞等贴壁细胞、大/小鼠等动物细胞

CAG


富士胶片和光还推出除上述抗性基因载体外的其他载体。(请点击查看)

测序用引物序列、其他载体序列的相关详细信息,已附在产品随货说明书中。

另外可点击富士胶片和光主页/TARGET标签,查看序列信息、多克隆位点(MCS)信息。

 

TARGET标签融合蛋白的免疫沉淀

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

通过Transient 载体,

表达TARGET标签融合重组蛋白

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

培养上清(培养第7天)

每10 mL中,分别添加0.1 mL(net 0.05 mL)的抗体磁珠(①抗TARGET标签抗体琼脂糖珠、②抗DYKDDDDK标签抗体琼脂糖珠,其他公司产品),4℃条件下,进行2小时免疫沉淀。

清洗后,在回收的各珠中分别添加0.5 mL 0.2 mg/mL

TARGET标签肽/TBS和0.2 mg/mL DYKDDDDK肽/TBS,4℃条件下,平稳震动0.5小时。离心后回收上清。

再分别在各珠中添加0.5 mL 0.1 M Glycine-HCl (pH 2.7),室温下,平稳震动5分钟。离心后,回收上清并用1M Tris-HCl (pH 9.0)中和。

上图为SDS-PAGE处理后的银染结果。

与传统DYKDDDDK tag相比,背景更低

→高纯度!

 M:M.W. Marker

 1.仅转染载体的培养上清

 2.转染了蛋白Y-TARGET 标签表达质粒的细胞培养上清

 3.转染了TARGET标签-蛋白Y 表达质粒的细胞培养上清

  也可使用市售的Transient载体



确认非整合型载体TARGET   tag C端融合重组蛋白的表达

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

利用可编码表达人源生理活性蛋白基因的质粒转染 HEK293N 细胞后,从初期细胞数 3×10cells/mL 开始培养,回收 0/3/7 日的培养上清。

用 20 μL/lane 的培养上清进行 SDS-PAGE 处理,通过银染和 Western blotting,检测出蛋白的表达。

TARGET标签系统                              重组蛋白纯化检测用

 可确认到与市面售卖的 Tag 系统有相同的表达量和检测灵敏度。

 


◆TARGET 标签系列


产品名称

子类
克隆号

适用

实验

规格

产品编号

包装

单抗

抗TARGET标签,单抗

Anti TARGET tag,Monoclonal Antibody

小鼠 IgG1
  P20.1

IP, WB

免疫化学用

016-25481

200 μg

012-25483

1 mg

HRP标签单抗

抗 TARGET tag,单抗,过氧化酶结合

Anti TARGET tag, Monoclonal Antibody (P20.1) Peroxidase conjugated

小鼠 IgG1   P20.1

WB

免疫化学用

015-25571

200 μL

011-25573

1 mL

产品名称

子类克隆号

规格

产品编号

包装

抗体结合琼脂糖珠

抗 TARGET 标签抗体琼脂糖珠

Anti TARGET tag Antibody Beads

小鼠 IgG1

P20.1

免疫化学用

018-25561

2 mL

(Net 1 mL)

014-25563

10 mL

(Net 5 mL)

012-25564

50 mL

(Net 25 mL)

 识别 N 端、C 端的 TARGET 标签

 使用载体:4% 琼脂糖
 溶液组成:1×TBS (pH 7.5),0.05 w/v%叠氮化钠
 抗体结合量:2.0 mg/mL
 结合容量:1 mL 本品可结合约 0.1-1.0 mg 的 TARGET 标签融合蛋白

 


产品名称

备注

规格

产品编号

包装

TARGET标签肽

TARGET tag Peptide

含量(HPLC)95%以上

基因研究用

200-19673

5 mg

208-19674

25 mg

清洗液

TARGET标签清洗液

TARGET tag Washing Solution

已过滤消毒
即用型

基因研究用

208-19831

50 mL

 


产品名称

可选 Marker

产品编号

包装

大肠杆菌

动物细胞

瞬时表达载体

C端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

pCAG-Ble TARGET tag-C

博莱霉素

165-26381

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Ble载体

pCAG-Ble TARGET tag-N

博莱霉素

162-26391

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

pCAG-Bsd TARGET tag-C

杀稻瘟素S

165-26401

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Bsd载体

pCAG-Bsd TARGET tag-N

杀稻瘟素S

162-26411

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

pCAG-Hyg TARGET tag-C

潮霉素B

169-26421

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Hyg载体

pCAG-Hyg TARGET tag-N

潮霉素B

166-26431

20 μg

C端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

pCAG-Neo TARGET tag-C

卡那霉素

G418

163-26441

20 μg

N端插入TARGET标签的pCAG-Neo载体

pCAG-Neo TARGET tag-N

卡那霉素

G418

160-26451

20 μg

游离载体

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

pEBMulti-Ble TARGET tag-C

博来霉素

167-26461

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Ble载体

pEBMulti-Ble TARGET tag-N

博来霉素

164-26471

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Bsd载体

pEBMulti-Bsd TARGET tag-C

杀稻瘟素S

161-26481

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMultI-Bsd载体

pEBMulti-Bsd TARGET tag-N

杀稻瘟素S

168-26491

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

pEBMulti-Hyg TARGET tag-C

潮霉素B

161-26501

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体

pEBMulti-Hyg TARGET tag-N

潮霉素B

168-26511

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

pEBMulti-Neo TARGET tag-C

卡那霉素

G418

165-26521

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Neo载体

pEBMulti-Neo TARGET tag-N

卡那霉素

G418

162-26531

20 μg

C段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体

pEBMulti-Puro TARGET tag-C

氨苄青霉素

嘌呤霉素

169-26541

20 μg

N段插入TARGET标签的pEBMulti-Puro载体

pEBMulti-Puro TARGET tag-N

氨苄青霉素

嘌呤霉素

166-26551

20 μg



◆相关产品


内参照

下表为 Western Blot 实验中参照用单抗一览表。


产品名称

规格

产品编号

包装

抗β肌动蛋白单抗
  Anti β-Actin,Monoclonal Antibody

免疫化学用

013-24553

200 μg

011-24554

1 mg

017-24556

5 mg

抗β肌动蛋白单抗,过氧化物酶标记

Anti β-Actin,Monoclonal Antibody,Peroxidase Conjugated

免疫化学用

017-24573

200 μL

抗α-微管蛋白,单抗

Anti α-Tubulin,Monoclonal Antibody

免疫化学用

011-25034

10 μg

017-25031

200 μg

013-25033

1 mg

Anti β-Tubulin,Monoclonal Antibody
  抗β-微管蛋白,单抗

免疫化学用

018-25044

10 μg

014-25041

200 μg

010-25043

1 mg

Anti GAPDH,Monoclonal Antibody
  抗GAPDH,单抗

免疫化学用

016-25523

200 μg

014-25524

1 mg

010-25526

5 mg

Anti GAPDH,Monoclonal Antibody,Peroxidase Conjugated
  抗GAPDH,单抗,过氧化酶结合

免疫化学用

015-25473

200 μL

 


蛋白酶抑制剂系列


产品名称

规格

产品编号

包装

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 I,无动物源成分(通用型)

Protease Inhibitor Cocktail Set I, Animal-derived-free (for general use) (×100), Lyophilized

通用型

165-26021

1 mL用

161-26023

1 mL用×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒III,   DMSO溶液(不含EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set III, DMSO Solution   (EDTA free) (×100)

动物细胞

163-26061

1 mL

169-26063

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒V (无EDTA)(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set V (EDTA free) (×100), Lyophilized

2D电泳

162-26031

1 mL

168-26033

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒 VI,DMSO溶液,用于植物(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VI, DMSO Solution (for Plant) (×100)

植物细胞

164-26091

1 mL

160-26093

1 mL×5

蛋白酶抑制剂混合物试剂盒VII,DMSO溶液,组氨酸标签蛋白(×100)
  Protease Inhibitor Cocktail Set VII, DMSO Solution   (for Histidine-tagged Protein) (×100)

His Tag 纯化

167-26101

1 mL

163-26103

1 mL×5

亲和标签比较表

亲和标签

TARGET

PA

6xHis

氨基酸序列

(YPGQ)5V

GVAMPGAEDDVV

HHHHHH

残基数

21

12

6

分子量 (kDa)

2.34

1.16

0.84

等电点(pI)

5.52

3.49

7.21

配体

TARGET tag

PA tag

Ni, Co, Zn, Cu

亲和珠回收

40% Propyleneglycol,
  1×TBS(pH7.5)

3M MgCl2, MES(pH6.0)

0.5M Imididazole(pH7.4)

单抗边界强度

(KD(M))

1.0×10-8

4.9×10-10

Ni-NTA:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

P20.1(Mouse)

NZ-1(Rat)

Merck:HIS. H8(Mouse)

亲和力

++++

+++++

+++

提纯成本

+

+

+

多肽洗脱

+++

+++

Imidazole

背景

(培养上清)

+

+

+++++

背景

(细胞裂解物)

+

+

++++

亲和标签

DYKDDDDK

c-Myc

HA

GST

氨基酸序列

DYKDDDDK

EQKLISEEDL

YPYDVPDYA

残基数

8

10

9

218

分子量 (kDa)

1.01

1.20

1.10

26

等电点(pI)

3.97

4.00

3.56

配体

DYKDDDDK tag

c-Myc tag

HA tag

GST

亲和珠回收

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

Glutathione,
  Tris-HCl,
  Glycine Buffer(pH2~3.5)

单抗边界强度

(KD(M))

2.8×10-8

2.2×10-9

2.8×10-9

Glutathione:
  1.0×10-5~-6

单抗

Clone No.

M2(Mouse)

9E10(Mouse)

3F10(Mouse)
  HA-7(Rat)

Wako:5A7(Mouse)

亲和力

++++

++++

++++

++++

提纯成本

++

++

++

+

多肽洗脱

+++

++

++

Glutathione

背景

(培养上清)

++++

+++

+++

++++

背景

(细胞裂解物)

++++

++++

+++

++++

  本比较表为Wako独家调查的数据。样品、检测方法和手法的不同,特异性也会有所变化,因此无法保证各个亲和标签的功能。

 

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级

Phos-tag™ 琼脂糖 Phos-tag™ Agarose

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

Phos-tag™ AgarosePhos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

亲和层析纯化磷酸化蛋白

  填入色谱柱中使用。可分离、纯化、浓缩磷酸化蛋白。不使用界面活性剂、还原剂,可得到状态近似生物体内的磷酸化蛋白。


原理


Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose


优点、特色


 缓冲液不含有界面活性剂、还原剂。

 与亲和层析方法类似。

 可在1小时内纯化磷酸化蛋白。

 Phos-tag™ Agarose 捕获结合到 Tyr、Thr、Ser、Asp、His 等氨基酸、糖类、脂类上的无机磷酸根和大二价磷酸根

 可在生理条件下(pH7.5)捕捉蛋白。

 纯化后的产物可用于 Co-IP 实验和其他蛋白活性实验。

案例、应用:


【使用例子:A431 裂解液中的磷酸化蛋白的纯化】


  把Phos-tag™ 填充到柱里,再加上 A431 裂解液。

  SYPRO Ruby 染色(左图)再使用 Anti-p Tyr 抗体进行免疫印迹(右图),检测出结果。

  结果确认磷酸化蛋白浓缩在柱吸附层里。


  M:分子量标记

  Lane 1:未吸附层

  Lane 2:吸附层

  Lane 3:柱清洗层

Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

Phos-tag™ 系列

磷酸化蛋白新方法!

  Phos-tag™ 是一种能与磷酸离子特异性结合的功能性分子。它可用于磷酸化蛋白的分离(Phos-tag™ Acrylamide)、Western Blot 检测(Phos-tag™ Biotin)、蛋白纯化 (Phos-tag™ Agarose)及质谱分析 MALDI-TOF/MS (Phos-tag™ Mass Analytical Kit)。


Phos-tag™ 的基本结构


Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose


特点


与 -2 价磷酸根离子的亲和性和选择性高于其它阴离子

在 pH 5-8 的生理环境下生成稳定的复合物

原理


Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

相关应用


Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

相关产品

 产品名称

 用  途

 Phos-tag™ Acrylamide

 分离SDS – PAGE 分离不同磷酸化水平的蛋白

 SuperSep Phos-tag™

 分离预制胶中含有 50 μM Phos-tag™ Acrylamide

 Phos-tag™ Biotin

 检测代替 Western Blot 检测中的磷酸化抗体

 Phos-tag™ Agarose

 纯化通用柱层析,纯化磷酸化蛋白

 Phos-tag™ Mass

 Analytical Kit

 分析:用于质谱 MALDI-TOF/MS 分析,提高磷酸化分子的检测灵敏度


phos-tag™ 由日本广岛大学研究生院医齿药学综合研究科医药分子功能科学研究室开发。

更多产品信息,请点击:http://phos-tag.jp

Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

Phos-tag 第6版说明书

Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

Phos-tag系列 ver. 8



Phos-tag™ 琼脂糖                              Phos-tag™ Agarose

说明书

【参考文献】


·  Conversion of graded phosphorylation into switch-like nuclear translocation via autoregulatory mechanisms in ERK signalling[J].Nature communications, 2016, 7,Shindo Y, Iwamoto K, Mouri K, et al.

·  PTEN modulates EGFR late endocytic trafficking and degradation by dephosphorylating Rab7[J]. Nature communications, 2016, 7,Shinde S R, Maddika S.

·  Feedback control of ErbB2 via ERK-mediated phosphorylation of a conserved threonine in the juxtamembrane domain[J]. Scientific Reports, 2016, 6: 31502,Kawasaki Y, Sakimura A, Park C M, et al.

·  Plastid-nucleus communication involves calcium-modulated MAPK signalling[J]. Nature Communications, 2016, 7,Guo H, Feng P, Chi W, et al.

·  Sequential domain assembly of ribosomal protein S3 drives 40S subunit maturation[J]. Nature communications, 2016, 7,Mitterer V, Murat G, Réty S, et al.

·  Phos-tag analysis of Rab10 phosphorylation by LRRK2: a powerful assay for assessing kinase function and inhibitors[J]. Biochemical Journal, 2016: BCJ20160557,Ito G, Katsemonova K, Tonelli F, et al.

·  Analysis of phosphorylation of the myosin targeting subunit of smooth muscle myosin light chain phosphatase by Phos-tag SDS-PAGE[J]. The FASEB Journal, 2016, 30(1 Supplement): 1209.1-1209.1,Walsh M P, MacDonald J A, Sutherland C.

·  Using Phos-Tag in Western Blotting Analysis to Evaluate Protein Phosphorylation[J]. Kidney Research: Experimental Protocols, 2016: 267-277,Horinouchi T, Terada K, Higashi T, et al.

·  The Abundance of Nonphosphorylated Tau in Mouse and Human Tauopathy Brains Revealed by the Use of Phos-Tag Method[J]. The American journal of pathology, 2016, 186(2): 398-409,Kimura T, Hatsuta H, Masuda-Suzukake M, et al.

·  Phos-tag SDS-PAGE resolves agonist-and isoform-specific activation patterns for PKD2 and PKD3 in cardiomyocytes and cardiac fibroblasts[J]. Journal of Molecular and Cellular Cardiology, 2016,Qiu W, Steinberg S F.

·  Analysis of phosphorylation of the myosin-targeting subunit of myosin light chain phosphatase by Phos-tag SDS-PAGE[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2016, 310(8): C681-C691,Sutherland C, MacDonald J A, Walsh M P.

·  Electrochemical biosensor for protein kinase A activity assay based on gold nanoparticles-carbon nanospheres, phos-tag-biotin and β-galactosidase[J]. Biosensors and Bioelectronics, 2016, 86: 508-515,Zhou Y, Yin H, Li X, et al.

·  Validation of Cis and Trans Modes in Multistep Phosphotransfer Signaling of Bacterial Tripartite Sensor Kinases by Using Phos-Tag SDS-PAGE[J]. PloS one, 2016, 11(2): e0148294,Kinoshita-Kikuta E, Kinoshita E, Eguchi Y, et al.

·  Phosphopeptide Detection with Biotin-Labeled Phos-tag[J]. Phospho-Proteomics: Methods and Protocols, 2016: 17-29,Kinoshita-Kikuta E, Kinoshita E, Koike T.

·  A Phos‐tag SDS‐PAGE method that effectively uses phosphoproteomic data for profiling the phosphorylation dynamics of MEK1[J]. Proteomics, 2016,Kinoshita E, Kinoshita‐Kikuta E, Kubota Y, et al.

·  Difference gel electrophoresis of phosphoproteome: U.S. Patent Application 15/004,339[P]. 2016-1-22,Tao W A, Wang L.

·  ERK1/2-induced phosphorylation of R-Ras GTPases stimulates their oncogenic potential[J]. Oncogene, 2016,Frémin C, Guégan J P, Plutoni C, et al.

·  Microtubules Inhibit E-Cadherin Adhesive Activity by Maintaining Phosphorylated p120-Catenin in a Colon Carcinoma Cell Model[J]. PloS one, 2016, 11(2): e0148574,Maiden S L, Petrova Y I, Gumbiner B M.

·  Serine 231 and 257 of Agamous-like 15 are phosphorylated in floral receptacles[J]. Plant Signaling & Behavior, 2016, 11(7): e1199314,Patharkar O R, Macken T A, Walker J C.

·  A small molecule pyrazolo [3, 4-d] pyrimidinone inhibitor of zipper-interacting protein kinase suppresses calcium sensitization of vascular smooth muscle[J]. Molecular pharmacology, 2016, 89(1): 105-117,MacDonald J A, Sutherland C, Carlson D A, et al.

·  The RNA polymerase II C-terminal domain phosphatase-like protein FIERY2/CPL1 interacts with eIF4AIII and is essential for nonsense-mediated mRNA decay in Arabidopsis[J]. The Plant Cell, 2016: TPC2015-00771-RA,Chen T, Qin T, Ding F, et al.

·  Vasorelaxant Effect of 5′-Methylthioadenosine Obtained from Candida utilis Yeast Extract through the Suppression of Intracellular Ca2+ Concentration in Isolated Rat Aorta[J]. Journal of agricultural and food chemistry, 2016, 64(17): 3362-3370,Kumrungsee T, Akiyama S, Saiki T, et al.

·  Inhibition of deubiquitinating activity of USP14 decreases tyrosine hydroxylase phosphorylated at Ser19 in PC12D cells[J]. Biochemical and biophysical research communications, 2016, 472(4): 598-602,Nakashima A, Ohnuma S, Kodani Y, et al.

·  Actin Tyrosine-53-Phosphorylation in Neuronal Maturation and Synaptic Plasticity[J]. The Journal of Neuroscience, 2016, 36(19): 5299-5313,Bertling E, Englund J, Minkeviciene R, et al.

·  AMPK-dependent phosphorylation of lipid droplet protein PLIN2 triggers its degradation by CMA[J]. Autophagy, 2016, 12(2): 432-438,Kaushik S, Cuervo A M.

·  Myocardin-related transcription factor a and yes-associated protein exert dual control in G protein-coupled receptor-and RhoA-mediated transcriptional regulation and cell proliferation[J]. Molecular and cellular biology, 2016, 36(1): 39-49,Olivia M Y, Miyamoto S, Brown J H.

·  Extensive phosphorylation of AMPA receptors in neurons[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016, 113(33): E4920-E4927,Diering G H, Heo S, Hussain N K, et al.

·  The transmembrane region of guard cell SLAC1 channels perceives CO2 signals via an ABA-independent pathway in Arabidopsis[J]. The Plant Cell, 2016, 28(2): 557-567,Yamamoto Y, Negi J, Wang C, et al.

·  The Hippo pathway mediates inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation by cAMP[J]. Journal of molecular and cellular cardiology, 2016, 90: 1-10,Kimura T E, Duggirala A, Smith M C, et al.

·  Atg13 is essential for autophagy and cardiac development in mice[J]. Molecular and cellular biology, 2016, 36(4): 585-595,Kaizuka T, Mizushima N.

·  The ChrSA and HrrSA two-component systems are required for transcriptional regulation of the hemA promoter in Corynebacterium diphtheriae[J]. Journal of Bacteriology, 2016: JB. 00339-16,Burgos J M, Schmitt M P.

·  Intergenic Variable-Number Tandem-Repeat Polymorphism Upstream of rocA Alters Toxin Production and Enhances Virulence in Streptococcus pyogenes[J]. Infection and Immunity, 2016, 84(7): 2086-2093,Zhu L, Olsen R J, Horstmann N, et al.

·  Receptor for advanced glycation end products (RAGE) knockout reduces fetal dysmorphogenesis in murine diabetic pregnancy[J]. Reproductive Toxicology, 2016, 62: 62-70,Ejdesjö A, Brings S, Fleming T, et al.

·  Aurora kinase-induced phosphorylation excludes transcription factor RUNX from the chromatin to facilitate proper mitotic progression[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016, 113(23): 6490-6495,Chuang L S H, Khor J M, Lai S K, et al.

·  Quantitative phosphoproteomics of protein kinase SnRK1 regulated protein phosphorylation in Arabidopsis under submergence[J]. Journal of experimental botany, 2016: erw107,Cho H Y, Wen T N, Wang Y T, et al.

·  Temporal regulation of lipin activity diverged to account for differences in mitotic programs[J]. Current Biology, 2016, 26(2): 237-243,Makarova M, Gu Y, Chen J S, et al.

·  Block of CDK1‐dependent polyadenosine elongation of Cyclin B mRNA in metaphase‐i‐arrested starfish oocytes is released by intracellular pH elevation upon spawning[J]. Molecular reproduction and development, 2016, 83(1): 79-87,Ochi H, Aoto S, Tachibana K, et al.

·  Mitotic Exit Function of Polo-like Kinase Cdc5 Is Dependent on Sequential Activation by Cdk1[J]. Cell reports, 2016, 15(9): 2050-2062,Rodriguez-Rodriguez J A, Moyano Y, Játiva S, et al.

·  PLK2 phosphorylates and inhibits enriched TAp73 in human osteosarcoma cells[J]. Cancer medicine, 2016, 5(1): 74-87,Hu Z B, Liao X H, Xu Z Y, et al.

·  Phosphorylated TDP-43 becomes resistant to cleavage by calpain: A regulatory role for phosphorylation in TDP-43 pathology of ALS/FTLD[J]. Neuroscience research, 2016, 107: 63-69,Yamashita T, Teramoto S, Kwak S.

·  The Pch2 AAA+ ATPase promotes phosphorylation of the Hop1 meiotic checkpoint adaptor in response to synaptonemal complex defects[J]. Nucleic acids research, 2016: gkw506,Herruzo E, Ontoso D, González-Arranz S, et al.

·  An optimized guanidination method for large‐scale proteomic studies[J]. Proteomics, 2016,Ye J, Zhang Y, Huang L, et al.

·  Expression and purification of the kinase domain of PINK1 in Pichia pastoris[J]. Protein Expression and Purification, 2016,Wu D, Qu L, Fu Y, et al.

·  BRI2 and BRI3 are functionally distinct phosphoproteins[J]. Cellular signalling, 2016, 28(1): 130-144,Martins F, Rebelo S, Santos M, et al.

·  Identification of glycoproteins associated with HIV latently infected cells using quantitative glycoproteomics[J]. Proteomics, 2016,Yang W, Jackson B, Zhang H.

·  Regulation of Beclin 1 Protein Phosphorylation and Autophagy by Protein Phosphatase 2A (PP2A) and Death-associated Protein Kinase 3 (DAPK3)[J]. Journal of Biological Chemistry, 2016, 291(20): 10858-10866,Fujiwara N, Usui T, Ohama T, et al.

·  Regulatory Implications of Structural Changes in Tyr201 of the Oxygen Sensor Protein FixL[J]. Biochemistry, 2016, 55(29): 4027-4035,Yamawaki T, Ishikawa H, Mizuno M, et al.

·  Histone demethylase Jmjd3 regulates osteoblast apoptosis through targeting anti-apoptotic protein Bcl-2 and pro-apoptotic protein Bim[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research, 2016, 1863(4): 650-659,Yang D, Okamura H, Teramachi J, et al.

·  Analysis of Molecular Species Profiles of Ceramide-1-phosphate and Sphingomyelin Using MALDI-TOF Mass Spectrometry[J]. Lipids, 2016, 51(2): 263-270,Yamashita R, Tabata Y, Iga E, et al.

·  Highly sensitive myosin phosphorylation analysis in the renal afferent arteriole[J]. Journal of Smooth Muscle Research, 2016, 52(0): 45-55,Takeya K.

·  Functional dissection of the CroRS two-component system required for resistance to cell wall stressors in Enterococcus faecalis[J]. Journal of bacteriology, 2016, 198(8): 1326-1336,Kellogg S L, Kristich C J.

·  Regulation of mitogen-activated protein kinase by protein kinase C and mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 in vascular smooth muscle[J]. American Journal of Physiology-Cell Physiology, 2016, 310(11): C921-C930,Trappanese D M, Sivilich S, Ets H K, et al.

·  ModProt: a database for integrating laboratory and literature data about protein post-translational modifications[J]. Journal of Electrophoresis, 2016, 60(1): 1-4,Kimura Y, Toda T, Hirano H.

·  The C-ETS2-TFEB Axis Promotes Neuron Survival under Oxidative Stress by Regulating Lysosome Activity[J]. Oxidative medicine and cellular longevity, 2016,Ma S, Fang Z, Luo W, et al.

·  Essential role of the PSI–LHCII supercomplex in photosystem acclimation to light and/or heat conditions by state transitions[J]. Photosynthesis Research, 2016: 1-10,Marutani Y, Yamauchi Y, Higashiyama M, et al.

·  Identification of a redox-modulatory interaction between selenoprotein W and 14-3-3 protein[J]. Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research, 2016, 1863(1): 10-18,Jeon Y H, Ko K Y, Lee J H, et al.

·  Effects of hydrogen sulfide on the heme coordination structure and catalytic activity of the globin-coupled oxygen sensor AfGcHK[J]. BioMetals, 2016, 29(4): 715-729,Fojtikova V, Bartosova M, Man P, et al.

·  Identification and functional analysis of phosphorylation in Newcastle disease virus phosphoprotein[J]. Archives of virology, 2016: 1-14,Qiu X, Zhan Y, Meng C, et al.

·  Increased level of phosphorylated desmin and its degradation products in heart failure[J]. Biochemistry and Biophysics Reports, 2016, 6: 54-62,Bouvet M, Dubois-Deruy E, Alayi T D, et al.

·  Profiling DNA damage-induced phosphorylation in budding yeast reveals diverse signaling networks[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 2016: 201602827,Zhou C, Elia A E H, Naylor M L, et al.

·  Unexpected properties of sRNA promoters allow feedback control via regulation of a two-component system[J]. Nucleic Acids Research, 2016: gkw642,Brosse A, Korobeinikova A, Gottesman S, et al.

·  Evolution of ZnII–Macrocyclic Polyamines to Biological Probes and Supramolecular Assembly[J]. Macrocyclic and Supramolecular Chemistry: How Izatt-Christensen Award Winners Shaped the Field, 2016: 415,Kimura E, Koike T, Aoki S.

·  Phosphopeptide Enrichment Using Various Magnetic Nanocomposites: An Overview[J]. Phospho-Proteomics: Methods and Protocols, 2016: 193-209,Batalha Í L, Roque A C A.

·  In vivo phosphorylation of a peptide tag for protein purification[J]. Biotechnology letters, 2016, 38(5): 767-772,Goux M, Fateh A, Defontaine A, et al.

·  Regulation of cell reversal frequency in Myxococcus xanthus requires the balanced activity of CheY‐like domains in FrzE and FrzZ[J]. Molecular microbiology, 2016,Kaimer C, Zusman D R.

·  Elevation of cortical serotonin transporter activity upon peripheral immune challenge is regulated independently of p38 mitogen‐activated protein kinase activation and transporter phosphorylation[J]. Journal of neurochemistry, 2016, 137(3): 423-435,Schwamborn R, Brown E, Haase J.

·  The Yeast Cyclin-Dependent Kinase Routes Carbon Fluxes to Fuel Cell Cycle Progression[J]. Molecular cell, 2016, 62(4): 532-545,Ewald J C, Kuehne A, Zamboni N, et al.

·  Two Degradation Pathways of the p35 Cdk5 (Cyclin-dependent Kinase) Activation Subunit, Dependent and Independent of Ubiquitination[J]. Journal of Biological Chemistry, 2016, 291(9): 4649-4657,Takasugi T, Minegishi S, Asada A, et al.

·  Increased level of phosphorylated desmin and its degradation products in heart failure[J]. Biochemistry and Biophysics Reports. 2016,Bouvet M, Dubois-Deruy E, Alayi T D, et al.

·  a high‐affinity LCO‐binding protein of Medicago truncatula, interacts with LYK3, a key symbiotic receptor[J]. FEBS letters, 2016, 590(10): 1477-1487,Fliegmann J, Jauneau A, Pichereaux C, et al. LYR3,

·  Nek1 Regulates Rad54 to Orchestrate Homologous Recombination and Replication Fork Stability[J]. Molecular Cell, 2016,Spies J, Waizenegger A, Barton O, et al.

·  PhostagTM-gel retardation and in situ thylakoid kinase assay for determination of chloroplast protein phosphorylation targets[J]. Endocytobiosis and Cell Research, 2016, 27(2): 62-70,Dytyuk Y, Flügge F, Czarnecki O, et al.

·  Luteinizing Hormone Causes Phosphorylation and Activation of the cGMP Phosphodiesterase PDE5 in Rat Ovarian Follicles, Contributing, Together with PDE1 Activity, to the Resumption of Meiosis[J]. Biology of reproduction, 2016: biolreprod. 115.135897,Egbert J R, Uliasz T F, Shuhaibar L C, et al.

·  Newby, AC, & Bond, M.(2016). The Hippo pathway mediates inhibition of vascular smooth muscle cell proliferation by cAMP[J]. Journal of Molecular and Cellular Cardiology, 2016, 90: 1-10,Kimura-Wozniak T, Duggirala A, Smith M C, et al. G.

·  Yeast lacking the amphiphysin family protein Rvs167 is sensitive to disruptions in sphingolipid levels[J]. The FEBS Journal, 2016, 283(15): 2911-2928,Toume M, Tani M.

·  Regulation of CsrB/C sRNA decay by EIIAGlc of the phosphoenolpyruvate: carbohydrate phosphotransferase system[J]. Molecular microbiology, 2016, 99(4): 627-639,Leng Y, Vakulskas C A, Zere T R, et al.

·  The Late S-Phase Transcription Factor Hcm1 Is Regulated through Phosphorylation by the Cell Wall Integrity Checkpoint[J]. Molecular and cellular biology, 2016: MCB. 00952-15,Negishi T, Veis J, Hollenstein D, et al.

·  Validation of chemical compound library screening for transcriptional co‐activator with PDZ‐binding motif inhibitors using GFP‐fused transcriptional co‐activator with PDZ‐binding motif[J]. Cancer science, 2016, 107(6): 791-802,Nagashima S, Maruyama J, Kawano S, et al.

·  ULK1/2 Constitute a Bifurcate Node Controlling Glucose Metabolic Fluxes in Addition to Autophagy[J]. Molecular cell, 2016, 62(3): 359-370,Li T Y, Sun Y, Liang Y, et al.

·  Spatiotemporal dynamics of Oct4 protein localization during preimplantation development in mice[J]. Reproduction, 2016: REP-16-0277,Fukuda A, Mitani A, Miyashita T, et al.

·  The tandemly repeated NTPase (NTPDase) from Neospora caninum is a canonical dense granule protein whose RNA expression, protein secretion and phosphorylation coincides with the tachyzoite egress[J]. Parasites & Vectors, 2016, 9(1): 1,Pastor-Fernández I, Regidor-Cerrillo J, Álvarez-García G, et al.

·  Interaction Analysis of a Two-Component System Using Nanodiscs[J]. PloS one, 2016, 11(2): e0149187,Hörnschemeyer P, Liss V, Heermann R, et al.

·  Constitutive Activation of PINK1 Protein Leads to Proteasome-mediated and Non-apoptotic Cell Death Independently of Mitochondrial Autophagy[J]. Journal of Biological Chemistry, 2016, 291(31): 16162-16174,Akabane S, Matsuzaki K, Yamashita S, et al.

·  p38β Mitogen-Activated Protein Kinase Modulates Its Own Basal Activity by Autophosphorylation of the Activating Residue Thr180 and the Inhibitory Residues Thr241 and Ser261[J]. Molecular and cellular biology, 2016, 36(10): 1540-1554,Beenstock J, Melamed D, Mooshayef N, et al.

·  Lysophosphatidylcholine acyltransferase 1 protects against cytotoxicity induced by polyunsaturated fatty acids[J]. The FASEB Journal, 2016, 30(5): 2027-2039,Akagi S, Kono N, Ariyama H, et al.

·  Characterization of a herpes simplex virus 1 (HSV-1) chimera in which the Us3 protein kinase gene is replaced with the HSV-2 Us3 gene[J]. Journal of virology, 2016, 90(1): 457-473,Shindo K, Kato A, Koyanagi N, et al.

·  Generation of phospho‐ubiquitin variants by orthogonal translation reveals codon skipping[J]. FEBS letters, 2016, 590(10): 1530-1542,George S, Aguirre J D, Spratt D E, et al.

·  Evolution of KaiC-Dependent Timekeepers: A Proto-circadian Timing Mechanism Confers Adaptive Fitness in the Purple Bacterium Rhodopseudomonas palustris[J]. PLoS Genet, 2016, 12(3): e1005922,Ma P, Mori T, Zhao C, et al.

·  Phosphorylation of Bni4 by MAP kinases contributes to septum assembly during yeast cytokinesis[J]. FEMS Yeast Research, 2016, 16(6): fow060,Pérez J, Arcones I, Gómez A, et al.

·  Alteration of Antiviral Signalling by Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) of Mitochondrial Antiviral Signalling Protein (MAVS)[J]. PloS one, 2016, 11(3): e0151173,Xing F, Matsumiya T, Hayakari R, et al.

·  Arm-in-arm response regulator dimers promote intermolecular signal transduction[J]. Journal of bacteriology, 2016, 198(8): 1218-1229,Baker A W, Satyshur K A, Morales N M, et al.

·  The lsh/ddm1 homolog mus-30 is required for genome stability, but not for dna methylation in neurospora crassa[J]. PLoS Genet, 2016, 12(1): e1005790,Basenko E Y, Kamei M, Ji L, et al.

·  Fine tuning chloroplast movements through physical interactions between phototropins[J]. Journal of Experimental Botany, 2016: erw265,Sztatelman O, Łabuz J, Hermanowicz P, et al.

·  Characterization of the Neospora caninum NcROP40 and NcROP2Fam-1 rhoptry proteins during the tachyzoite lytic cycle[J]. Parasitology, 2016, 143(01): 97-113,Pastor-Fernandez I, Regidor-Cerrillo J, Jimenez-Ruiz E, et al.

·  Transcriptional Profile during Deoxycholate-Induced Sporulation in a Clostridium perfringens Isolate Causing Foodborne Illness[J]. Applied and environmental microbiology, 2016, 82(10): 2929-2942,Yasugi M, Okuzaki D, Kuwana R, et al.

·  Timely Closure of the Prospore Membrane Requires SPS1 and SPO77 in Saccharomyces cerevisiae[J]. Genetics, 2016: genetics. 115.183939,Paulissen S M, Slubowski C J, Roesner J M, et al.

·  DDK dependent regulation of TOP2A at centromeres revealed by a chemical genetics approach[J]. Nucleic Acids Research, 2016: gkw626,Wu K Z L, Wang G N, Fitzgerald J, et al.

·  OVATE Family Protein 8 Positively Mediates Brassinosteroid Signaling through Interacting with the GSK3-like Kinase in Rice[J]. PLoS Genet, 2016, 12(6): e1006118,Yang C, Shen W, He Y, et al.

·  Epithelial Sel1L is required for the maintenance of intestinal homeostasis[J]. Molecular biology of the cell, 2016, 27(3): 483-490, Sun S, Lourie R, Cohen S B, et al.

·  Effect of Sodium Dodecyl Sulfate Concentration on Supramolecular Gel Electrophoresis[J]. ChemNanoMat, 2016,Tazawa S, Kobayashi K, Yamanaka M.

·  Intergenic VNTR Polymorphism Upstream of rocA Alters Toxin Production and Enhances Virulence in Streptococcus pyogenes[J]. Infection and immunity, 2016: IAI. 00258-16,Zhu L, Olsen R J, Horstmann N, et al.

·  Ajuba Phosphorylation by CDK1 Promotes Cell Proliferation and Tumorigenesis[J]. Journal of Biological Chemistry, 2016: jbc. M116. 722751,Chen X, Stauffer S, Chen Y, et al.

·  Editorial: International Plant Proteomics Organization (INPPO) World Congress 2014[J]. Frontiers in Plant Science, 2016, 7,Heazlewood J L, Jorrín-Novo J V, Agrawal G K, et al.

·  Phosphoinositide kinase signaling controls ER-PM cross-talk[J]. Molecular biology of the cell, 2016, 27(7): 1170-1180,Omnus D J, Manford A G, Bader J M, et al.

·  A multiple covalent crosslinked soft hydrogel for bioseparation[J]. Chemical Communications, 2016, 52(15): 3247-3250,Liu Z, Fan L, Xiao H, et al.

·  Advances in crop proteomics: PTMs of proteins under abiotic stress[J]. Proteomics, 2016, 16(5): 847-865,Wu X, Gong F, Cao D, et al.

·  Cyclin-Dependent Kinase Co-Ordinates Carbohydrate Metabolism and Cell Cycle in S. cerevisiae[J]. Molecular cell, 2016, 62(4): 546-557,Zhao G, Chen Y, Carey L, et al.

·  Carbon Monoxide Gas Is Not Inert, but Global, in Its Consequences for Bacterial Gene Expression, Iron Acquisition, and Antibiotic Resistance[J]. Antioxidants & redox signaling, 2016,Wareham L K, Begg R, Jesse H E, et al.

·  Two-layer regulation of PAQR3 on ATG14-linked class III PtdIns3K activation upon glucose starvation[J]. Autophagy, 2016: 1-2,Xu D, Wang Z, Chen Y.

·  Regulation of sphingolipid biosynthesis by the morphogenesis checkpoint kinase Swe1[J]. Journal of Biological Chemistry, 2016, 291(5): 2524-2534,Chauhan N, Han G, Somashekarappa N, et al.

·  PAX5 tyrosine phosphorylation by SYK co-operatively functions with its serine phosphorylation to cancel the PAX5-dependent repression of BLIMP1: A mechanism for antigen-triggered plasma cell differentiation[J]. Biochemical and biophysical research communications, 2016, 475(2): 176-181,Inagaki Y, Hayakawa F, Hirano D, et al.

·  A Combined Computational and Genetic Approach Uncovers Network Interactions of the Cyanobacterial Circadian Clock[J]. Journal of Bacteriology, 2016: JB. 00235-16,Boyd J S, Cheng R R, Paddock M L, et al.

·  HuR mediates motility of human bone marrow-derived mesenchymal stem cells triggered by sphingosine 1-phosphate in liver fibrosis[J]. Journal of Molecular Medicine, 2016: 1-14,Chang N, Ge J, Xiu L, et al.

·  Combined replacement effects of human modified β-hexosaminidase B and GM2 activator protein on GM2 gangliosidoses fibroblasts[J]. Biochemistry and Biophysics Reports, 2016,Kitakaze K, Tasaki C, Tajima Y, et al.

·  Roseotoxin B Improves Allergic Contact Dermatitis through a Unique Anti-inflammatory Mechanism Involving Excessive Activation of Autophagy in Activated T-Lymphocytes[J]. Journal of Investigative Dermatology, 2016,Wang X, Hu C, Wu X, et al.

References on Phos-tag™ Chemistry

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry of phosphorylated compounds using a novel phosphate capture moleculeRapid Communications of Mass Spectrometry17, 2075-2081 (2003), H. Takeda, A. Kawasaki, M. Takahashi, A. Yamada, and T. Koike 

Recognition of phosphate monoester dianion by an alkoxide-bridged dinuclear zinc (II) complexDalton Transactions, 1189-1193 (2004), E. Kinoshita, M. Takahashi, H. Takeda, M. Shiro, and T. Koike

Quantitative analysis of lysophosphatidic acid by time-of-flight mass spectrometry using a phosphate capture molecule, Journal of Lipid Research45, 2145-2150 (2004), T. Tanaka, H. Tsutsui, K. Hirano, T. Koike, A. Tokumura, and K. Satouchi

Production of 1,2-Didocosahexaenoyl Phosphatidylcholine by Bonito Muscle Lysophosphatidylcholine/TransacylaseJournal of Biochemistry,136, 477-483 (2004), K. Hirano, H. Matsui, T. Tanaka, F. Matsuura, K. Satouchi, and T. Koike

Novel immobilized zinc(II) affinity chromatography for phosphopeptides and phosphorylated proteins, Journal of Separation Science, 28, 155-162 (2005), E. Kinoshita, A. Yamada, H. Takeda, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike

Detection and Quantification of On-Chip Phosphorylated Peptides by Surface Plasmon Resonance Imaging Techniques Using a Phosphate Capture MoleculeAnalytical Chemistry77, 3979-3985 (2005), K. Inamori, M. Kyo, Y. Nishiya, Y. Inoue, T. Sonoda, E. Kinoshita, T. Koike, and Y. Katayama

Phosphate-binding tag: A new tool to visualize phosphorylated proteins, Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike

Enrichment of phosphorylated proteins from cell lysate using phosphate-affinity chromatography at physiological pHProteomics, 6, 5088-5095 (2006), E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, A. Yamada, M. Endo, and T. Koike

Separation of a phosphorylated histidine protein using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry360, 160-162 (2007), S. Yamada, H. Nakamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro

Label-free kinase profiling using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophresisMolecular & Cellular Proteomics, 6, 356-366 (2007), E. Kinoshita-Kikuta, Y. Aoki, E. Kinoshita, and T. Koike

A SNP genotyping method using phosphate-affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry361, 294-298 (2007), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike (The phosphate group at DNA-terminal is efficiently captured by Zn2+.Phos-tag.)

Identification on Membrane and Characterization of Phosphoproteins Using an Alkoxide-Bridged Dinuclear Metal Complex as a Phosphate-Binding Tag MoleculeJournal of Biomolecular Techniques18, 278-286 (2007), T. Nakanishi, E. Ando, M. Furuta, E. Kinoshita, E. Kikuta-Kinoshita, T. Koike, S. Tsunasawa, and O. Nishimura

A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresisAnalytical Biochemistry378, 102-104 (2008), E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike

Separation of phosphoprotein isotypes having the same number of phosphate groups using phosphate- affinity SDS-PAGEProteomics, 8, 2994-3003 (2008), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, S. Yamada, H. Nakamura, Y. Shiro, Y. Aoki, K. Okita, and T. Koike

FANCI phosphorylation functions as a molecular switch to turn on the Fanconi anemia pathwayNature Structural & Molecular Biology15, 1138-1146 (2008), M. Ishiai, H. Kitao, A. Smogorzewska, J. Tomida, A. Kinomura, E. Uchida, A. Saberi, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, S. Tashiro, S. J. Elledge, and M. Takata

Two-dimensional phosphate affinity gel electrophoresis for the analysis of phosphoprotein isotypes Electrophoresis30, 550-559 (2009), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, M. Matsubara, Y. Aoki, S. Ohie, Y. Mouri, and T. Koike

Formation of lysophosphatidic acid, a wound-healing lipid, during digestion of cabbage leavesBioscience, Biotechnology, and Biochemistry,73, 1293-300 (2009), T. Tanaka, G. Horiuchi, M. Matsuoka, K. Hirano, A. Tokumura, T. Koike, and K. Satouchi

A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the dephosphorylation of phosphopeptidesAnalytical Biochemistry388, 235-241, (2009), K. Takiyama, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Fujioka, Y. Kubo, and T. Koike

Phos-tag beads as an immunoblotting enhancer for selective detection of phosphoproteins in cell lysatesAnalytical Biochemistry389, 83-85, (2009), E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike

Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agaroseProteomics9, 4098- 4101 (2009), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike

Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGENature Protocols4, 1513-1521 (2009), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike

A clean-up technology for the simultaneous determination of lysophosphatidic acid and sphingosine-1-phosphate by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry using a phosphate-capture molecule, Phos-tagRapid Communications in Mass Spectrometry24, 1075-1084 (2010), J. Morishige, M. Urikura, H. Takagi, K. Hirano, T. Koike, T. Tanaka, and K. Satouchi

Genotyping and mapping assay of single-nucleotide polymorphisms in CYP3A5 using DNA-binding zinc(II) complexesClinical Biochemistry43, 302-306 (2010), E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Nakashima, and T. Koike

The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is ragulated phosphorylation with casein kinase 1σ/εBiochemical Journal427, 489-497 (2010), Y. Sugiyama, N. Hatano, N. Sueyoshi, I. Suetake, S. Tajima, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and I. Kameshita


产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
308-93563 Phos-tag™ Agarose
 Phos-tag 琼脂糖
3 mL

KANEKA KanCapA™ 新标准 抗体纯化树脂

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献


新标准 抗体纯化树脂KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

KANEKA KanCapA™


   

KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

  

  本产品为 Protein A 亲和层析树脂。用于从活体样本及细胞培养上清纯化免疫球蛋白及包含 Fc 段的重组抗体。

  本产品由高交联纤维素微珠及新研发的耐碱 Protein A 配体构成,可用于 IgG 的亲和纯化。

◆特点


• 耐碱

• 良好洗脱条件

• 高抗体结合能力

• 可循环使用

• 便于扩增


◆关于改良 Protein A


KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

  


  KanCapA™ 采用的不是天然 Protein A,而是使用变异型C域5聚物的新型 Protein A。

  天然 Protein A的C域结合于 Fc 段,也结合于 Fab 段,其中与VH3亚家族抗体的反应性较高。该类型的解离需要弱酸条件下洗脱。

  为改善该问题,使用分子设计系统重新设计分子,研发了保持耐碱性、改善 Fab 段的非特异性结合及洗脱曲线的 Protein A。



本产品采用的 Protein A

1. C5 聚体蛋白质

KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

良好pH条件下清晰地洗脱抗体 

2. 较高的耐碱性

3. 减少 Fab 段的非特异性结合

◆产品特性


KANEKA KanCapA™ 产品特性

矩阵

高交联纤维

 ※

  1) 平均粒度为累积体积分布的中间粒度

  2) 5%动态结合容量为前端分析测定(停留时间3分钟)

  3) 可在强碱条件下清洗,但请避免长时间的清洗

  4) 请勿冷冻

平均粒度1)

65-85 μm

配体

Protein A,重组(抗强碱)

结合

化学结合(还原胺化)

动态结合容量2)

≧35 mg 人多克隆 IgG/mL载体

化学稳定性3)

使用亲和层析通用可溶性溶媒时较稳定

pH 范围3)

pH 2-13

静止清洗条件3)

0.1-0.5 mol/L氢氧化钠

6-8 mol/L尿素、6 mol/L盐酸胍

流量

最大 500cm/h(层高:20-25 cm)

停留时间

≧3分钟(建议:4-6分钟)

保存条件4)

20%乙醇浑浊液,1~10℃

◆应用


1、Fab段 纯化应用

  • 利用 KANEKA KanCapA™ 的特点,可从经木瓜蛋白酶处理后的 IgG 溶液分馏 Fc 段及 Fab 段。

KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂




2、IgG 洗脱曲线(pH3.5 & pH3.0)


  • 洗脱范围已优化,可清晰地分馏提纯。


KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

3、通过强碱清洗进行树脂循环


  • 进行 300 次循环处理后(0.1M 氢氧化钠溶液 15 分钟),IgG 的结合容量的减少率仍低于20%,表明其循环性能较高。


KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

使用 0.1 M 氢氧化钠溶液进行循环处理后的 IgG 结合活性曲线数据

  循环处理后(0.1 M 氢氧化钠溶液 15 分钟)的IgG回收率及 Protein 

  A 配体的渗滤量的曲线数据 

4、动态结合容量 曲线数据


  • 在4-6分钟停留时间过程中,DBC 较高。

  ※ 动态结合容量表示纯化样本在流动的状态下,回收程度的数值。动态结合容量较高的载体的流速较快,可回收大量目标分子,因此可以认为在短时间内有效纯化目标分子的优质载体。


KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

       KANEKA KanCapA™的Dynamic Binding Capacity (DBC; 动态结合容量) 曲线数据

5、不同大小的树脂填充装柱的压力/流速绘图数据



KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

                    填充依赖压力的计算方法是从整体压力减去系统压力。

6、KANEKA KanCapA™ 于各种大小的柱的填充效果


  • KANEKA KanCapA™ 适用于各种大小的柱。

充填方法

L. D.(cm)

高度(mm)

培养皿/m

非对称性

流动填充

4.4

200

5710

1.14

轴向力填充

7

199

6063

1.06

流动填充

10

201

5276

1.18

流动填充

30

200

5208

1.17

轴向力填充

45

233

4712

1.09


以下是脉冲注入数据:

  可溶性溶媒:1(v/v)% 丙酮

  注入量:1% 柱容量

  流速:60 cm/h

相关资料:


KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

抗体纯化树脂说明书

KANEKA KanCapA™                              新标准 抗体纯化树脂

抗体纯化树脂.pdf

参考文献

使用Kaneka KanCapA纯化单克隆抗体

使用该Kaneka KanCapATM从CHO细胞培养上清中纯化单克隆抗体

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
114-01071 KANEKA KanCapA™ 2mL (net 1mL) for Genetic Research
110-01073 KANEKA KanCapA™ 10mL (net 5mL) for Genetic Research
118-01074 KANEKA KanCapA™ 50mL (net 25mL) for Genetic Research

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2 提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

  • 产品特性
  • 相关资料
  • Q&A
  • 参考文献

提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2


本试剂盒是提取/纯化外泌体的试剂盒,比起第一代产品(293-77601 MagCapture™ 外泌体提取试剂盒PS),提高了外泌体的回收率和纯度,并缩短了实验操作的时间。使用本试剂盒纯化的外泌体可以直接用于细胞摄取实验。

 


◆特点


● 提高了外泌体的回收率和纯度

● 缩短亲和反应的时间(3 h→1 h)

● 降低纯化外泌体的细胞毒性

 


◆数据


■  比较外泌体的回收率

纳米级粒子数检测

ELISA EV表面标记物的比较 

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

Western blotting EV标记的比较

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

在间充质干细胞(MSC)的培养上清中,使用第一代产品(图中简写为Ver.1)和本试剂盒(图中简写为Ver.2)提取和纯化含外泌体的细胞外囊泡(图中简写为EV)。然后,对所得样品进行纳米级粒子数检测以及使用PS MagCapture™ 外泌体 ELISA Kit(链霉亲和素HRP)(产品编号:298-80601)和WB比较EV标记物。

Ver.2与Ver.1相比,回收率有所提高。

■ 比较纯化外泌体的细胞毒性

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

使用Ver.1和Ver.2提取和纯化COLO201细胞培养上清中含外泌体的细胞外囊泡。然后仅将elution buffer或纯化外泌体加入到人正常成纤维细胞中,观察经过48 h后的细胞形态变化。

在Ver.1中,加入外泌体和elution buffer后48 h出现了细胞死亡,而Ver.2中未观察到明显的细胞毒性。证明Ver.2中elution buffer的细胞毒性已经降低了。

■ 比较不同亲和反应时间里外泌体纯化的回收率

MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2                              提高回收率和纯化纯度的外泌体提取/纯化试剂盒

在COLO201细胞培养上清中,为Ver.2设定4个亲和反应时间条件,提取和纯化含外泌体的细胞外囊泡(EV)。然后,获得的样品使用PS MagCapture™ 外泌体 ELISA 试剂盒(链霉亲和素HRP)(产品编号:298-80601)比较EV表面标记物。

在Ver.2中,确认了1 h的亲和反应可以充分提取到培养上清中的细胞外囊泡。


※ 本页面产品仅供研究用,研究以外不可使用。

产品编号 产品名称 产品规格 产品等级
294-84101 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
2次用 基因研究用
290-84103 MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS Ver.2
MagCapture™ 外泌体提取试剂盒 PS Ver.2
10次用 基因研究用

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 NucleoFast 96 PCR Plates

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板

NucleoFast 96 PCR Plates

详细描述:

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
743100.50 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 50*96 plates 咨询客服
743100.10 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 10*96 plates 咨询客服
743100.01 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 1*96 plates 咨询客服

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 NucleoFast 96 PCR Plates

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板

NucleoFast 96 PCR Plates

详细描述:

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
743100.50 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 50*96 plates 咨询客服
743100.10 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 10*96 plates 咨询客服
743100.01 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 1*96 plates 咨询客服

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 NucleoFast 96 PCR Plates

NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板

NucleoFast 96 PCR Plates

详细描述:

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
743100.50 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 50*96 plates 咨询客服
743100.10 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 10*96 plates 咨询客服
743100.01 NucleoFast 96 PCR 核酸纯化板 1*96 plates 咨询客服

慢病毒纯化酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

慢病毒纯化
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 631246 Collection Rack L Each ¥1,469 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631233 Lenti-X Maxi Purification Kit 2 Preps ¥3,287 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631234 Lenti-X Maxi Purification Kit 5 Preps ¥5,474 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
Clontech 631245 Lenti-X Maxi Purification Kit (with Rack) Each ¥6,864 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
收藏产品 加入购物车

无标题文档

 
 
慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化 慢病毒纯化
 
 
慢病毒纯化
Lenti-X Maxi Purification Kit可从原始的培养上清液中纯化出高纯度和高产量的病毒。其基于重力流柱的实验操作,快速、简单、有效并且优于基于过滤器的纯化系统,后者会损坏易于损伤的慢病毒颗粒,从而降低产量。重力流柱会轻柔固定培养上清液中的病毒颗粒,未被结合的物质则会在洗涤步骤穿透柱子流出。
 
为什么要纯化慢病毒?
慢病毒纯化能去除可能对转导实验产生不利影响的细胞污染物。原始的培养上清液中包含残留的质粒DNA,不明感染和转导抑制剂,细胞和血清蛋白质,以及具有高度免疫原性的病毒蛋白质、核酸和病毒片段。在使用慢病毒作用于敏感靶细胞或体内应用之前,有必要通过纯化慢病毒来去除这些污染物。
 
简便的操作流程。
我们的慢病毒纯化柱是即用型预装柱,只需将10X结合缓冲液加入到上清液样品(9-45 ml)中,然后再将混合物添加至纯化柱即可。样品和缓冲液借助重力穿过树脂,就像是基于纯化柱的质粒制备。在两次洗涤纯化柱的过程中,杂质被去除掉了,纯化后的慢病毒回收在3 ml洗脱缓冲液中。
 
防止假转导。
使用纯化后的慢病毒储液还可以防止假转导,因为在感染的过程中,原始病毒上清液中高水平重组蛋白质会被转移至靶细胞中。而靶细胞假转导会掩盖慢病毒转导所预期的de novo表达。
 
更高的产量和纯度。
温和的纯化程序是维持病毒感染性和产生60-80%优良慢病毒产量的关键所在。基于阴离子交换的膜系统回收率要低得多,通常低于20%。而与基于过滤器的系统相比,Lenti-X纯化柱获得的病毒纯度更高。事实上,纯化后的Lenti-X样品中可检测到的蛋白质含量很低,而基于过滤器纯化的病毒液则含有与病毒共同纯化出来的高水平外源蛋白质。
 
■ Overview
· 与其他纯化技术相比,获得的纯度和产量更高
· 浓缩病毒至多10倍
· 简便而温和的重力流操作流程
· 专用收集架可与试剂盒 (Code No. 631245)一同购买,也可单独购买 (Code No. 631246)
· 实现更高效、更一致的慢病毒转导,收获更健康的靶细胞
· 有效去除转导抑制剂和细胞毒性污染物
 
■ 实验例
慢病毒纯化
图1. 收集架L。组装后,这个收集架可安全牢固地容纳三根色谱柱(例如慢病毒纯化柱)和三根收集管(50 ml锥形管)。
 
慢病毒纯化
图2. 使用Clontech慢病毒纯化试剂盒可获得高产量和高纯度。使用我们的高滴度慢病毒包装系统制备并纯化慢病毒。Panel A. 为了确定病毒产量,通过qRT-PCR(RNA拷贝数)或流式细胞仪/荧光(IFU)测定纯化前和纯化后的慢病毒滴度,展示数据为七组实验的平均值。Panel B. 使用Lenti-X或基于过滤器的纯化系统(Vendor M和Vendor S)制备等量的纯化后慢病毒(1×105 IFU)进行SDS-PAGE和银染。与其它两种基于过滤器系统所制备的样品相比,在相同IFU的情况下Lenti-X样品含有明显更少的污染蛋白质。
 
 
 
产品详情请点击:慢病毒纯化
 
 

页面更新:2020-02-25 11:41:30

Collagenase, Purified 胶原酶,纯化 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:9001-12-1
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

031-24073

25000 units 咨询


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 请联系客服

Collagenase, Purified 胶原酶,纯化 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:9001-12-1
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

035-24071

5000 units

Collagenase, Purified                                                      胶原酶,纯化            品牌:Wako


* 干冰运输、大包装及大批量的产品需酌情添加运输费用


* 零售价、促销产品折扣、运输费用、库存情况、产品及包装规格可能因各种原因有所变动,恕不另行通知,确切详情请联系上海金畔生物科技有限公司。

产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 请联系客服