EpiSight^TM Bisulfite Conversion Kit Ver.2

DNA 重亚硫酸盐转化试剂盒

 

　　Enhanced Bisulfite Reaction 抑制因亚硫酸氢钠反应的 DNA 分解，扩增长链长度。

　　通过添加专利产品 Bisulfite 溶液和反应促进剂（Enhancer），能抑制模板 DNA 的分解，能让胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率大幅度上升。使用离心柱能使 DNA 纯化操作更加简便。

　　结合专用的 Taq DNA Polymerase，即使是亚硫酸氢钠反应后，PCR 扩增比较困难的碱基序列也能稳定且高效地扩增。

 

◆特点

●　离心柱操作简单

●　专利的 Enhancer 抑制 DNA 分解

●　有效扩增富含 CpG 的序列

●　热启动聚合酶防止非特异性扩增

有以下需求的可以考虑使用本产品

●　扩增长链进行高效分析

●　非甲基化胞嘧啶不转换为尿嘧啶的情况

●　甲基化胞嘧啶转换为尿嘧啶的情况

●　想提高 PCR 扩增效率

 

◆试剂盒内容（kit 内容）

EpiSight^TM Bisulfite Conversion Kit Ver.2（20次）

 

Bisulfite solution	11.8 mL×1
Enhancer	100 µL×1
吸附缓冲液	10 mL×1
洗涤液	4.8 mL×1
Desulfonation buffer（脱磺缓冲液）	1 mL×1
洗脱缓冲液	500 µL×1
离心柱	20个

 

 

EpiSightTMBisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution Ver.2（20次）

 

BisulTaqTM DNA Polymerase,recombinant,Solution   Ver.2	10 µL×1
10×反应缓冲液	100 µL×1
dNTPs溶液（各 2 mmol/L）	100 µL×1

 

◆使用例1

　　以小鼠 ES 细胞（胚胎干细胞）和 M1细胞（白血病衍生细胞）的基因组 DNA 为模板，经过亚硫酸盐处理后，PCR 扩增干细胞未分化标记FGF4启动子区。PCR 扩增的链长是 521bp，CpG 二核苷酸数为 61 位，对于亚硫酸氢钠 PCR 扩增链较长，因为 GC 含量高，被认为是对三维结构影响较大的区域。

　　ES 细胞有干细胞未分化标记 FGF4 的 mRNA 表达，启动子区为非甲基化状态；M1 细胞没有用于体细胞分化的 Fgf4 的 mRNA 表达，被认为启动子区处于甲基化状态。

●　样本：小鼠 ES 细胞和小鼠 M1 细胞的基因组 DNA、

●　PCR 扩增链长：521bp（小鼠 Fgf4 启动子区）

●　CpG：61 位

●　PCR 扩增区域 GenBank Accession No.

●　AC_149593 : 230224–230744

 

结果

ES 细胞和 M1细胞的 PCR 扩增产物在克隆后，得到分析 11 个样本的碱基序列。小鼠 ES 细胞的 Fgf4 启动子区为非甲基化状态。小鼠 M1细胞的 Fgf4 启动子区为甲基化状态。

 

 

◆使用例2

　　以 Lambda DNA 为模板，通过使用该试剂盒和 DNA 聚合酶在 Bisulfite 反应后，扩增 910bp 目的区域，分析碱基序列。Lambda DNA 中所有的胞嘧啶都是非甲基化，Bisulfite 反应后全部被转化为尿嘧啶，预测 PCR 扩增产物中不存在胞嘧啶。

●　样本：Lambda DNA

●　非甲基化胞嘧啶：150个

●　PCR 扩增链长：910pb

●　PCR 扩增区域 GenBank Accession No NC_001416 : 26062–269

 

结果

下图所示，不存在胞嘧啶，150 处的胞嘧啶全部转化为胸腺嘧啶。

以往的 Bisulfite 法中，DNA 分解严重，条件设置困难，本产品能简单地成功实现 900 bp 以上的 PCR 产物扩增。