适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

相关产品

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

相关产品

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的含有Styramide 缀合物的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8 ℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂储备溶液：将90 µL的ddH₂O加入10 µL 3％过氧化氢中（未提供）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液，做到现用现配。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需100 µL Styramide 工作溶液，（提供的Styramide 足以进行100次测试。）注意：必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：根据所使用的二抗说明书中的建议配制适当浓度的二级抗体-HRP工作溶液。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

相关产品

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的Styramide 缀合物（组分A）的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂溶液（100X）：向9 mL的ddH₂O中添加1 mL的3％过氧化氢（组分E）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂ 储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需的100 µL Styramide 工作溶液，提供的Styramide 足以进行100次测试。注意： 必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：在含1％BSA的PBS中以1：100稀释100X二级抗体-HRP储备溶液。注意：  此试剂盒中提供的二抗HRP足以用于100μL HRP工作溶液/盖玻片或96孔板中的每孔进行100次测试。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

图3.使用iFluor PSA 成像试剂盒对甲醛固定，对石蜡包埋的人肺腺癌进行顺序免疫染色。用兔抗EpCam抗体和带有山羊抗兔IgG的iFluor 488 PSA 成像试剂盒标记EpCam，然后洗涤。Pan-Keratin用小鼠抗Pan Keratin抗体标记、iFluor 555 PSA 成像试剂盒带有山羊抗小鼠IgG标记。细胞核用DAPI标记。在共聚焦显微镜上采集图像。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1. 修复/透化细胞或组织
2. 在封闭缓冲液中添加一抗
3. 加入结合HRP的二抗
4. 准备Styramide工作溶液，并在室温下添加到细胞或组织中（5-10分钟）

溶液配制

储备溶液配制

1.Styramide 储备溶液（100X）：将100 µL DMSO加入iFluor 染料标记的Styramide 缀合物（组分A）的小瓶中，制成100X Styramide 储备溶液。注意：一次性使用等分试样，并将未使用的100X储备溶液在2-8℃的冰箱避光保存，并避免重复冻融循环。

2.H₂O₂溶液（100X）：向9 mL的ddH₂O中添加1 mL的3％过氧化氢（组分E）。注意：在使用当天准备新鲜的100X H₂O₂溶液。

工作溶液配制

1.Styramide 工作溶液（1X）：每1 mL反应缓冲液需要10 µL Styramide 储备溶液和10 µL H₂O₂ 储备溶液。注意：盖玻片或96孔板中每孔所需的100 µL Styramide 工作溶液，提供的Styramide 足以进行100次测试。注意： 必须在制备后2小时内使用Styramide 工作溶液，并避免直接暴露在光线下。

2.二级抗体-HRP工作溶液：在含1％BSA的PBS中以1：100稀释100X二级抗体-HRP储备溶液。注意：  此试剂盒中提供的二抗HRP足以用于100μL HRP工作溶液/盖玻片或96孔板中的每孔进行100次测试。

实验步骤

（该步骤适用于细胞或组织染色）

细胞固定和透化

组织固定，脱石蜡和补液

（根据标准IHC方案对组织进行脱蜡和脱水处理。根据实验方案使用特定溶液进行抗原修复。）

过氧化物酶标记

Styramide标记

复染和荧光成像

表1.建议用于核复染色的产品。 

图示

图1.Power Styramide 信号放大（PSA）系统是可以检测细胞和组织中极低丰度的靶标最灵敏的方法之一，其荧光信号强度比广泛使用的tyramide（TSA）试剂高10-50倍。与iFluor染料结合使用后具有更高荧光强度、更高的光稳定性和增强的水溶性，iFluor染料标记的Styramide缀合物可以产生比标准ICC /明显更高的精度和灵敏度（超过100倍）的荧光信号。PSA利用辣根过氧化物酶（HRP）的催化活性原位共价沉积荧光团。PSA自由基的反应性比酪酰胺自由基高得多，这使PSA系统比传统的TSA试剂更快，更耐用，更灵敏。

图2.用兔抗Tubulin一抗标记的HeLa细胞的荧光图像。然后将细胞分别用HRP标记的山羊抗兔IgG二抗和iFluor Styramide（左）或AlexaFluor 350酪酰胺（中和右）染色。使用DAPI滤光片组拍摄荧光图像，并相应地标记曝光时间。在相同的曝光时间（25毫秒）下，iFluor 350 Styramide 显示出比AlexaFluor 350酪酰胺明显更高的荧光强度。AlexaFluor 350酪酰胺需要更长的曝光时间（125毫秒）才能使染色可视化。

图3.使用iFluor PSA 成像试剂盒对甲醛固定，对石蜡包埋的人肺腺癌进行顺序免疫染色。用兔抗EpCam抗体和带有山羊抗兔IgG的iFluor 488 PSA 成像试剂盒标记EpCam，然后洗涤。Pan-Keratin用小鼠抗Pan Keratin抗体标记、iFluor 555 PSA 成像试剂盒带有山羊抗小鼠IgG标记。细胞核用DAPI标记。在共聚焦显微镜上采集图像。