Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒

	货号	36503	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	9024
	Ex (nm)	575	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于葡萄糖检测的试剂盒，葡萄糖转运系统负责将葡萄糖转运穿过细胞膜。测量组织和细胞中2-葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖（2-DG）的摄取被广泛接受作为估计葡萄糖摄取量和研究葡萄糖代谢的调节和胰岛素抗性机制的可靠方法。 2-DG摄取通常通过使用用氚或C14标记的非代谢的2-DG来确定。然而，常规使用放射性标记的探针是昂贵的并且需要繁琐的特殊处理程序。 AAT Bioquest的Screen Quest™比色葡萄糖摄取分析试剂盒可在组织或培养细胞中提供灵敏的非放射性分析。在该测定中，2-DG被葡萄糖转运蛋白吸收，并代谢成2-DG-6-磷酸（2-DG6P）。不可代谢的2-DG6P在细胞中积累，并且与细胞的葡萄糖摄取成比例。累积的2-DG6P被酶促氧化并产生NADPH，其通过显色NADPH特异性检测。通过读取波长570nm至610nm的OD比，可以通过吸收酶标仪读取信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

平板细胞并根据需要处理细胞
加入10μL/孔2-DG并在37℃下孵育20-40分钟
洗涤细胞并裂解细胞
加入50μl/孔的2-DG Uptake Assay工作溶液
在室温下孵育30至120分钟
监测OD比率增加至570/610 nm

溶液制备

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
KRPH缓冲液原液（1X）：
将20mL KRPH缓冲液（5X）（组分H）加入到80mL去离子水中并充分混合。 注意：对于大约一个96孔板，50 mL体积的1×KRPH缓冲液就足够了。 按比例准备所需的音量。 将未使用的1×KRPH存放在4ºC或-20ºC。

2.工作溶液配制

2.1 NADP工作溶液：
将100μLH2O加入到NADP（组分G）的小瓶中并充分混合。

2.2酶探针工作溶液：
将5mL测定缓冲液（组分F）加入酶探针瓶（组分E）中并充分混合。

2.3 2-DG摄取分析工作溶液：
将100μL的NADP工作溶液加入酶探针工作溶液中并充分混合。 注意：这些数量适用于一个96孔板。

有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

重要提示：该方案可用作培养3T3-L1脂肪细胞用于2-DG摄取的指导。

1.在生长培养基中以50,000-80,000细胞/孔/100μL/ 96孔或12,500-20,000细胞/孔/25μL/ 384-孔黑壁/透明底细胞培养Poly-D赖氨酸平板培养4-6小时。

2.从培养箱中取出细胞板，从孔中吸出培养基，用100μl/孔（96孔板）或25μl/孔（384孔板）无血清培养基除去细胞。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育6小时至过夜。

3.从培养箱中取出细胞板，从孔中吸出培养基，用100μL/孔1×KRPH缓冲液轻轻洗涤细胞两次。

4.加入90μL/孔葡萄糖摄取缓冲液（组分B）并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育细胞1小时。

5.用或不用胰岛素或试验化合物刺激20分钟。加入10μL/孔的10×胰岛素溶液至终浓度为1μM或10×化合物测试溶液。并且还向未处理的孔中加入10μL胰岛素载体缓冲液或复合载体缓冲液作为对照，并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育20分钟。

6.对于葡萄糖摄取抑制研究，加入10×Phloretin至终浓度为200 uM或测试抑制剂，并在37ºC，5％CO₂下孵育2-5分钟。注意：建议将10mL抑制剂载体缓冲液加入胰岛素处理和未处理的孔中作为对照。 Phloretin处理的细胞可用作阳性对照。

7.向每个孔中加入10μL/孔2-DG溶液（组分A），并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育20-40分钟。对于阴性对照，留下一些未经胰岛素，抑制剂和2-DG处理的孔。

8.处理后，取出每孔中的溶液，用KRPH缓冲液轻轻洗涤细胞3次，100μL/孔，从溶液中除去额外的2-DG。从孔中移除KRPH缓冲液。

9.向每个孔中加入25μL/孔酸性裂解缓冲液（组分C），并在37℃下孵育20分钟以裂解细胞。并且可以同时制备2DG摄取测定混合物。

10向每个孔中加入25μL/孔中和缓冲液（组分D），充分混合，在室温下放置5-10分钟以中和细胞裂解物。

11.向2DG6P标准品或细胞裂解液的每个孔中加入50μL2DGUptake Assay工作溶液。

12.在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

13.使用吸光度板读数器监测570 / 610nm处的吸光度比增加。

数据分析

参考文献

Corticotropin releasing hormone can selectively stimulate glucose uptake in corticotropinoma via glucose transporter 1
Authors: Jie Lu, Blake K Montgomery, Grégoire P Chatain, Alejandro Bugarini, Qi Zhang, Xiang Wang, Nancy A Edwards, Abhik Ray-Chaudhury, Marsha J Merrill, Russell R Lonser
Journal: Molecular and Cellular Endocrinology (2017)

A Non-Radioactive Enzymatic Photometric Assay for Glucose Uptake in Insulin-Responsive 3T3-L1 Adipocytes
Authors: Qin Zhao, Jinfang Liao, Zhenjun Diwu
Journal: Biophysical Journal (2014): 369a

相关产品

Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒

	货号	36504	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	500 Tests	价格	38292
	Ex (nm)	575	Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于葡萄糖检测的试剂盒，葡萄糖转运系统负责将葡萄糖转运穿过细胞膜。测量组织和细胞中2-葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖（2-DG）的摄取被广泛接受作为估计葡萄糖摄取量和研究葡萄糖代谢的调节和胰岛素抗性机制的可靠方法。 2-DG摄取通常通过使用用氚或C14标记的非代谢的2-DG来确定。然而，常规使用放射性标记的探针是昂贵的并且需要繁琐的特殊处理程序。 AAT Bioquest的Screen Quest™比色葡萄糖摄取分析试剂盒可在组织或培养细胞中提供灵敏的非放射性分析。在该测定中，2-DG被葡萄糖转运蛋白吸收，并代谢成2-DG-6-磷酸（2-DG6P）。不可代谢的2-DG6P在细胞中积累，并且与细胞的葡萄糖摄取成比例。累积的2-DG6P被酶促氧化并产生NADPH，其通过显色NADPH特异性监测。通过读取波长570nm至610nm的OD比，可以通过吸收酶标仪读取信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 比色法葡萄糖摄取检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

平板细胞并根据需要处理细胞
加入10μL/孔2-DG并在37℃下孵育20-40分钟
洗涤细胞并裂解细胞
加入50μl/孔的2-DG Uptake Assay工作溶液
在室温下孵育30至120分钟
监测OD比率增加至570/610 nm

溶液制备

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
KRPH缓冲液原液（1X）：
将20mL KRPH缓冲液（5X）（组分H）加入到80mL去离子水中并充分混合。 注意：对于大约一个96孔板，50 mL体积的1×KRPH缓冲液就足够了。 按比例准备所需的音量。 将未使用的1×KRPH存放在4ºC或-20ºC。

2.工作溶液配制

2.1 NADP工作溶液：
将100μLH2O加入到NADP（组分G）的小瓶中并充分混合。

2.2酶探针工作溶液：
将5mL测定缓冲液（组分F）加入酶探针瓶（组分E）中并充分混合。

2.3 2-DG摄取分析工作溶液：
将100μL的NADP工作溶液加入酶探针工作溶液中并充分混合。 注意：这些数量适用于一个96孔板。

有关细胞样品制备的指南，请点击查看。

操作步骤

重要提示：该方案可用作培养3T3-L1脂肪细胞用于2-DG摄取的指导。

1.在生长培养基中以50,000-80,000细胞/孔/100μL/ 96孔或12,500-20,000细胞/孔/25μL/ 384-孔黑壁/透明底细胞培养Poly-D赖氨酸平板培养4-6小时。

2.从培养箱中取出细胞板，从孔中吸出培养基，用100μl/孔（96孔板）或25μl/孔（384孔板）无血清培养基除去细胞。将细胞在37ºC，5％CO₂培养箱中孵育6小时至过夜。

3.从培养箱中取出细胞板，从孔中吸出培养基，用100μL/孔1×KRPH缓冲液轻轻洗涤细胞两次。

4.加入90μL/孔葡萄糖摄取缓冲液（组分B）并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育细胞1小时。

5.用或不用胰岛素或试验化合物刺激20分钟。加入10μL/孔的10×胰岛素溶液至终浓度为1μM或10×化合物测试溶液。并且还向未处理的孔中加入10μL胰岛素载体缓冲液或复合载体缓冲液作为对照，并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育20分钟。

6.对于葡萄糖摄取抑制研究，加入10×Phloretin至终浓度为200 uM或测试抑制剂，并在37ºC，5％CO₂下孵育2-5分钟。注意：建议将10mL抑制剂载体缓冲液加入胰岛素处理和未处理的孔中作为对照。 Phloretin处理的细胞可用作阳性对照。

7.向每个孔中加入10μL/孔2-DG溶液（组分A），并在37℃，5％CO₂培养箱中孵育20-40分钟。对于阴性对照，留下一些未经胰岛素，抑制剂和2-DG处理的孔。

8.处理后，取出每孔中的溶液，用KRPH缓冲液轻轻洗涤细胞3次，100μL/孔，从溶液中除去额外的2-DG。从孔中移除KRPH缓冲液。

9.向每个孔中加入25μL/孔酸性裂解缓冲液（组分C），并在37℃下孵育20分钟以裂解细胞。并且可以同时制备2DG摄取测定混合物。

10向每个孔中加入25μL/孔中和缓冲液（组分D），充分混合，在室温下放置5-10分钟以中和细胞裂解物。

11.向2DG6P标准品或细胞裂解液的每个孔中加入50μL2DGUptake Assay工作溶液。

12.在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

13.使用吸光度板读数器监测570 / 610nm处的吸光度比增加。

数据分析

参考文献

Corticotropin releasing hormone can selectively stimulate glucose uptake in corticotropinoma via glucose transporter 1
Authors: Jie Lu, Blake K Montgomery, Grégoire P Chatain, Alejandro Bugarini, Qi Zhang, Xiang Wang, Nancy A Edwards, Abhik Ray-Chaudhury, Marsha J Merrill, Russell R Lonser
Journal: Molecular and Cellular Endocrinology (2017)

A Non-Radioactive Enzymatic Photometric Assay for Glucose Uptake in Insulin-Responsive 3T3-L1 Adipocytes
Authors: Qin Zhao, Jinfang Liao, Zhenjun Diwu
Journal: Biophysical Journal (2014): 369a

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

	货号	36550	存储条件	Multiple
	规格	1 Plate	价格	2544
	Ex (nm)	495	Em (nm)	516
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

钾（K⁺）离子通道在调节基本生物过程（包括心率，激素和神经递质分泌，水和电解质平衡）中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐，疼痛，糖尿病，神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl ⁺通过K⁺通道的渗透性已被广泛用于测定K⁺通道。表达目的K⁺通道的细胞（例如hERG，Kv1.3，Kir2.1，KATP）预先装有Tl⁺敏感染料。该染料是非荧光的，并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后，非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl⁺刺激缓冲液添加到细胞中时，Tl ⁺会流过K⁺通道并与Tl⁺敏感染料结合，从而产生荧光信号。该信号与K⁺通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞，则荧光信号分别降低或升高，以反映K⁺通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在37°C孵育1小时
4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
5. 加入Tl₂SO₄ / K₂SO₄刺激溶液（96孔板为50 µL /孔，384孔板为12.5 µL /孔）
6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液：将20 µL（#36550）或DMSO（#36551和＃36552）的DMSO加到TI-520 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（组分B）添加到9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液（1X）：在8 mL的ddH₂O中加入2 mL的无氯缓冲液（5X）（组分D），并充分混合。

4. Tl₂SO₄溶液（未提供，Sigma Cat＃208191）：将Tl₂SO₄溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意：Tl₂SO₄有毒。 采取必要的预防措施，以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液：将20 µL TI-520 AM储备溶液（500X）加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液（5X）：在1X无氯化物缓冲液中用Tl₂SO₄稀释配体（用于非电压门控钾通道）或K₂SO₄（用于电压门控钾通道）。

表1.应针对每个靶标优化参考（HEK293-KCNH₂细胞中的电压门控hERG通道），Tl₂SO₄和K₂SO₄（电压门控钾通道）或配体（非电压门控钾通道）的浓度及细胞类型。

组分	容积	5X 浓度	最终浓度
无氯缓冲液(5X)	2 mL
K2SO4 (250 mM)	1 mL	25 mM	5 mM
TI2SO4 (80mM)	0.5 mL	4 mM	0.8 mM
ddH2O	5.5 mL
总计:	10 mL

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K⁺通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂（用于抑制研究）将板孵育30分钟。

5.用FLIPR，FDSS或Flexstation加50X /孔（对于96孔板）或12.5μL/孔（对于384孔板）的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑，并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM，0.5 mM，0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。

 

 

Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒

	货号	36551	存储条件	Multiple
	规格	10 Plates	价格	5856
	Ex (nm)	495	Em (nm)	516
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

钾（K⁺）离子通道在调节基本生物过程（包括心率，激素和神经递质分泌，水和电解质平衡）中起重要作用。钾离子通道已被认为是包括心律不齐，疼痛，糖尿病，神经功能障碍等在内的疾病适应症的药物靶标。Tl ⁺通过K⁺通道的渗透性已被广泛用于测定K⁺通道。表达目的K⁺通道的细胞（例如hERG，Kv1.3，Kir2.1，KATP）预先装有Tl⁺敏感染料。该染料是非荧光的，并且对细胞膜是可渗透的。进入细胞内部后，非荧光AM酯染料会被内源性酯酶裂解为留在细胞内部的带负电荷的染料。将含有低剂量Tl⁺刺激缓冲液添加到细胞中时，Tl ⁺会流过K⁺通道并与Tl⁺敏感染料结合，从而产生荧光信号。该信号与K⁺通道的活动成正比。如果将拮抗剂或拮抗剂添加至细胞，则荧光信号分别降低或升高，以反映K⁺通道的抑制或刺激活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Screen Quest 免洗钾离子通道检测试剂盒。

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1. 在生长培养基中准备细胞
2. 添加Tl-520 AM染料加载溶液（对于96孔板为100 µL /孔，对于384孔板为25 µL /孔）
3. 在37°C孵育1小时
4. 加入激动剂/拮抗剂并在37°C下孵育30分钟
5. 加入Tl₂SO₄ / K₂SO₄刺激溶液（96孔板为50 µL /孔，384孔板为12.5 µL /孔）
6. 检测Ex / Em = 490/525 nm的荧光强度

 

溶液配制

储备溶液配制

1. TI-520 AM储备溶液：将20 µL（#36550）或DMSO（#36551和＃36552）的DMSO加到TI-520 AM（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：未使用的TI-520 AM储备溶液可以等分并存储在<-20℃下。 避光并避免重复的冻融循环。

2.分析缓冲液（1X）：将1 mL的10XPluronic®F127 Plus（组分B）添加到9 mL的HHBS缓冲液（组分C）中并充分混合。 注意：10 mL 1X分析缓冲液足以用于一块板。 分装并在<-20℃下存储未使用的10XPluronic®F127 Plus（组分B）。避光并避免重复的冻融循环。

3.无氯缓冲液（1X）：在8 mL的ddH₂O中加入2 mL的无氯缓冲液（5X）（组分D），并充分混合。

4. Tl₂SO₄溶液（未提供，Sigma Cat＃208191）：将Tl₂SO₄溶于超纯水中至终浓度80 mM。 注意：Tl₂SO₄有毒。 采取必要的预防措施，以防止吸入和皮肤接触。

 

工作溶液配制

1. TI-520 AM染料加载溶液：将20 µL TI-520 AM储备溶液（500X）加入10 mL的1X分析缓冲液中并充分混合。

2.刺激溶液（5X）：在1X无氯化物缓冲液中用Tl₂SO₄稀释配体（用于非电压门控钾通道）或K₂SO₄（用于电压门控钾通道）。

表1.应针对每个靶标优化参考（HEK293-KCNH₂细胞中的电压门控hERG通道），Tl₂SO₄和K₂SO₄（电压门控钾通道）或配体（非电压门控钾通道）的浓度及细胞类型。

组分	容积	5X 浓度	最终浓度
无氯缓冲液(5X)	2 mL
K2SO4 (250 mM)	1 mL	25 mM	5 mM
TI2SO4 (80mM)	0.5 mL	4 mM	0.8 mM
ddH2O	5.5 mL
总计:	10 mL

 

实验步骤

1.将100 µL /孔（96孔板）或25 µL /孔（384孔板）的TI-520 AM染料加载溶液添加到细胞板中。

2.将染料加载板在细胞培养箱中孵育1小时，然后在室温下再孵育15至30分钟。 注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，而无需进一步室温孵育。

3.用HHBS准备K⁺通道拮抗剂或激动剂。

4.在细胞培养箱中用拮抗剂（用于抑制研究）将板孵育30分钟。

5.用FLIPR，FDSS或Flexstation加50X /孔（对于96孔板）或12.5μL/孔（对于384孔板）的5X刺激缓冲液。 使用Ex / Em = 490/525 nm的滤光片组进行实验。 每1-2秒读取板3分钟。

 

图示

图1.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了对hERG通道的剂量依赖性抑制。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 向细胞中加入10 µL阿司咪唑，并在37°C下孵育30分钟。 通过FlexStation将50 µL含0.5 mM Tl2SO4和2.5 mM K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 / 525nm的情况下每秒钟读取3分钟。 IC50 = 0.46 µM。

图2.使用Screen Quest 钾离子通道试剂盒在HEK293-KCNH2细胞中测量了K2SO4剂量依赖性hERG通道活性。 将细胞以20,000个细胞/ 100 µL /孔在Costar黑色96孔板中接种过夜。 将细胞与100 µL染料加载溶液在37°C下孵育1小时。 通过FlexStation将终浓度为1 mM，0.5 mM，0.25 mM或0 mM的Tl2SO4和不同浓度的含K2SO4的刺激溶液注入每个孔中，并在激发/发射= 490 /下每1-2秒读取平板3分钟。 525nm。