神经细胞用培养基

神经细胞用培养基

　　本产品含有大鼠神经细胞胶质的细胞培养上清，是大鼠/小鼠的原代神经细胞无血清培养基，适用于培养中枢神经细胞，该产品经 Sumitomo Bakelite 公司技术指导，是神经细胞用培养液（货号：MB-X9501）的延续品。

 

◆特点

 

●　神经树突伸展迅速

●　可低密度培养

◆维持细胞生存活性对比

●　神经树突确认（MAP2 免疫染色）

本产品

其他培养基+其他补充剂+ 5% FBS

实验条件：

细胞数：6.6×10⁵ cell/mL（小鼠妊娠第 18 天从小鼠胎儿小脑分散）

培养标准：500 μL/well（玻璃底皿）

培养条件：第 3 天、第 7 天时培养基进行半量换液，从第 3 天开始添加 Ara-C 2μM

实验数据提供：

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

岡野 James 洋尚先生、小川优树先生

●　MTT 试剂

  实验条件：

  细胞数：2.5×10⁵ cell/mL（妊娠第 17 天从大鼠胎儿的大脑半球分散）

  培养标准：

  200 μL/well（48 well/板）

  培养条件：
  Ara-C(-)：37℃、CO₂：5%，培养 5 天。

  Ara-C(+)：37℃、CO₂：5%，培养 3 天之后添加 200 μM Ara-C 10 μL/well，再培养

                                        2 天（合计培养 5 天）

◆产品信息

产品编号	品 名	规 格	容 量
148-09671	Neuron Culture Medium  神经细胞用培养基	用于细胞培养	100 mL

◆有关产品

神经细胞用分散液

产品编号	品名	规格	容量
291-78001	Neuron Dissociation Solutions	用于细胞培养	4次份/箱
297-78101	Neuron Dissociation Solutions S		10次份/箱

※=保存温度-80℃

添加剂

产品编号	品名	规格	容量
030-11951	Cytosine-1-β-D(+)-arabinofuranoside   (别名：Ara-C)	用于生化学	100 mg
034-11954			500 mg
036-11953			1 g

※=保存温度2~10℃

神经细胞用分散液

可简单回收神经细胞

　　本产品可以从大鼠/小鼠的中枢神经组织中分散、回收神经细胞。本产品由3种溶液（酶溶液、分散液、去除液）组成，无需调制，在保持细胞高生存率状态下可简单地对神经细胞进行回收。

　　使用本产品分散神经球后，贴壁培养时死细胞少，可以在易于观察的状态下培养神经细胞。

 

◆特点

●　可简单、稳定地从中枢神经细胞或神经球中回收神经细胞；

●　即用型

 

◆数据

●　冻存的神经细胞分散时的活细胞存活率

 

细胞名称
海马体，小鼠（胎生16日）来源	总细胞数（cells/vial）	4.32×105
	活细胞数（cells/vial）	3.38×105
	活细胞率（%）	89
大脑皮质，小鼠（胎生15日）来源	总细胞数（cells/vial）	6.64×106
	活细胞数（cells/vial）	6.09×106
	活细胞率（%）	92
海马体，大鼠（胎生19日）来源	总细胞数（cells/vial）	1.37×106
	活细胞数（cells/vial）	1.24×106
	活细胞率（%）	90
大脑皮质，大鼠（胎生17日）来源	总细胞数（cells/vial）	1.32×107
	活细胞数（cells/vial）	1.17×107
	活细胞率（%）	89
纹状体，大鼠（胎生17日）来源	总细胞数（cells/vial）	2.73×106
	活细胞数（cells/vial）	2.58×106
	活细胞率（%）	95

把各脑组织解冻，使用本品对细胞进行分散、回收，确认细胞活率。

可以确认使用本产品从冻存脑组织中回收细胞的活率可达约90%

 

◆神经球的分散

　　正常人 iPS 细胞形成的神经球，贴壁培养，诱导分化为神经细胞。

　　使用本产品后进行神经球的贴壁培养，比较发现死细胞更少，可以在容易观察神经细胞的状态情况下进行培养。

　　（数据提供：东京慈惠会医科大学 再生医学研究部 冈野 JAMES 洋尚先生、田原 麻由，东京慈惠会医科大学小儿科学讲座 日暮 宪道先生）

 

◆试剂盒内容

	神经细胞用分散液	神经细胞用分散液 S
酶溶液	5.0 mL × 4 支	2.5 mL × 10 支
分散液	5.0 mL × 4 支	2.5 mL × 10 支
去除液	5.0 mL × 4 支	2.5 mL × 10 支

 

◆产品列表

产品编号	产品名称	产品规格	包装
291-78001	Neuron Dissociation Solutions 神经细胞用分散液	细胞培养用	4 Set
297-78101	Neuron Dissociation Solutions S 神经细胞用分散液S	细胞培养用	10 Set

 

◆相关产品

 

神经细胞用培养基

产品编号	产品名称	产品规格	包装
148-09671	Neuron Culture Medium 神经细胞用培养基	细胞培养用	100 mL

 

神经细胞用培养基

本产品是适用于大鼠、小鼠原代神经细胞的无血清培养基，十分适用于中枢神经细胞的培养。本产品含有大鼠胶质细胞培养上清液。

 

◆特点

●　可使得神经细胞短时间内成熟

●　培养时间缩减约1/2

●　本品：14天

●　普通的培养基：约１个月

●　可进行低密度培养

●　1/5~1/10的细胞数

●　本品：0.1×10⁶ cells/mL

●　普通的培养基：0.5～1.0×10⁶ cells/mL

●　即开即用

●　只需培养基就可培养。无需添加补充剂。

◆神经树突确认（MAP2免疫染色）

本产品

其他公司培养基+其他公司补充剂

实验条件

细胞数：0.1×10⁶ cells/mL （在怀孕18.5天小鼠的胎儿海马中分散）

培养规模：500 μL/well（聚赖氨酸包被玻底板）

培养条件：在培养第３天和培养第７天更换一半的培养基（不添加 Ara-C）

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野James洋尚老师、小川优树先生

使用本产品培养的神经细胞和其他公司产品培养的细胞进行比较，可以确认本产品树突的伸展速度较为优异。

◆树突伸展，活细胞数确认（MAP2，Hoechst 免疫染色）

培养第14天

 

实验条件

细胞数：0.1×10⁶ cells/mL （从怀孕18.5天小鼠的胎儿海马中获得并分散）

培养规模：500 μL/well（聚赖氨酸包被玻底板）

培养条件：在培养第３天和培养第７天更换一半的培养基（不添加 Ara-C）

 

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、小川优树先生

使用本产品培养的神经细胞和其他公司产品培养的细胞进行比较，可以确认本产品树突的伸展较为优异以及活细胞数较多。

◆神经细胞成熟度评价：树突棘确认

培养第14天

实验条件

细胞数：0.1×10⁶ cells/mL （在怀孕18.5天小鼠的胎儿海马中分散）

培养规模：500 μL/well（聚赖氨酸包被玻底板）

培养条件：在培养第３天和培养第７天更换一半的培养基（不添加 Ara-C）

 

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、小川优树先生

使用本产品培养的神经细胞在第14天可以观察到成熟特征——树突棘。

◆神经细胞成熟度确认：树突，轴突确认

培养第14天

MAP2：树突的标记

AnkyrinG：神经轴突根部的标记

实验条件

细胞数：0.1×10⁶ cells/mL （在怀孕18.5天小鼠的胎儿海马中分散）

培养规模：500 μL/well（聚赖氨酸包被玻底板）

培养条件：在培养第３天和培养第７天更换一半的培养基（不添加 Ara-C）

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、小川优树先生

使用本产品培养的神经细胞，复数的树突和一根轴突从细胞体延伸，可以确认神经细胞正常成熟。

◆小鼠浦肯野细胞培养（Calbindin 免疫染色）

培养第14天

实验条件

细胞数：0.1×10⁶ cells/mL （从怀孕18天小鼠的胎儿海马中获得并分散）

培养规模：500 μL/well（聚赖氨酸包被玻底板）

培养条件：添加 Triiodothyronine 使最终浓度为1 nM

 

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、小川优树先生

向本产品添加 Triiodothyronine 使最终浓度为 1 nM，培养的浦肯野细胞是 Calbindin 阳性，另外，还发现了树突的延伸。

◆人iPS来源神经细胞成熟度确认

MAP2，NeuN，Hoechst免疫染色

多巴胺神经分化诱导法分散培养第14天（分化诱导后42天）

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、坊野惠子小姐

用本产品培养的iPS来源神经细胞通过NeuN染色可以确认成熟的神经细胞。

 

MAP2,TH免疫染色

多巴胺神经分化诱导法分散培养第14天（分化诱导后42天）

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、坊野惠子小姐

通过多巴胺神经分化诱导法获得的TH阳性细胞，在维持培养中神经细胞的生存率也有所提高。

 

 

◆人iPS来源神经细胞生理性功能验证（Ca²⁺ 成像）

多巴胺神经分化诱导法分散培养第14天（分化诱导后42天）

自发动作电位

人iPS细胞来源神经细胞

添加离子霉素

人iPS细胞来源神经细胞

数据提供

东京慈惠会医科大学 再生医学研究部

冈野 James洋尚老师、坊野惠子小姐

使用本产品培养的iPS细胞来源神经细胞中，在Ca²⁺ 成像中可观察到细胞发生了有自主活动。

◆产品列表

产品编号	产品名称	规格	包装
148-09671	Neuron Culture Medium 神经细胞用培养基	细胞培养用	100 mL

◆相关产品

神经细胞用分散液

产品编号	产品名称	规格	包装
291-78001	Neuron Dissociation Solutions 神经细胞用分散液	细胞培养用	4 set
297-78101	Neuron Dissociation Solutions S 神经细胞用分散液S	细胞培养用	10 set

冻存液

产品编号	产品名称	规格	包装
029-19161	Brain Tissue Freezing Medium 脑组织冻存液	细胞培养用	1 mL×10

已知组成培养基/补充剂

产品编号	产品名称	规格	包装
148-09615	NS Basal Medium NS基础培养基	细胞培养用	500 mL
146-09351	NS Supplement(×50)	细胞培养用	10 mL
149-09721	NS Supplement without Insulin(×50) NS 添加剂（不含胰岛素）（×50）	细胞培养用	10 mL
145-09723			50 mL
142-09691	NS Supplement without Vitamin A(×50) NS 添加剂（不含维生素A）（×50）	细胞培养用	10 mL
141-09041	N2 Supplement with Transferrin(Apo)(×100) N2神经细胞生长添加剂含转铁蛋白（Apo）（×100）	细胞培养用	5 mL
141-08941	N2 Supplement with Transferrin(Holo)(×100) N2神经细胞生长添加剂含转铁蛋白（Holo）（×100）	细胞培养用	5 mL
073-05391	200 mmol/L L-Glutamine Solution (×100) 200 mmol/L 谷氨酸溶液（×100）	细胞培养用	100 mL

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神经细胞用分散液

产品编号	品名	规格	容量
291-78001	Neuron Dissociation Solutions	用于细胞培养	4次份/箱
297-78101	Neuron Dissociation Solutions S		10次份/箱

※=保存温度-80℃

添加剂

产品编号	品名	规格	容量
030-11951	Cytosine-1-β-D(+)-arabinofuranoside   (别名：Ara-C)	用于生化学	100mg
034-11954			500mg
036-11953			1g

※=保存温度2~10℃

神经细胞用培养基.pdf

人iPS细胞来源的多巴胺神经细胞，人神经细胞疾病模型

ReproNeuro DA

◆原理

人iPS细胞来源的神经细胞，用于基础神经病学研究和药物研发。

　　该试剂盒提供神经前体细胞。利用试剂盒提供的成熟培养基培养２周即可得到多巴胺神经细胞。这些多巴胺神经细胞可有效用于中枢神经系统（CNS）神经学和精神疾病（比如帕金森症）的研究。

　 *　这些细胞需要-80℃保存，并在３个月内尽快使用以保证高细胞活性。将该细胞放入液氮中可能降低细胞活性。

◆特点•优势

●  通过DNA重组制作的疾病模型

●  来源可靠的人功能性神经细胞

●  可分化为多巴胺神经细胞

◆案例•应用

铺板两周后观察可知，神经前体细胞分化成多巴 胺神经细胞。 蓝色：DAPI（细胞核） 绿色：β Ⅲ 微管（神经细胞标记物） 红色：酪氨酸羟化酶（多巴胺神经细胞标记物）

                                        多巴胺释放                                              模拟多巴胺吸收   

由左图可知，高 KCl 刺激的神经细胞会释放多巴胺。通过右图可观察到多巴胺的模拟吸收现象。利用 ReproNeuro DA，您可以随时获得功能神经细胞，而不再需要利用细胞系或解剖动物来获得非人类的神经细胞。