GST (26H1) 小鼠单克隆抗体 (Alexa Fluor® 488 偶联) GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

GST (26H1) 小鼠单克隆抗体 (Alexa Fluor® 488 偶联)

GST (26H1) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)

详细描述:

应用范围:IF-IC F; 反应种属:All Species Expected; 标记:Alexa Fluor® 488。

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货号 名称 单位 购买
3368S GST (26H1) 小鼠单克隆抗体 (Alexa Fluor® 488 偶联) 100µl 咨询客服

PrimeSurface 96U White plate PrimeSurface 96U 白色板 品牌:Sumitomo Bakelite


PrimeSurface 96U White plate

PrimeSurface 96U 白色板

品牌:Sumitomo Bakelite
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

MS-9096WZ

20个

PrimeSurface 96U White plate                                                       PrimeSurface 96U 白色板            品牌:Sumitomo Bakelite


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DCFDA 荧光染料 品牌:Chemodex


品牌:Chemodex
CAS No.:2044-85-1
储存条件:+4°C
纯度:>95% (HPLC)
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

CDX-D0063-G005

5 g 3,630.00


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CRISPR/Cas9质粒系统酶试剂盒Takara

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CRISPR/Cas9质粒系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632601 Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) 1 System ¥4,534 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
Clontech 632602 Guide-it CRISPR/Cas9 System (Red) 1 System ¥4,534 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
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          CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统
CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统 CRISPR/Cas9质粒系统            
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CRISPR/Cas9质粒系统
对于使用CRISPR/Cas9 技术进行哺乳动物基因组编辑来说,Guide-it CRISPR/Cas9 系统是可以用于克隆和表达靶向单链向导RNA (single guide RNAs, sgRNAs)的试剂盒。该系统中的载体同时表达Cas9核酸酶、针对特定位点的sgRNA和明亮的荧光蛋白质。其中两种荧光蛋白质(ZsGreen1 和 tdTomato)可供选择,用于监测转染效率或在后期使用流式细胞仪富集/分选转染细胞时用到。使用该系统构建一个表达特异性序列的sgRNA的质粒非常简单;将用户提供的、与目标序列对应的两条核酸单链退火结合成为双链,再使用系统中包含的高效率连接混合液将双链插入到线性化的质粒中。这个试剂盒同样包括Stellar感受态细胞,确保高效率的转化。
 
产品特点:
· 单质粒载体:特异性靶向sgRNA的表达由人的U6启动子驱动,Cas9核酸酶及明亮的荧光标志(ZsGreen1 或 tdTomato)的表达由一个双向CMV启动子驱动。
· 荧光蛋白质tdTomato和ZsGreen1异常明亮:分别是EGFP亮度的6倍和2.5倍;这些标志物可以被用于监测转染效率、或使用流式细胞仪富集/分选转染细胞。
· 简便地构建质粒:针对您的靶序列设计的特异性寡核苷酸,然后使用试剂盒中提供的高效率混合液和高效的感受态细胞克隆到预先线性化的质粒中。
· 包含足够的试剂:足够用于构建表达10种不同的sgRNA的质粒。
 
产品应用:
使用CRISPR/Cas9技术对哺乳动物进行基因编辑时,靶向单链向导RNA(sgRNA)的克隆和表达。
 
产品组份:
Guide-it CRISPR/Cas9 System (Green) (Code No. 632601)
· pGuide-it-ZsGreen1 Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells

Guide-it CRISPR/Cas9 System (Red) (Code No. 632602)
· pGuide-it-tdTomato Vector (Linear)
· Guide-it Ligation Components
· Stellar Competent Cells

 
实验例:
CRISPR/Cas9质粒系统
分别接种1×105个HEK293、HeLa、U2OS、HT1080细胞至12孔板,培养16 h后,采用Xfect Transfection Reagent转染2.5 μg pGuide-it-ZsGreen1质粒至细胞。pGuide-it-ZsGreen1质粒包含分别以CCR5、C4BPB、EMX1为靶基因设计的sgRNA。
转染48 h后,通过荧光显微镜观察ZsGreen1荧光表达情况(A),通过FACS测定转染效率(B. Transfection%)。
采用Guide-it Mutation Detection Kit测定基因突变导入效率。以细胞为起始直接PCR扩增目的片段,扩增产物经过变性及退火后产生错配位点,之后Guide-it解离酶剪切错配位点。剪切产物经过凝胶电泳后,通过密度分析测定基因突变导入效率(B. Indel%)。
(数据来源于Takara Bio USA, Inc.)
 
 
 
产品详情请点击:CRISPR/Cas9质粒系统
 
 

页面更新:2020-03-05 10:52:36

钙离子荧光探针腔肠素 h CAS 50909-86-9 货号21165-AAT Bioquest荧光染料

上海金畔生物科技有限公司代理AAT Bioquest荧光染料全线产品,欢迎访问AAT Bioquest荧光染料官网了解更多信息。

钙离子荧光探针腔肠素 h CAS 50909-86-9

钙离子荧光探针腔肠素 h CAS 50909-86-9

钙离子荧光探针腔肠素 h CAS 50909-86-9    货号21165 货号 21165 存储条件 在零下15度以下保存, 避免光照
规格 10 mg 价格 6432
Ex (nm) 437 Em (nm) 466
分子量 407.46 溶剂 Ethanol
产品详细介绍

简要概述

产品基本信息

货号:21165

产品名称:钙离子荧光探针腔肠素 h

CAS:50909-86-9

规格:10mg

储存条件:-15℃避光防潮

保质期:12个月

 

产品物理化学光谱特性

分子量:407.46

溶剂:乙醇

激发波长(nm):437

发射波长(nm):466

 

产品介绍

钙离子荧光探针腔肠素 h是美国AAT Bioquest生产的用于标记钙离子的荧光探针。钙的测量对于许多生物学研究至关重要。水母发光蛋白复合物包含22kD的apoaequorin蛋白,分子氧和发光体coelenterazine。当三个Ca2+离子与该复合物结合时,腔肠素被氧化成腔肠酰胺,伴随着二氧化碳和蓝光的释放。水母发光蛋白的生物发光对Ca2+浓度的近似三次幂依赖性允许测量Ca2+浓度,检测范围为~0.1μM至>100μM。与荧光Ca2+指示剂不同,可以在不照射样品的情况下检测Ca2+结合的水母发光蛋白,从而消除自发荧光的干扰。天然腔肠素及其衍生物赋予水母发光蛋白复合物不同的Ca2+亲和力和光谱特性。据报道,用腔肠素hcp重构的重组脱辅基水母蛋白具有最佳的总体发光,具有高量子产率和快速响应时间。然而,来自腔肠素类似物的水母发光蛋白的细胞内重建可能相对较慢。含有cp,f或h形式的腔肠素的水母发光蛋白表现出比用天然腔肠素重构的脱辅基水母发光蛋白强10-20倍的发光。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的钙离子荧光探针腔肠素 h。 

钙离子篇:时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针

 

参考文献

Molecular characterization of neuropeptide elevenin and two elevenin receptors, IsElevR1 and IsElevR2, from the blacklegged tick, Ixodes scapularis
Authors: Donghun Kim, Ladislav Simo, Yoonseong Park
Journal: Insect Biochemistry and Molecular Biology (2018)

Bioluminescence Resonance Energy Transfer (BRET) Assay for Determination of Molecular Interactions in Living Cells
Authors: Kaleeckal G Harikumar, Yan Yan, Ting-Hai Xu, Karsten Melcher, H Eric Xu, Laurence J Miller
Journal: (2017)

Intracellular Ca2+ is important for flagellin-triggered defense in Arabidopsis and involves inositol polyphosphate signaling
Authors: Yi Ma, Yichen Zhao, Gerald A Berkowitz
Journal: Journal of Experimental Botany (2017)

Orchestration of salivary secretion mediated by two different dopamine receptors in the blacklegged tick Ixodes scapularis
Authors: Donghun Kim, Ladislav Simo, Yoonseong Park
Journal: Journal of Experimental Biology (2014): 3656–3663

说明书
钙离子荧光探针腔肠素 h CAS 50909-86-9.pdf

Wakopak Wakosil-II 5C18 RS 4.6*100mm 高纯硅胶柱5C18RS 品牌:FUJIFILM Wako


Wakopak Wakosil-II 5C18 RS 4.6*100mm

高纯硅胶柱5C18RS

品牌:FUJIFILM Wako
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

233-62617

No grade 1 column(W)

Wakopak Wakosil-II 5C18 RS 4.6*100mm                                                      高纯硅胶柱5C18RS            品牌:FUJIFILM Wako


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SLP-HS Single Reagent Set SLP-HS检测用试剂盒 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

293-58301

No grade 20 tests

SLP-HS Single Reagent Set                                                      SLP-HS检测用试剂盒            品牌:Wako

替代品:296-81001


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Carbomix Ca–NP 4.6×250 mm Carbomix 离子交换色谱柱 品牌:Sepax


品牌:Sepax
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

251005-4625

1根 咨询


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磷酸化Tyrosine Hydroxylase (Ser31) 抗体 Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) Antibody

磷酸化Tyrosine Hydroxylase (Ser31) 抗体

Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) Antibody

详细描述:

应用范围:W IP; 反应种属:Rat; 标记:无标记。

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
3370S 磷酸化Tyrosine Hydroxylase (Ser31) 抗体 100µl 咨询客服

NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所

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NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所L-NAME

02 酸化ストレス関連試薬

L-NAME

NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬

NO検出関連試薬

  • 製品コード
    N412  L-NAME
  • CAS番号
    51298-62-5
  • 化学名
    NG-Nitro-L-arginine methyl ester, hydrochloride
  • 分子式・分子量
    C7H16ClN5O4=269.69
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 g ¥10,800 340-07231
  • NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所
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マニュアル

  • プロトコル NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所 NO を消去したい
    NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所

技術情報

溶解例

10 mg/mL (水)

参考文献

参考文献を表示する

1) G. A. Gray, C. Schott, Geraldine, Julou-Schaeffer, I. Fleming, J. R. Parratt and J.-C. Stoclet, "The Effect of Inhibitors of the L-Arginine/Nitrtic Oxide Pathway on Endotoxin-induced Loss of Vascular Responsiveness in Anaesthetozed Rats", Br. J. Pharmacol., 1991, 103, 1218.
2) M. G. Belvisi, D. Stretton and P. J. Barnes, "Nitric Oxide as an Endogenous Modulator of Cholinergic Neurotransmission in Guinea-pig Airways", Eur. J. Pharmacol., 1991, 198, 219.
3) P. K. Moore, A. O. Oluyomi, R. C. Babbedge, P. Wallace and S. L. Hart, "L-NG-Nitro Arginine Methyl Ester Exhibits Antinociceptive Activity in the Mouse", Br. J. Pharmacol., 1991, 102, 198.
4) S. M. Gardiner, A. M. Compton, P. A. Kemp and T. Bennett, "Effects of NG-Nitro-L-arginine Methyl Ester or Idomethacin on Differential Regional and Cardiac Haemodynamic Actions of Arginine Vasopressin and Lysine Vasopressin in Conscious Rats", Br. J. Pharmacol., 1991, 102, 65.
5) T. B. Macall, M. Feelisch, R. M. J. Palmer and S. Moncada, "Identification of N'-Iminoethyl-L-ornithine as an Irreversible Inhibitor of Nitric Oxide Synthase in Phagocytic Cells", Br. J. Pharmacol., 1991, 102, 234.
6) P. Kubes, M. Suzuki and D. N. Granger, "Nitric Oxide: An Endogenous Modulator of Leukocyte Adhesion", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, 88, 4651.
7) B. Heinzel, M. John, P. Klatt, E. Bohme and B. Mayer, "Ca2+/Calmodulin-dependent Formation of Hydrogen Peroxide by Brain Nitric Oxide Synthase", Biochem. J., 1992, 281, 627.
8) B. L. Tepperman and B. D. Soper, "Interaction of Nitric Oxide and Salivary Gland Epidermal Growth Factor in the Modulation of Rat Gastric Mucosal Integrity", Br. J. Pharmacol., 1993, 110, 229.
9) K. Kumagai, H. Suzuki, M. Ichikawa, M. Jinbo, M. Murakami, M. Ryuzaki and T. Saruta, "Nitric Oxide Increases Renal Blood Flow by Interactiong with the Synpathetic Nervous System", Hypertension, 1994, 24(2), 220.
10) L. Yu, P. E. Gengaro, M. Niederberger, T. J. Burke and R. W. Schrier, "Nitric Oxide: A Mediator in Rat Tubular Hypoxia/Reoxygenation Injury", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91, 1691.
11) C. Baylis, S. Masilamani, G. Losonczy, L. Samsell, P. Harton and K. Engels, "Blood Pressure(BP) and Renal Vasoconstrictor Responses to Acute Blockade of Nitric Oxide : Persisitence of Renal Vasoconstriction Despite Normalization of Bpwith Either Verapamil or Sodium Nitroprusside", J. Pharmacol. Exp. Ther., 1995, 274(3), 1135.
12) T. T. Ma, H. Ischiropoulos and C. A. Brass, "Endotoxin-Stimulated Nitric Oxide Production Increases Injury and Reduces Rat Liver Chemiluminescence During Reperfusion", Gastroenterology, 1995, 108, 463.
13) J. C. Simmons and R. H. Freeman, "L-Argine Analogues Inhibit Aldosterone Secretion in Rats", Am. J. Physiol., 1995, 268(5Pt2), R1137.
14) Hyeyoung Kim and Kyung Hwan Kim, "Effects of a Nitric Oxide Donor and Nitric Oxide Synthase Inhibitors on Acid Secretion of Isolated Rabbit Gastric Glands", Pharmcol., 1996, 53, 331.
15) O. W. Griffith and R. G. Kilbourn, "Nitric Oxide Synthase Inhibitors: Amino Acids", Methods Enzymol., 1996, 268(A), 375.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色粉末又は結晶性粉末で水に溶ける。
水溶状: 試験適合
薄層クロマトグラフィー: 試験適合
取扱条件
1.危険物第5類 ニトロ化合物 危険等級Ⅱ, 2.保存方法:冷蔵
危険・有害
シンボルマーク
NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所
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NO検出関連試薬 L-NAME 同仁化学研究所

関連製品

Lipopolysaccharide, from Salmonella minnesota 1114 (by ultracentrifugation) 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:2-10℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

124-05651

for Cellbiology 5 mg 2,240.00


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Presep® (Luer Lock) Silica Gel (HC-N) Type 3L (115g/200ml) 聚丙烯针筒型(Luer Lock)硅胶前处理柱3L型号(115g/200ml) 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

294-34031

for Preparative Chromatography 5 EA 3,140.00


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录

形貌:球形,粒径35~63µ m,孔径:3n m,孔体积0.6ml/g,比表面积780m2/g,pH6.5~7.5;近年来,随着高性能快速柱层析系统(中压自动制备纯化系统)的发展,化学合成物质和天然物质的制备纯化得到了很大进步。

用填充柱作为快速层析柱可在很大程度上削减层析柱的制备工作量,为药物研发、农业以及化学品领域的加速发展做出了巨大贡献。

Presep®系列制备柱是一种用于快速柱层析系统中的一种填充柱。

此填充柱是在聚丙烯注射器内(luer lock 型)填充了一种高性能填充材料。

这一系列柱子共含有 5 个型号(M,L,2L,3L 和4L),这 5 个型号柱子的区别是柱子中的填充料不同。柱子的特殊连接器可以很容易连接和拆除。

用这个连接器,可将柱子安装在不同厂家生产的快速柱层析系统上。

它们对于提高在制备纯化过程中功效起着非常重要的作用。

PrimeSurface 96M plate PrimeSurface 96M 板 品牌:Sumitomo Bakelite


PrimeSurface 96M plate

PrimeSurface 96M 板

品牌:Sumitomo Bakelite
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

MS-9096MZ

20个

PrimeSurface 96M plate                                                      PrimeSurface 96M 板            品牌:Sumitomo Bakelite


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Presep® (Luer Lock) Silica Gel (HC-N) Type 3L (115g/200ml) 聚丙烯针筒型(Luer Lock)硅胶前处理柱3L型号(115g/200ml) 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:室温
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

290-34033

for Preparative Chromatography 30 EA 咨询


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录

形貌:球形,粒径35~63µ m,孔径:3n m,孔体积0.6ml/g,比表面积780m2/g,pH6.5~7.5;近年来,随着高性能快速柱层析系统(中压自动制备纯化系统)的发展,化学合成物质和天然物质的制备纯化得到了很大进步。

用填充柱作为快速层析柱可在很大程度上削减层析柱的制备工作量,为药物研发、农业以及化学品领域的加速发展做出了巨大贡献。

Presep®系列制备柱是一种用于快速柱层析系统中的一种填充柱。

此填充柱是在聚丙烯注射器内(luer lock 型)填充了一种高性能填充材料。

这一系列柱子共含有 5 个型号(M,L,2L,3L 和4L),这 5 个型号柱子的区别是柱子中的填充料不同。柱子的特殊连接器可以很容易连接和拆除。

用这个连接器,可将柱子安装在不同厂家生产的快速柱层析系统上。它们对于提高在制备纯化过程中功效起着非常重要的作用。

pEBMulti-Hyg TARGET tag-N N端插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体 品牌:Wako


品牌:Wako
CAS No.:
储存条件:-20℃
纯度:
产品编号

(生产商编号)

等级 规格 运输包装 零售价(RMB) 库存情况 参考值

168-26511

for Genetic Research 20 ug

pEBMulti-Hyg TARGET tag-N                                                      N端插入TARGET标签的pEBMulti-Hyg载体             品牌:Wako


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产品描述相关资料下载相关产品浏览记录 pEBMulti是哺乳动物(人,猴子)细胞系的表达载体。该载体插入了TARGET tag,该tag位于多克隆位点的N末端。该载体有oriP和EBNA1(EB病毒细胞核抗原1),所以pEBMulti可以稳定遗传。该载体不整合到染色体DAN而是附着在染色体DNA上。可用于构建稳定的表达细胞系。载体大小:11 kbp 组成: 10 Mm Tris-HCl, 1mM EDTA 浓度: 0.5 μg/μl 抗生素标志: 潮霉素 B

磷酸化Erk5 (Thr218/Tyr220) 抗体 Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody

磷酸化Erk5 (Thr218/Tyr220) 抗体

Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody

详细描述:

应用范围:W; 反应种属:Human,Mouse,Rat,Monkey; 标记:无标记。

货号 产品名称 品牌 购买
货号 名称 单位 购买
3371L 磷酸化Erk5 (Thr218/Tyr220) 抗体 300µl 咨询客服
3371S 磷酸化Erk5 (Thr218/Tyr220) 抗体 100µl 咨询客服

CRISPR/Cas9慢病毒系统酶试剂盒Takara

上海金畔生物科技有限公司代理Takara酶试剂盒全线产品,欢迎访问官网了解更多产品信息。

CRISPR/Cas9慢病毒系统
品牌 Code No. 产品名称 包装量 价格(元) 说明书 数量
Clontech 632629 Lenti-X CRISPR/ Cas9 System 1 System ¥14,572 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632630 pLVX-hyg-sgRNA1 Vector System 10 Rxns ¥4,610 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632631 pLVX-puro-Cas9 Vector 20 μl ¥7,483 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
Clontech 632633 Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System 1 System ¥22,832 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
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          基因敲除    
          CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统
CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统 CRISPR/Cas9慢病毒系统            
  基因敲入        
          CRISPR/Cas9慢病毒系统        
 
 
注意:购买632633时,需要填写专利确认书
 
慢病毒介导的CRISPR/Cas9 系统
Lenti-X CRISPR/Cas9 System
Lenti-X CRISPR/Cas9 System是一个完整的由慢病毒介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统。该系统包括Lenti-X Packaging Single Shots(用于产生高滴度的病毒)和两个不同的质粒载体(用于在靶细胞中表达Cas9 和客户自定义的sgRNA)。表达sgRNA的质粒系统pLVX-hyg-sgRNA1,易于插入客户自定义的sgRNA 序列,并且该系统提供足够的质粒供客户构建10种不同的sgRNA序列质粒。利用慢病毒导入sgRNA和Cas9基因,可以对难转染细胞系实现靶向基因编辑。
Lenti-X CRISPR/Cas9 System涉及到Cas9在靶细胞中的恒定表达,而Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System结合了Tet-On 3G 反式转录激活蛋白,这使得用户可以通过添加强力霉素(doxycycline)来诱导Cas9的表达。通过严格控制Cas9的表达,Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System可以使用户在细胞培养中,减少与Cas9稳定表达相关的毒性与脱靶效应。
 
■ 产品特点
· 利用病毒导入Cas9 基因和sgRNA ,使得一些难转染的哺乳动物细胞可以实现基因编辑,包括增殖细胞和非增殖细胞。
· Lenti-X Packaging Single Shots易于产生高滴度病毒。
· 由慢病毒介导客户自定义的sgRNA 和Cas9,用于哺乳动物使用CRISPR/Cas9 技术进行基因编辑。
· 通过严格控制Cas9的表达,Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System可以使用户在细胞培养中,减少与Cas9稳定表达相关的毒性与脱靶效应。
 
■ 产品应用
· 利用CRISPR/Cas9技术对哺乳动物基因组编辑时,以慢病毒为基础的、用户自定义sgRNA和 Cas9的导入系统。
 
■ 实验例
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图1. 诱导敲除HEK293细胞中CD81基因
Tet-On 3G慢病毒转导靶细胞后采用G418筛选阳性单细胞克隆,选取24个单克隆分析荧光素酶报告基因的诱导表达倍数,选择荧光素酶报告基因背景量表达量最低的细胞克隆,然后以Cas9慢病毒(MOI=5)进行转导。转导后的靶细胞以1 μg/ml嘌呤霉素进行筛选,2周后,任意选择6个稳定细胞克隆分析Cas9的诱导表达倍数。将每个单克隆扩增培养的细胞分别接种至两个孔(12孔板)进行培养,其中一孔细胞添加0.5 μg/ml强力霉素诱导培养2天。采用抗Cas9的多克隆抗体(Code No. 632607)和ECL试剂通过Western blot分析Cas9诱导表达情况,抗体稀释比例为1:1,000。从中选取3个Tet-On 3G-Cas9-阳性细胞克隆(C-1, C-2和C-3)进行扩增培养并将其分别接种至2个孔(12孔板)中,CD81-sgRNA慢病毒(MOI=5)再次转导靶细胞,转导8小时后,添加0.5 μg/ml强力霉素至其中一孔进行诱导培养。6天后,收集细胞并采用FITC标记的抗人CD81抗体进行染色,通过FACS检测CD81表达情况。图A. Western blot检测结果显示了在添加0.5 μg/ml强力霉素(+)进行诱导或者不添加强力霉素(-)的情况下,6个分别独立的Tet-On 3G-Cas9-阳性细胞群Cas9蛋白质的表达情况。图B. FACS检测结果显示了CD81-sgRNA慢病毒转导的3个分别独立的Tet-On 3G-Cas9-阳性293T细胞群,在添加0.5 μg/ml强力霉素(+)进行诱导或者不添加强力霉素(-)的情况下,目的基因的敲除效率。在所检测的3个细胞群中,其中2个细胞群C-1和C-2在不添加强力霉素进行诱导的情况下基本不发生基因编辑现象,添加强力霉素进行诱导的情况下CD81基因的敲除效率分别为58.6%和30.7%。而另外一个细胞群C-3在不添加强力霉素进行诱导的情况下仍然会发生基因编辑现象,CD81基因的敲除效率为27.9%。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图2. 以可诱导的方式编辑HEK293细胞中AAVS1基因
通过qRT-PCR分析6个Tet-On 3G-Cas9-阳性HEK293稳定细胞系中Cas9的诱导表达情况。将HEK293细胞分别接种至2个孔(12孔板),以AAVS1-sgRNA慢病毒(MOI=5)进行转导。转导8小时后,添加0.5 μg/ml强力霉素至其中一孔诱导培养6天。6天后采用Guide-it Mutation Detection Kit (Code No. 631443)检测AAVS1基因编辑效率。图A.通过qRT-PCR方法检测每个细胞克隆分别在未经诱导(-Dox)和经过诱导(+Dox)的情况下Cas9蛋白质的表达情况。未经诱导和经过诱导的细胞的Ct值和ΔCt值标注在相对应一栏,计算出来的表达倍数差异标注在右侧一栏。多个细胞克隆的检测结果显示,在所检测的细胞克隆中1号克隆(绿色数字)具有最好的诱导性能,只有3号克隆(红色数字)在没有强力霉素诱导的情况下Cas9也会有所表达而且诱导性能较差。图B. Guide-it解离酶分析实验检测未经诱导(–)和经过诱导(+)的细胞克隆中AAVS1基因编辑效率。亲本细胞(未转导细胞)检测结果显示未经诱导和经过诱导的细胞所产生的片段大小是等同的。而经过诱导的稳转细胞系的检测结果显示产生了较小的基因片段,这说明在所检测的细胞克隆中都发生了AAVS1基因编辑现象。3号克隆在未经诱导的情况下也可以观察到剪切产物,这一点与qRT-PCR检测结果是相一致的。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图3. Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9系统载体组成
pLVX-EF1a-Tet3G载体编码表达Tet-On 3G转录激活蛋白质,由组成型启动子EF-1 alpha启动表达。与常用的CMV启动子相比,EF-1 alpha启动子在某些细胞类型(包括各种干细胞类型)中不易被沉默,所建立的诱导细胞系适用于长期使用。Tet-On 3G是由Tet-On Advanced转录激活蛋白质修饰而来,具有更高的强力霉素反应灵敏度。pLVX-TRE3G-Cas9-puro载体由诱导型启动子PTRE3GV启动表达经过优化的Cas9核酸酶。pLVX-TRE3G-Cas9-puro载体上的Cas9序列来源于杆菌属酿脓链球菌,进行了密码子优化以适用于哺乳动物细胞表达,另外在Cas9序列C端还引入了核定位信号(NLS)。pLVX-hyg-sgRNA1载体由组成型人U6启动子编码表达sgRNA(由用户设计并插入)。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图4.为可诱导型基因编辑选择优质的细胞克隆
通过分析Cas9表达情况或者分析未诱导的或者经过诱导的细胞群基因编辑情况来筛选优质的细胞克隆。虽然通过Western blot检测Cas9蛋白质表达情况有助于预筛选细胞克隆,但是CRISPR/Cas9介导的基因编辑是非常高效的,即使在通过Western blot检测不到Cas9蛋白质表达的情况下,在相应的细胞克隆中仍然有可能发生基因编辑现象。我们建议通过qRT-PCR方法来筛选Cas9背景表达量较低的细胞克隆,以避免在没有添加强力霉素的情况下发生基因编辑现象。图4上面一行显示的是优质细胞克隆(C-1)的检测数据,经过诱导的C-1细胞中Cas9蛋白质表达情况良好(Western blot,+),Cas9 mRNA背景表达水平非常低(qRT-PCR)。和未经诱导的细胞(-或者-Dox)相比,经过诱导的细胞(+或者+Dox)中Cas9的诱导表达使得基因编辑发生的频率更高,解离酶分析实验中小片段(蓝色箭头)的出现,FACS检测结果显示较大比例的细胞出现在“knockout”范围而未经诱导的细胞中基因编辑水平非常低都可以证实这一点。图4下面一行显示的是非优质细胞克隆(C-3)的检测数据,在未经诱导的细胞克隆(-)中即使通过Western blot没有检测到Cas9蛋白质的表达,但依然可以检测到Cas9 mRNA的表达(qRT-PCR)和基因编辑现象(解离酶,FACS)。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图5. LVX-hyg-CD81-sgRNA转导Jurkat或者HT1080细胞后采用潮霉素筛选稳定整合细胞系。之后采用LVX-puro-Cas9转导筛选获得的稳定细胞克隆,并采用嘌呤霉素再次进行筛选,通过FACS方法检测CD81敲除效率。以抗CD81抗体处理的未经Cas9转导的亲代细胞作为阳性对照,而未做抗体处理的亲代细胞作为阴性对照。
 
CRISPR/Cas9慢病毒系统
 
图6. 诱导敲除Jurkat细胞中CD81基因
按照实验手册操作流程建立Cas9背景表达较低的Tet-On 3G-Cas9-阳性Jurkat细胞,并以CD81-sgRNA慢病毒(MOI=5)连续转导两次。将成功转导的细胞接种至2个孔(12孔板)中并在其中一孔中添加0.5 μg/ml强力霉素(+Dox)诱导培养7天。采用FITC抗人CD81抗体进行检测并通过FACS进行分析,分析结果显示在未经强力霉素诱导的细胞(-Dox; top)中只有一小部分的细胞(0.4%)发生了基因编辑现象,而经过强力霉素诱导的细胞(+Dox; bottom)中发生CD81基因编辑的比例为32%。
 
■ 产品组份
Lenti-X CRISPR/Cas9 System (Code No.632629)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear) (Code No. 632632,不单独销售)
· pLVX-puro-Cas9 Vector(Code No. 632631)
· Stellar Competent Cells(Code No. 636763)
· Guide-it Ligation Components v2 (Code No. 632615,不单独销售)
· Lenti-X Packaging Single Shots(Code No. 631275,不单独销售)

Lenti-X Tet-On 3G CRISPR/Cas9 System (Code No. 632633)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear)
· pLVX-TRE3G-Cas9-puro Vector Set
· pLVX-EF1a-Tet3G Vector
· Stellar Competent Cells
· Guide-it Ligation Components v2
· Lenti-X Packaging Single Shots

pLVX-hyg-sgRNA1 Vector System (Code No. 632630)
· pLVX-hyg-sgRNA1 Vector (Linear) (Code No. 632632,不单独销售)
· Guide-it Ligation Components v2 (Code No. 632615,不单独销售)
· Stellar Competent Cells(Code No. 636763)

 
 
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页面更新:2020-03-05 10:58:09

5-TAMRA 5-羧基四甲基罗丹明 品牌:Chemodex


品牌:Chemodex
CAS No.:91809-66-4
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CDX-C0055-M025

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替代品:293-35841


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