エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

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エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所ECGreen-Endocytosis Detection

04 細胞内蛍光プローブ

ECGreen-Endocytosis Detection

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

  • 細胞内蛍光プローブ

エンドサイトーシス検出試薬

  • より正確にエンドサイトーシスを可視化できる
  • 生細胞でエンドサイトーシスを追跡できる
  • pH変化に対する応答性が高い
  • 製品コード
    E296  ECGreen-Endocytosis Detection
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
40 μl ¥45,000 342-09751

<使用回数の目安> 40 μl あたり、35 mm dish 20 枚、μ-Slide 8 well 20 枚

  • エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所
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マニュアル

  • 取扱説明書 エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所 日本語
    エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所 English
    エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

技術情報

 

技術情報の目次    

  • 従来法の課題を解決 
  • 直接的にエンドソームを可視化
  • pH変化への応答性が高い
  • 実験例:薬剤を用いた初期エンドソームの観察
  • 実験例:エンドサイトーシス経路を介したエクソソーム取り込みの可視化
  • 実験例:浮遊細胞を用いた温度依存的なエンドサイトーシス変化の観察
  • 応用例:エンドソームの局在の時間変化
  • ECGreenの蛍光特性
  • 関連製品

参考文献

参考文献を表示する

 

文献No. 対象サンプル 装置    引用(リンク)
1) 細胞
(HepG2)
蛍光顕微鏡 Y. Miyakawa, M. Otsuka, K. Sekiba, K. Funato, K. Koike, "Humanized virus-suppressing factor inhibits hepatitis B virus infection by targeting viral cell entry ",  Heliyon,  2021, doi:10.1016/j.heliyon.2021.e07586.
2) 細胞
(皮膚線維芽細胞)
蛍光顕微鏡 H. L. Marko, N. C. Hornig, R. C. Betz, P. Holterhus, J. Altmüller, H. Thiele, M. Fabiano, H. Schweikert, D. Braun, Ul Schiweizer, "Genomic variants reducing expression of two endocytic receptors in 46,XY differences of sex development", Hum. Mutat. 2022, doi:10.1002/humu.24325.
3) 細胞
(HeLa)
蛍光顕微鏡 K. Qiu, R. Seino, G. Han, M. Ishiyama, Y. Ueno, Z. Tian, Y. Sun, J. Diao, "De Novo Design of A Membrane-Anchored Probe for Multidimensional Quantification of Endocytic Dynamics", Adv. Healthcare Mater.2022, doi:10.1002/adhm.202102185.

 

よくある質問

Q

落射型顕微鏡でも観察できますか。

A

共焦点顕微鏡での観察を推奨しておりますが、落射型顕微鏡でも観察は可能です。

小社ではDAPI filter set (Ex : 360/40 nm, Em : 460/50 nm)で検出した実績があります。

 

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

図1. 落射型顕微鏡での観察

Q

血清含有培地で染色できますか?

A

血清含有培地での染色も可能です。
HeLa細胞では血清含有培地で作成したworking solutionを用いて24時間まで細胞毒性なく染色した実績があります。
細胞毒性の評価は小社製品「 Cell Counting Kit-8 」を用いて確認しています。

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

図. Cell Counting Kit-8を用いた細胞毒性試験(24時間)

エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所 エンドサイトーシス検出試薬 ECGreen-Endocytosis Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 黄緑色液体
含量: 試験適合
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍
危険・有害
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    MitoBright LT Red

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所SulfoBiotics– Sodium trisulfide (Na2S3)

02 酸化ストレス関連試薬

SulfoBiotics– Sodium trisulfide (Na2S3)

  • 酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

  • 製品コード
    SB03  –SulfoBiotics– Sodium trisulfide (Na2S3)
  • CAS番号
    37488-76-9
  • 化学名
    Sodium trisulfide, anhydrous
  • 分子式・分子量
    Na2S3=142.16
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
100 mg x 5 ¥12,800 341-91771
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  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所 日本語
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所 English
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所
  • プロトコル 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所 サルフェン硫黄を系の中に加えたい
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所

技術情報

生体内に存在するサルフェン硫黄含有分子種

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所

※生体内のサルフェン硫黄含有分子種は、酸化還元および転移によって変化する。

参考文献

参考文献を表示する

1) Y. Kimura, Y. Mikami, K. Osumi, M. Tsugane, J. Oka, and H. Kimura, "Polysulfides are possible H2S-derived signaling molecules in rat brain", FASEB J., 201327, 2451.
2) S. Koike, Y. Ogasawara, N. Shibuya, H. Kimura, and K. Ishii, "Polysulfide exerts a protective effect against cytotoxicity caused by t-buthylhydroperoxide through Nrf2 signaling in neuroblastoma cells", FEBS Lett., 2013587, 3548.
3) E. R. DeLeon, Y. Gao, E. Huang, M. Arif, N. Arora, A. Divietro, S. Patel, and K. R. Olson , "A case of mistaken identity: are reactive oxygen species actually reactive sulfide species?", American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology ., 2015, 310, (7), 549.
4) D. Delgermuruna, S. Yamaguchia, O. Ichiib, Y. Konb, S. Itoa, and K. Otsuguroa, "Hydrogen sulfide activates TRPA1 and releases 5-HT from epithelioid cells of the chicken thoracic aorta", Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology., 2016, 187, 43 .
5) S. Koikea, T. Kayamaa, S. Yamamotoa, D. Kominea, R. Tanakaa, S. Nishimotoa, T. Suzukia, A. Kishidab, and Y. Ogasawaraa, "Polysulfides protect SH-SY5Y cells from methylglyoxal-induced toxicity by suppressing protein carbonylation: A possible physiological scavenger for carbonyl stress in the brain", NeuroToxicology., 2016,55, 13 .

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色~黄褐色粉末又は固体である。
純度: 90.0% 以上
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光, 2.吸湿注意
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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium trisulfide (Na2S3) 同仁化学研究所

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キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所

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キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所GEDTA(EGTA)

04 細胞内蛍光プローブ
14 キレート試薬

GEDTA(EGTA)

キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所

  • 細胞内蛍光プローブ
  • キレート試薬

キレート試薬

  • 製品コード
    G002  GEDTA(EGTA)
  • CAS番号
    67-42-5
  • 化学名
    O,O’-Bis(2-aminoethyl)ethyleneglycol-N,N,N’,N’-tetraacetic acid
  • 分子式・分子量
    C14H24N2O10=380.35
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
5 g ¥4,000 348-01311
25 g ¥11,000 346-01312
100 g ¥32,600 342-01314
  • キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所
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マニュアル

  • プロトコル キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所 蛍光で細胞内 Ca を測定したい
    キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) C. L. Luke and M. E. Campbell, "Photometric Determination of Magnesium in Electronic Nickel", Anal. Chem. , 1954, 26, 1778. 2) F. S. Sadek, R. W. Schmid and C. N. Reilley, "Visual EGTA Titration of Calcium in Thepresence of Magnesium", Talanta, 1959, 2, 38. 
3) R. A. Burg and H. F. Conaghan, "Chelometric Determination of Calcium and Magnesium in Minerals", Chem. Anal. 196049, 100. 
4) C. D. Dwivedi, K. N. Munshi and A. K. Dey, "Photometric Determination of Gallium, Indium, and Thallium Employing 4-(2-Pyridylazo)resorcinol", Chem. Anal.1966, 55, 13. 
5) F. W. Czech and M. J. McCarthy, "Determination of Acetyl Peroxide in Aqueous Systems Containig Peracetic Acid and Hydrogen Peroxide", Chem. Anal., 196655, 11. 
6) R. Pribil and V. Vesely, "Contributions to the Basic Problems of Complexometry-XX Determination of Calcium and Magnesium", Talanta196613, 233. 
7) 伊藤敦子, 上野景平, "ヒドロキシナフトールブルー(HNB)指示薬を用いるカルシウム、マグネシウムの連続キレート滴定", Jpn. Anal.197019, 393. 
8) 丸山工作, "筋収縮の研究とキレート剤の役割", Dojin News198118, 1. 
9) T. Tatsumi and H. Fliss, "Hypochlorous Acid Mobilizes Intracellular Zinc in Isolated Rat Heart Myocytes", J. Mol. Cell. Cardiol.199426(4), 471. 
10) H. Ohata, Y. Ujiki and K. Momose, "Confocal Imaging Analysis of ATP-Induced Ca2+ Response in Individual Endothelial Cells of the Artery in Situ", Am. J. Physiol.,1997272(6), 1980. 
11) I. Sakabe, S. Paul, W. Dansithong and T. Shinozawa, "Induction of Apoptosis in Neuro-2A Cells by Zn2+ Chelating", Cell Struct. Funct.199823(2), 95.

よくある質問

Q

溶解方法について教えて下さい

A

遊離酸の形ですので、そのままでは水にほとんど溶解しません。
アルカリ水溶液(例えば 0.1N NaOH)を用いて溶解後、試薬水溶液を調製しご使用下さい。

GEDTAがアルカリによって中和される形になり、溶解していきます。
GEDTA1モルに対して、アルカリ2モル程度で完全に溶け、そのときにpHは5~6程度となります。

キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所 キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色結晶性粉末でアルカリに溶ける。
純度(滴定): 97.0% 以上
アルカリ溶状: 試験適合
強熱残分(硫酸塩): 0.10% 以下
重金属(Pbとして): 0.001% 以下
鉄(Fe): 0.001% 以下
取扱条件
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キレート試薬 GEDTA(EGTA) 同仁化学研究所

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所SulfoBiotics– Sodium tetrasulfide (Na2S4)

02 酸化ストレス関連試薬

SulfoBiotics– Sodium tetrasulfide (Na2S4)

  • 酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

  • 製品コード
    SB04  –SulfoBiotics– Sodium tetrasulfide (Na2S4)
  • CAS番号
    12034-39-8
  • 化学名
    Sodium tetrasulfide, anhydrous
  • 分子式・分子量
    Na2S4=174.22
容 量 メーカー希望
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和光純薬
100 mg x 5 ¥12,800 348-91781
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  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所 日本語
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所 English
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所
  • プロトコル 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所

技術情報

生体内に存在するサルフェン硫黄含有分子種

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所

※生体内のサルフェン硫黄含有分子種は、酸化還元および転移によって変化する

参考文献

参考文献を表示する

1) Y. Kimura, Y. Mikami, K. Osumi, M. Tsugane, J. Okaand H. Kimura, "Polysulfides are possible H2S-derived signaling molecules in rat brain", FASEB J., 201327, 2451.
2) S. Koike, Y. Ogasawara, N. Shibuya, H. Kimura, and K. Ishii, "Polysulfide exerts a protective effect against cytotoxicity caused by t-buthylhydroperoxide through Nrf2 signaling in neuroblastoma cells", FEBS Lett., 2013587, 3548.
3) Eric R. DeLeon, Yan Gao, Evelyn Huang, Maaz Arif, Nitin Arora, Alexander Divietro, Shivali Patel, and Kenneth R. Olson , "A case of mistaken identity: are reactive oxygen species actually reactive sulfide species?", American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology ., 2015, 310, (7), 549.
4) D. Delgermuruna, S. Yamaguchia, O. Ichiib, Y. Konb, S. Itoa, and K. Otsuguroa, "Hydrogen sulfide activates TRPA1 and releases 5-HT from epithelioid cells of the chicken thoracic aorta", Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology., 2016, 187, 43 .
5) S. Koikea, T. Kayamaa, S. Yamamotoa, D. Kominea, R. Tanakaa, S. Nishimotoa, T. Suzukia, A. Kishidab, and Y. Ogasawaraa, "Polysulfides protect SH-SY5Y cells from methylglyoxal-induced toxicity by suppressing protein carbonylation: A possible physiological scavenger for carbonyl stress in the brain", NeuroToxicology., 2016,55, 13 .

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色~黄褐色粉末又は固体である。
純度: 90.0% 以上
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光, 2.吸湿注意
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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium tetrasulfide (Na2S4) 同仁化学研究所

関連製品

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所SulfoBiotics– GYY4137

02 酸化ストレス関連試薬

SulfoBiotics– GYY4137

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所

  • 酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

  • 製品コード
    SB06  –SulfoBiotics– GYY4137
  • CAS番号
    106740-09-4
  • 化学名
    (4-Methoxyphenyl)morpholinylphosphinodithioic acid, morpholine salt
  • 分子式・分子量
    C15H25N2O3PS2=376.47
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
10 mg ¥7,600 345-91811
  • 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所
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  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所 日本語
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所 English
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所
  • プロトコル 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所

技術情報

注意事項

・本製品を粉末の状態で取り出し使用する場合、性状の性質上、静電気等の要因で容器内に付着し、取り出しにくい場合があります。
・容器内に付着し、取り出せなかった粉末に関しては、使用する溶媒を容器に入れ、溶かし出して使用してください。

参考文献

参考文献を表示する

1) L. Li, M. Whiteman, Y. Y. Guan, K. L. Neo, Y. Cheng, S. W. Lee, Y. Zhao, R. Baskar, C-H. Tan, and P. K. Moore, “Characterization of a Novel, Water-Soluble Hydrogen Sulfide-Releasing Molecule (GYY4137): New Insights Into the Biology of Hydrogen Sulfide”, Circulation2008117, 2351.
2) M. Whiteman, L. Li, P. Rose, C-H. Tan, D. B. Parkinson, and P. K. Moore, “The Effect of Hydrogen Sulfide Donors of Lipopolysaccharide-Induced Formation of Inflammatory Mediators in Macrophages”, Antioxid. Redox Signal.201319, 1749.
3) Z. W. Lee, J. Zhou, C-S. Chen, Y. Zhao, C-H. Tan, L. Li, P. K. Moore, and L-W. Deng, “The Slow-Releasing Hydrogen Sulfide Donor, GYY4137, Exhibits Novel Anti-Cancer Effects In Vitro and In Vivo”, PLos One20116, e21077.
4) L. Li, B. Fox, J. Keeble, M. Salto-Tellez, P. G. Winyard, M. E. Wood, P. K. Moore, and M. Whiteman, “The complex effects of the slow-releasing hydrogen sulfide donor GYY4137 in a model of acute joint inflammation and in human cartilage cells”, J. Cell. Mol. Med.201317, 365.
5) Z. Liu, Y. Han, L. Li, G. Meng, X. Li, M. Shirhan, M. T. Peh, L. Xie, S. Zhou, X. Wang, Q. Chen, W. Dai, C-H. Tan, S. Pan, P. K. Moore and Y. Ji, “The hydrogen sulfide donor, GYY4137, exhibits anti-atherosclerotic activity in high fat fed apolipoprotein E-/- mice”, Br. J. Pharmacology2013169, 1795.
6) Satoru Sakuma, Saaya Minamino, MayaTakase, Yoshitaka Ishiyama, Hiroyuki Hosokura, Tetsuya Kohda, Yukino Ikeda, Yohko Fujimoto, "Hydrogen sulfide donor GYY4137 suppresses proliferation of human colorectal cancer Caco-2 cells by inducing both cell cycle arrest and cell death", Heliyon., 2019,doi.org/10.1016/j.heliyon.2019.e02244 .

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~微黄色粉末である。
純度(HPLC): 95.0% 以上
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.安衛法,特定化学物質,化審法, 2.保存方法:冷蔵
PRTR法 第1種指定化学物質
危険・有害
シンボルマーク
生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所
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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- GYY4137 同仁化学研究所

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TPEN 同仁化学研究所

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04 細胞内蛍光プローブ
14 キレート試薬

TPEN

TPEN 同仁化学研究所

  • 細胞内蛍光プローブ
  • キレート試薬

  • 製品コード
    T040  TPEN
  • CAS番号
    16858-02-9
  • 化学名
    N,N,N’,N’-Tetrakis(2-pyridylmethyl)ethylenediamine
  • 分子式・分子量
    C26H28N6=424.54
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 mg ¥21,600 340-05411
  • TPEN 同仁化学研究所
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  • プロトコル TPEN 同仁化学研究所 蛍光で細胞内 Ca を測定したい
    TPEN 同仁化学研究所

技術情報

溶解例

100 mg/10 mL(ジメチルスルホキシド)、50 mg/80 mL(酢酸)

参考文献

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1) G. Anderegg and F. Wenk, "Pyridinderivate Als Komplexbildner VIII Die Herstellung Je Eines Neuen Vier- und Sechszahnigen Liganden", Helv. Chim. Acta, 1967, 50, 2330.
2) G. Anderegg, E. Hubmann, N. G. Podder and F. Wenk, "Pyridinderivate als Komplexbildner. XI). Die Thermodynamik der Metallkomplexbildung mit Bis-, Tris- und Tetrakis[(2-pyridyl)methyl]-aminen", Helv. Chim. Acta, 1977, 60, 123.
3) P. Arslan, F. Di Virgilio, M. Beltrame, R. Y. Tsien and T. Pozzan, "Cytosolic Ca2+ Homeostasis in Ehrlich and Yoshida Carcinomas A, New Membrane-Permeant Chelator of Heavy Metals Reveals That These Ascites Tumor Cell Lines Have Normal Cytosolic Free Ca2+", J. Biol. Chem., 1985, 260, 2719.
4) T. Tatsumi and H. Fliss, "Hypochlorous Acid Mobilizes Intracellular Zinc in Isolated Rat Heart Myocytes", J. Mol. Cell. Cardiol., 1994, 26(4), 471.
5) I. Sakabe, S. Paul, W. Dansithong and T. Shinozawa, "Induction of Apoptosis in Neuro-2A Cells by Zn2+ Chelating", Cell Struct. Funct., 1998, 23(2), 95.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~微黄色結晶性粉末でジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(滴定): 98.0% 以上
ジメチルスルホキシド溶状: 試験適合
融点: 110~115℃
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
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TPEN 同仁化学研究所

関連製品

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所

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生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所SulfoBiotics– Sodium Polysulfide Set

02 酸化ストレス関連試薬

SulfoBiotics– Sodium Polysulfide Set

  • 酸化ストレス関連試薬

生体硫黄解析用試薬

  • 製品コード
    SB13  –SulfoBiotics– Sodium Polysulfide Set
  • CAS番号
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥12,800 348-91801
セット内容
Sodium disulfide (Na2S2) 100 mg x1  
Sodium trisulfide (Na2S3) 100 mg x1  
Sodium tetrasulfide (Na2S4) 100 mg x1  
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  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所 日本語
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所 English
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所
  • プロトコル 生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所 サルフェン硫黄を系の中に加えたい
    生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所

技術情報

生体内に存在するサルフェン硫黄含有分子種

生体硫黄解析用試薬 -SulfoBiotics- Sodium Polysulfide Set 同仁化学研究所

※生体内のサルフェン硫黄含有分子種は、酸化還元および転移によって変化する

参考文献

参考文献を表示する

1) Y. Kimura, Y. Mikami, K. Osumi, M. Tsugane, J. Oka, and H. Kimura, "Polysulfides are possible H2S-derived signaling molecules in rat brain", FASEB J., 2013, 27, 2451.
2) S. Koike, Y. Ogasawara, N. Shibuya, H. Kimura, and K. Ishii, "Polysulfide exerts a protective effect against cytotoxicity caused by t-buthylhydroperoxide through Nrf2 signaling in neuroblastoma cells", FEBS Lett., 2013, 587, 3548
3) E. R. DeLeon, Y. Gao, E. Huang, M. Arif, N. Arora, A. Divietro, S. Patel, and K. R. Olson , "A case of mistaken identity: are reactive oxygen species actually reactive sulfide species?", American Journal of Physiology: Regulatory, Integrative and Comparative Physiology ., 2015, 310, (7), 549.
4) D. Delgermuruna, S. Yamaguchia, O. Ichiib, Y. Konb, S. Itoa, and K. Otsuguroa, "Hydrogen sulfide activates TRPA1 and releases 5-HT from epithelioid cells of the chicken thoracic aorta", Comparative Biochemistry and Physiology Part C: Toxicology & Pharmacology., 2016, 187, 43 .
5) S. Koikea, T. Kayamaa, S. Yamamotoa, D. Kominea, R. Tanakaa, S. Nishimotoa, T. Suzukia, A. Kishidab, and Y. Ogasawaraa, "Polysulfides protect SH-SY5Y cells from methylglyoxal-induced toxicity by suppressing protein carbonylation: A possible physiological scavenger for carbonyl stress in the brain", NeuroToxicology., 2016, 55, 13 .

取扱条件

規格
Sodium disulfide (Na2S2): 試験適合
Sodium trisulfide (Na2S3): 試験適合
Sodium tetrasulfide (Na2S4): 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光, 2.吸湿注意
危険・有害
シンボルマーク
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05 細胞染色用色素

Cellstain®– Double Staining Kit

細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

細胞二重染色キット

  • 製品コード
    CS01  –Cellstain®– Double Staining Kit
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 set ¥39,400 341-07381
キット内容
1 set ・A液:Calcein-AM Stock Solution (1 mmol/l)
 Calcein-AM in DMSO
・B液:PI Stock Solution (1.5 mmol/l)
 PI in H2O
50 μl×4 vials

300 μl×1 vial

  • 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所
試験成績書

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マニュアル

  • 取扱説明書 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所 日本語
    細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所 English
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  • パンフレット 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
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  • プロトコル 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所 生細胞・死細胞を染め分けたい
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技術情報

染色溶液の調製

 A液及びB液を室温に戻す。
 5 mLのPBS(-)溶液にA液10 μL液15 μLを入れる。これを染色溶液とする。このとき、Calcein-AMは2 μmol/L、PIは4 μmol/Lの濃度となる。

参考文献

参考文献を表示する

1) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994, 172, 115.
2) E. S. Kaneshiro, M. A. Wyder, Y.-P. Wu and M. T. Cushion, "Reliability of Calcein Acetoxy Methyl Ester and Ethidium Homodimer or Propidium Iodide for Viability Assessment of Microbes", J. Microbiol. Methods, 1993, 17 (1), 1.
3) N. G. Papadopoulos, G. V. Z. Dedoussis, G. Spanakos, A. D. Gritzapis, C. N. Baxevanis and M. Papamichail, "An Improved Fluorescence Assay for the Determination of Lymphocyte-Mediated Cytotoxicity Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 1994, 177, 101.

よくある質問

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所 細胞二重染色キット -Cellstain®- Double Staining Kit 同仁化学研究所

取扱条件

取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍,遮光
危険・有害
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所Cellstain®– Calcein-AM

05 細胞染色用色素

Cellstain®– Calcein-AM

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

生細胞染色用色素

  • 製品コード
    C326  –Cellstain®– Calcein-AM
  • CAS番号
    148504-34-1
  • 化学名
    3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester
  • 分子式・分子量
    C46H46N2O23=994.86
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 mg ¥14,400 349-07201
  • 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所
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マニュアル

  • プロトコル 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所 細胞を染色したい
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所
  • パンフレット 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

1) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, "A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 198686, 7. 
2) S. J. Morris, "Real-time Multi-wavelength Fluorescence Imaging of Living Cells", BioTechniques, 19908(3), 296. 
3) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990133, 87. 
4) D. M. Callewaert, G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre and D. Poulik, "Characterization of Effector-Target Conjugates for Cloned Human Natural Killer and Human Lymphokine Activated Killer Cells by Flow Cytometry", Cytometry, 199112, 666. 
5) Han-Qing Xie, R. Huang and V. W. Hu, "Intercellular Communication Through Gap Junctions Is Reduced in Senescent Cell", Biophys. J. , 199262, 45. 
6) S. A. Weston and C. R. Parish, "Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes", Cytometry, 199213, 739. 
7) X. M. Wang, P. I. Terasaki, G. W. Rankin Jr. , D. Chia, H. P. Zhong and S. Hardy, "A New Microcellular Cytotoxicity Test Based on Calcein AM Release", Hum. Immunol.199337, 264. 
8) N. G. Papadopoulos, G. V. Dedoussis, G. Spanakos, A. D. Gritzapis, C. N. Baxevanis and M. Papamichail, "An Improved Fluorescence Assay for the Determination of Lymphocyte-Mediated Cytotoxicity Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 1994177, 101. 
9) L. S. De Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994172, 115. 
10) H. Ohata, Y. Ujiki and K. Momose, "Confocal Imaging Analysis of ATP-Induced Ca2+ Response in Individual Endothelial Cells of the Artery in Situ", Am. J. Physiol. , 1997272(6), 1980.

よくある質問

Q

51Cr-release法との相関はありますか?

A

Calcein-AMと51Cr-release法に相関性はあります。

下記文献にその報告があります。
N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q

細胞染色試薬Cellstainの生細胞染色色素の中で細胞内に長く留まるのはどれですか?

A

細胞内の保持という意味ではやはり「CFSE」が一番細胞の中に長くとどまることが出来ます。
蛍光強度は落ちますが、8週間細胞の中に蛍光色素があったのが確認されております。
「Calcein-AM」「BCECF-AM」で3日間蛍光が観察されております。
「Calcein-AM」は6時間で90%細胞内に保持されているとの報告もございます。
・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)
・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)

ただ、細胞障害活性ということでは「Calcein-AM」「BCECF-AM」の方が影響を及ぼさない
といわれております。
・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

あと注意点としては、元々の基本骨格がFluoresceinなので、励起光による退光が
起りやすいので長時間の励起による蛍光観察は難しいかもしれません。
(退光防止剤などを使用すれば幾分よいかもしれませんが)

Q

Calcein-AMの使用方法を教えてください。

A

下記に一例としてHeLa細胞の場合を紹介します。
細胞の種類、観察条件に応じて試薬濃度の検討や固定を行って下さい。

【試薬】
A液:Calcein-AM 1mg をDMSO 1mlに溶解する→1 mmol/L溶液
  *溶液の保存は劣化を抑えるため、遮光下-20 ℃で行ってください。
B液:A液をPBS(-)で500倍に希釈する(A液10μlをPBS 5 mLで希釈すると2 μmol/Lとなる)
  *Calcein-AMは水溶液中で分解するので、B液は用時調製を行ってください。

【操作】
1)HeLa細胞をトリプシン-EDTAなどで回収し、細胞の懸濁液を準備する。
2)細胞懸濁液を遠心分離する(1,000 rpm,3 min)
3)上清を除き、PBS(-)を添加する(このとき細胞数が105~106 cells/mLになるように調製する)
4)ピペッティングなどで十分分散させる。
 *培養液中の血清などはバックグランドを上昇させる恐れがあるので、2)~4)の操作を
  繰り返し行い、十分に洗浄する。
5)1.5mlマイクロチューブに4)で得た細胞懸濁液30μlを添加する。
6)これに[B液]を15 μL添加する。
7)マイクロチューブに蓋をして、37 ℃で15分間インキュベートする。
8)カバーガラス上に7)の液10 μLをのせ、上からカバーガラスを重ね、染色した細胞懸濁液を挟み込む
9)このカバーガラスを蛍光顕微鏡に置き、490 nmのフィルターで励起させ、黄緑色の蛍光を発する生細胞を観察する。
 (フィルターについては490±10 nmのものであれば良好に観察することができる)

*血清やフェノールレッドはバックグラウンドとなるので除いておくこと。
*バックグランドが高い場合には、洗浄を行ってください。
*スライドガラス上に培養した細胞も同様に染色・観察が可能です。
*PIとの二重染色方法は、プロトコル「生細胞・死細胞を染め分けたい」をご覧下さい。

Q

Calcein-AM(粉末)を購入し、溶液にしたいのですがどうすればよいですか?

A

DMSOに溶解してください。
分子量がほぼ1000ですので、1 mgを1 mLのDMSOに溶解していただくと1 mMの溶液になります。
DMSOはなるべく乾燥したものをご使用下さい。

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取扱条件

規格
性状: 本品は、無色~微黄色固体でジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。
ジメチルスルホキシド溶状: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍,遮光
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05 細胞染色用色素

Cellstain®– CFSE

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

生細胞染色用色素

  • 製品コード
    C375  –Cellstain®– CFSE
  • CAS番号
    150347-59-4
  • 化学名
    5- or 6-(N-Succinimidyloxycarbonyl)fluorescein 3′,6′-diacetate
  • 分子式・分子量
    C29H19NO11=557.46
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
1 mg ¥5,600 341-07401
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マニュアル

  • プロトコル 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所 細胞を染色したい
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  • パンフレット 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所 細胞増殖測定細胞染色プロトコル
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参考文献

参考文献を表示する

1) M. Bronner-Fraser, "Alterations in Neural Crest Migration by a Monoclonal Antibody That Affects Cell Adhesion", J. Cell Biol.1985101, 610. 
2) A. Nose and M. Takeichi, "A Novel Cadherin Cell Adhesion Molecule:Its Expression Patterns Associated WithImplantation and Organogenesis of Mouse Embryos", J. Cell Biol.1986, 103, 2649. 
3) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990133, 87. 
4) C. K. Raymond, P. J. O'hara, G. Eichinger, J. H. Rothman and T. H. Stevens, "Molecular Analysis of the Yeast VPS3 Gene and the Role of Its Product in Vacuolar Protein Sorting and Vacuolar Segregation during the Cell Cycle", J. Cell Biol.1990111, 877. 
5) G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre, M. D. Poulik and D. M. Callewaert, "Quantification of Effector/Target Conjugation Involving Natural Killer(NK) or Lymphokine Activated Killer(LAK) Cells by Two-color Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 1991139, 281. 
6) S. A. Weston and C. R. Parish, "Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes", Cytometry, 199213, 739. 
7) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994172, 115.

よくある質問

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q

細胞染色試薬Cellstainの生細胞染色色素の中で細胞内に長く留まるのはどれですか?

A

細胞内の保持という意味ではやはり「CFSE」が一番細胞の中に長くとどまることが出来ます。
蛍光強度は落ちますが、8週間細胞の中に蛍光色素があったのが確認されております。
「Calcein-AM」「BCECF-AM」で3日間蛍光が観察されております。
「Calcein-AM」は6時間で90%細胞内に保持されているとの報告もございます。
・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)
・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)

ただ、細胞障害活性ということでは「Calcein-AM」「BCECF-AM」の方が影響を及ぼさない
といわれております。
・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

あと注意点としては、元々の基本骨格がFluoresceinなので、励起光による退光が
起りやすいので長時間の励起による蛍光観察は難しいかもしれません。
(退光防止剤などを使用すれば幾分よいかもしれませんが)

Q

CFSEの使用方法を教えて下さい。

A

参考例として紹介します。

文献[1]中の記述を、以下に示します。
 生後7-10週のCBA/Hマウスを殺し、脾臓(または、目的とする他臓器)を切除し、F15培地(1%FCS)に浸す。
その後、金属製の網を通して細胞懸濁液を得、遠心分離によって赤血球や死細胞等を除去する。
 その精製リンパ球をpH 7.0のPBSに懸濁し、50,000,000 cells/mLとする。
5.0μM濃度のCFSEを加え、37℃で15分間標識する。氷冷したF15培地(1% FCS)に懸濁させて遠心機にかけ
(350g、5分、20℃)ることで、2回洗浄する。F15培地に懸濁する。
 CBA/Hマウスに、静脈注射する。一定時間後、マウスを殺し脾臓(または、目的とする他臓器)を
切除してリンパ球を単離し、flow cytometryで解析する。

文献[2]は、Calcein-AMに関するものですが、[1]と同様の手技によって、CFSEとの比較も行っています。

【参考文献】
1. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, J. Immunol. Methods, 133, 87 (1990). 
2. Susan A. Weston, Christopher R. Parish, Cytometry, 13, 739 (1992).

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CFSE 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、無色~微黄色固体でジメチルスルホキシド及びアセトニトリルに溶ける。
ジメチルスルホキシド溶状: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所Cellstain®– Calcein-AM solution

05 細胞染色用色素

Cellstain®– Calcein-AM solution

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

生細胞染色用色素

  • 製品コード
    C396  –Cellstain®– Calcein-AM solution
  • CAS番号
    148504-34-1(Calcein-AM)
  • 化学名
    3′,6′-Di(O-acetyl)-4′,5′-bis[N,N-bis(carboxymethyl)aminomethyl]fluorescein, tetraacetoxymethyl ester, DMSO solution
  • 分子式・分子量
    C46H46N2O23=994.86
容 量 メーカー希望
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和光純薬
1 ml ¥17,400 341-07901
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  • プロトコル 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所 細胞を染色したい
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所
  • パンフレット 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

参考文献

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1) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, "A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 198686, 7. 
2) S. J. Morris, "Real-time Multi-wavelength Fluorescence Imaging of Living Cells", BioTechniques, 19908(3), 296. 
3) S. A. Weston and C. R. Parish, "New Fluorescent Dyes for Lymphocyte Migration Studies Analysis by Flow Cytometry and Fluorescent Microscopy", J. Immunol. Methods, 1990133, 87. 
4) D. M. Callewaert, G. Radcliff, R. Waite, J. Lefevre and D. Poulik, "Characterization of Effector-Target Conjugates for Cloned Human Natural Killer and Human Lymphokine Activated Killer Cells by Flow Cytometry", Cytometry, 199112, 666. 
5) Han-Qing Xie, R. Huang and V. W. Hu, "Intercellular Communication Through Gap Junctions Is Reduced in Senescent Cell", Biophys. J. , 199262, 45. 
6) S. A. Weston and C. R. Parish, "Calcein: a Novel Marker for Lymphocytes Which Enter Lymph Nodes", Cytometry, 199213, 739. 
7) X. M. Wang, P. I. Terasaki, G. W. Rankin Jr. , D. Chia, H. Pi. Zhong and S. Hardy, "A New Microcellular Cytotoxicity Test Based on Calcein AM Release", Hum. Immunol.199337, 264. 
8) N. G. Papadopoulos, G. V. Z. Dedoussis, G. Spanakos, A. D. Gritzapis, C. N. Baxevanis and M. Papamichail, "An Improved Fluorescence Assay for the Determination of Lymphocyte-Mediated Cytotoxicity Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 1994177, 101. 
9) L. S. D. Clerck, C. H. Bridts, A. M. Mertens, M. M. Moens and W. J. Stevens, "Use of Fluorescent Dyes in the Determination of Adherence of Human Leucocytes to Endothelial Cells and the Effects of Fluorochromes on Cellular Function", J. Immunol. Methods, 1994172, 115. 
10) H. Ohata, Y. Ujiki and K. Momose, "Confocal Imaging Analysis of ATP-Induced Ca2+ Response in Individual Endothelial Cells of the Artery in Situ", Am. J. Physiol. , 1997272(6), 1980.

よくある質問

Q

51Cr-release法との相関はありますか?

A

下記文献にCalcein-AMと51Cr-release法との相関のデータが記載されております。

N.G.Papadopoulos, et.al., J.Immunol.Methods, 177,101-111(1994)

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q

細胞染色試薬Cellstainの生細胞染色色素の中で細胞内に長く留まるのはどれですか?

A

細胞内の保持という意味ではやはり「CFSE」が一番細胞の中に長くとどまることが出来ます。
蛍光強度は落ちますが、8週間細胞の中に蛍光色素があったのが確認されております。
「Calcein-AM」「BCECF-AM」で3日間蛍光が観察されております。
「Calcein-AM」は6時間で90%細胞内に保持されているとの報告もございます。
・S.A.Weston, et.al., J.Immunol.Methods, 133, 87-97(1990)
・H.P.Zhong, et.al., Hum.Immunol., 37, 264-270(1993)

ただ、細胞障害活性ということでは「Calcein-AM」「BCECF-AM」の方が影響を及ぼさない
といわれております。
・L.S.D.Clerck, et.al., J.Immunol.Methods, 172, 115-124(1994)

あと注意点としては、元々の基本骨格がFluoresceinなので、励起光による退光が
起りやすいので長時間の励起による蛍光観察は難しいかもしれません。
(退光防止剤などを使用すれば幾分よいかもしれませんが)

Q

Calcein-AMの使用方法を教えてください。

A

下記に一例としてHeLa細胞の場合を紹介します。
細胞の種類、観察条件に応じて試薬濃度の検討や固定を行って下さい。

【試薬】

A液:-Cellstain®– Calcein-AM solution (1 mmol/L[1 mg/mL]溶液)

B液:A液をPBS(-)で500倍に希釈する(A液10 μLをPBS 5 mLで希釈すると2 μmol/Lとなる)

  *Calcein-AMは水溶液中で分解するので、B液は用時調製を行ってください。

【操作】

1)HeLa細胞をトリプシン-EDTAなどで回収し、細胞の懸濁液を準備する。

2)細胞懸濁液を遠心分離する(1,000 rpm,3 min)

3)上清を除き、PBS (-) を添加する(このとき細胞数が105~106 cells/mLになるように調製する)

4)ピペッティングなどで十分分散させる。

 *培養液中の血清などはバックグランドを上昇させる恐れがあるので、2)~4)の操作を

  繰り返し行い、十分に洗浄する。

5)1.5 mLマイクロチューブに4)で得た細胞懸濁液30 μLを添加する。

6)これに[B液]を15 μL添加する。

7)マイクロチューブに蓋をして、37℃で15分間インキュベートする。

8)カバーガラス上に7)の液10 μLをのせ、上からカバーガラスを重ね、染色した細胞懸濁液を挟み込む

9)このカバーガラスを蛍光顕微鏡に置き、490 nmのフィルターで励起させ、黄緑色の蛍光を発する生細胞を観察する。

 (フィルターについては490±10 nmのものであれば良好に観察することができる)

*血清やフェノールレッドはバックグラウンドとなるので除いておくこと。

*バックグランドが高い場合には、洗浄を行ってください。

*スライドガラス上に培養した細胞も同様に染色・観察が可能です。

*PIとの二重染色方法は、プロトコル「生細胞・死細胞を染め分けたい」をご覧下さい。

生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所 生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、無色液体である。
含量: 試験適合
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍,遮光
危険・有害
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- Calcein-AM solution 同仁化学研究所

関連製品

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所

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生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所Cellstain®– CytoRed solution

05 細胞染色用色素

Cellstain®– CytoRed solution

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

生細胞染色用色素

  • 製品コード
    C410  –Cellstain®– CytoRed solution
  • 化学名
    7-Isobutyloxycarbonyloxy-3H-phenoxaziN-3-one, DMSO solution
容 量 メーカー希望
小売価格
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和光純薬
1 ml ¥14,600 342-08531
  • 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所
試験成績書

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マニュアル

  • プロトコル 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所 細胞染色したい
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所
  • パンフレット 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所

参考文献

参考文献を表示する

参考文献

1) M. Ishiyama, H. Furusawa, M. Shiga, F. Ohseto and K. Sasamoto, "A Resorufin Derivative as a Fluorogenic Indicator for Cell Viability", Anal. Sci., 199915, 1025.

よくある質問

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488nm励起で観察されることもあります

Q

CytoRed の使用方法を教えてください。

A

一例としてご紹介します。

《染色例》
下記にHeLa細胞を用いた例を示す。
(細胞の種類、観察条件、固定の有無によって試薬濃度染色条件の検討が必要ですのでご注意下さい。)

[試薬]
 ・CytoRed solution
(CytoRed solutionは冷凍で保存する。凍結融解のくり返しは出来るだけ避けた方がよいため、
 小分けして保存しておくことが望ましい。)

[染色]
1.チャンバースライドに適当な細胞密度になるように細胞を培養する。
                     (5×10^4~5×10^5 cells/ml)
2.培地を除き、軽く洗浄する。
                (培地、PBS、Hank’s溶液等)
3.CytoRed solution (1 mmol/L)を、培地を用いて最終濃度が10 μmol/Lになるように希釈する。
4.ウェルに希釈したCytoRed溶液を加え、培養条件下で30分~1時間インキュベートする。
5.CytoRed溶液を除き、軽く洗浄する。
                (PBS、Hank’s溶液等)
6.蛍光顕微鏡G励起下で観察する。(B励起も可, CytoRed; λem/λex=590/ 535 nm)

 

【参考文献】

M.Ishiyama, et.al., Anal. Sci., 15, 1025-1028(1999).

生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所 生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状:
含量:
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍,遮光
危険・有害
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- CytoRed solution 同仁化学研究所
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関連製品

生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

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生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所Cellstain®– FDA

05 細胞染色用色素

Cellstain®– FDA

生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

生細胞染色用色素

  • 製品コード
    F209  –Cellstain®– FDA
  • CAS番号
    596-09-8
  • 化学名
    Fluorescein diacetate
  • 分子式・分子量
    C24H16O7=416.38
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 mg ¥6,000 348-07411

【注意】本品は、通常、チューブ底面にフィルム状に付着した状態となっております。
稀に、輸送中の振動等により本品がチューブ底面から外れ、チューブ壁面やキャップ裏に付着している場合がございます。
内容物を下に落としてから開封をしてご使用ください。
ご不明な点がございましたら、小社カスタマーリレーション部までお問合せください。(Free Dial:0120-489-548)

  • 生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所
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マニュアル

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    生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所
  • パンフレット 生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所 細胞増殖測定 細胞染色プロトコル
    生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

技術情報

溶解例

1 mg/0.5 mL(ジメチルスルホキシド)

参考文献

参考文献を表示する

1) B. Rotman and B. W. Papermaster, "Membrane Properties of Living Mammalian Cells as Studied by Enzymatic Hydrolysis of Fluorogenic Esters", Proc. Natl. Acad. Sci. USA196655134.
2) H. R. Hulett, W. A. Bonner, J. Barrett and L. A. Herzenberg, "Cell Sorting: Automated Separation of Mammalian Cells as a Function of Intercellular Fluorescence", Science1969166747.
3) K. H. Jones and J. A. Senft, "An Improved Method to Determine Cell Viability by Simultaneous Staining with Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide", J. Histochem. Cytochem.198533, 77. 
4) K. McGinnes, G. Chapman, R. Marks and R. Penny, "A Fluorescence NK Assay Using Flow Cytometry", J. Immunol. Methods, 198686, 7. 
5) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, "Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt's Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model", Cancer Res.198949, 3783. 
6) E. Prosperi, "Intracellular Turnover of Fluorescein Diacetate. Influence of Membrane Ionic Gradients on Fluorescein Efflux", Histochem. J.199022, 227.

よくある質問

Q

細胞染色色素の励起と蛍光の波長を教えて下さい。

A

生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

*AOはフローサイトメトリーなどでは488 nm励起で観察されることもあります

Q

FDAの使用方法を教えてください。

A

下記に一例を示します。細胞の種類、観察条件により細胞の固定や試薬濃度を検討してください。
【例1】HeLa細胞の形態観察

FDA 1 mgをDMSO 2 mLに溶解する(ストック溶液)

PBS(-)溶液にて希釈し、2 μmol/Lとする。(ストック溶液8μlをPBS(-)5 mLで希釈する)

1)HaLa細胞をトリプシン-EDTA などで回収し、細胞の懸濁液を準備する。

2)細胞懸濁液を遠心分離する(1000 rpm,3 min)

3)上清を除き、PBS(-)を添加する(この時、細胞数が105~106 cells/mLになるようにする)

4)ピペッティングなどで十分分散させる。

 *培養液中の血清などはバックグランドを上昇させる恐れがあるので②~④の操作を繰り返し行い十分に洗浄する。

5)1.5 mLマイクロチューブに4)で得た細胞懸濁液30 μL添加する。

6)これにFDA溶液を15 μL添加する。

7)マイクロチューブに蓋をして37℃で15 minインキュベートする。

8)カバーガラス上に7)の溶液10 μLをのせ、上からもう一枚カバーガラスを重ね、染色した細胞懸濁液を挟み込む。

9)このカバーグラスを蛍光顕微鏡に置き、490 nmのフィルターで励起させ、黄緑色の蛍光を発する生細胞を観察する。

【例2】C57BL/6マウスから摘出した脾臓細胞をFDAとPIを使用しての2重染色

・K.H.Jones, J.A.Senft, J.Histochem.Cytochem., 33, 77 (1985).より

 FDA 5 mgをアセトン 1 mLに溶解させる(ストック溶液)

 上記溶液 0.04 mLをPBS(-)10 mLに希釈する。

 PIは1 mgをPBS(-)50 mLに溶解する。

0.2 mLのD-PBS溶液に懸濁した細胞(2×106 cells/mL)溶液に0.1 mLのFDA溶液、0.03 mLのPI溶液を添加。

インキュベート後、観察。

【例3】HeLa細胞を用いた細胞膜イオン勾配のFluoresceinの溶出への影響

・E.Prosperi, Histochem. J., 22, 227 (1990). より

 FDA 5 mgをアセトン 1 mLに溶解させる(ストック溶液)

 PBS(-)にて、終濃度2.4 μmol/L にて染色。

生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所 生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色結晶性粉末又は固体でジメチルスルホキシドに溶ける。
ジメチルスルホキシド溶状: 試験適合
NMRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷凍,遮光
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生細胞染色用色素 -Cellstain®- FDA 同仁化学研究所

関連製品

ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

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ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所MitoBright LT Green

05 細胞染色用色素

MitoBright LT Green

ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

ミトコンドリア染色用色素 Green

  • 長時間 細胞に滞留する
  • 血清培地中で染色できる
  • 蛍光顕微鏡・フローサイトメーターに対応
  • 製品コード
    MT10  MitoBright LT Green
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 μl ¥6,000 340-92064
400 μl ¥12,000 346-92061
400 μl x 3 ¥30,000 342-92063
  • ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所
試験成績書

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マニュアル

  • 取扱説明書 ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所 日本語
    ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所
  • 取扱説明書 ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所 English
    ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

技術情報

大変ご好評頂いております!使用論文も多数!

小社のミトコンドリア染色試薬MitoBright LTシリーズは、世界的に広くご愛顧いただき多くの論文に掲載されています。下記に一部の論文を紹介致します。特に赤文字で示した論文では、MitoBright LTシリーズが染色後、長期間(最大5日間まで)にて観察された事例です。その他、様々な細胞種のミトコンドリア染色事例も報告されています。

製品名 サンプル 染色後の
観察時間
測定機器 ジャーナル(リンク)
MitoBright LT Green 細胞 (U251) すぐ 蛍光顕微鏡 Pharmaceuticals
MitoBright LT Green 酵母 (Lipomyces starkeyi) すぐ 蛍光顕微鏡 Genes to Cells
MitoBright LT Green 細胞 (HeLa) すぐ プレートリーダー Biomaterials
MitoBright LT Green 細胞 (Naive CD4+ T cells) すぐ 蛍光顕微鏡 Cell Reports
MitoBright LT Green 細胞 (CT26) すぐ フローサイトメーター Journal of Radiation Research
MitoBright LT Green 細胞 (C2C12) 5日間 蛍光顕微鏡 Polymers
MitoBright LT Green 細胞 (BMM) 36時間 or 3日間  蛍光顕微鏡/
フローサイトメーター
JCI Insights
MitoBright LT Green 細胞 (mouse erythrocytes) すぐ 蛍光顕微鏡 Front. Cell. Infect. Microbiol.
MitoBright LT Red 細胞 (SH-SY5Y) すぐ 蛍光顕微鏡 Free Radical Biol. Med.
MitoBright LT Red 細胞 (MRC-5) すぐ 蛍光顕微鏡 The FEBS Journal
MitoBright LT Red 細胞 (A11 cells/ P29 cells) 3日間 蛍光顕微鏡 BMC Mol. Cell Biol.
MitoBright LT Deep Red 細胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7; HCT-116 ) すぐ 蛍光顕微鏡 Small
MitoBright LT Deep Red 細胞 (HT-1080; MCF-10A; MCF-7 ) 8時間 蛍光顕微鏡 Advanced Therapeutics
MitoBright LT Deep Red 細胞 (4T1) 24時間 蛍光顕微鏡 Advanced Functional Materials
MitoBright LT Deep Red 細胞 (SW982) すぐ 蛍光顕微鏡 Gene

参考文献

参考文献を表示する

 
文献No. 対象サンプル 装置 引用(リンク)
1 細胞 (U251) 蛍光顕微鏡 Y, Shinoda, K. Kujirai, K. Aoki, M. Morita, M. Masuda, L. Zhang, Z. Kaixin, A. Nomoto, T. Takahashi, Y. Tsuneoka, J. Akimoto, H. Kataoka, R. Rachi, A. Narumi, T. Yoshimura, S. Yano and Y. Fujiwara, ”Novel Photosensitizer β-Mannose-Conjugated Chlorin e6 as a Potent Anticancer Agent for Human Glioblastoma U251 Cells.", Pharmaceuticals., 2020, 13(10), 316.
2 酵母 (Lipomyces starkeyi) 蛍光顕微鏡 L. Duan and K. Okamoto, "Mitochondrial dynamics and degradation in the oleaginous yeast Lipomyces starkeyi", Genes Cells., 2021, 10.1111/gtc.12875 .
3 細胞 (HeLa) Plate Reader W. Islam, Y. Matsumoto, J. Fang, A. Harada, T. Niidome, K. Ono, H. Tsutsuki, T. Sawa, T. Imamura, K. Sakurai, N. Fukumitsu, H. Yamamoto, H. Maeda., "Polymer-conjugated glucosamine complexed with boric acid shows tumor-selective accumulation and simultaneous inhibition of glycolysis ", Biomaterials., 2021, 269, (-), 120631.
4 細胞 (Naive CD4+ T cells) 蛍光顕微鏡 T. Kanno, T. Nakajima, Y. Kawashima, S. Yokoyama, H. K. Asou, S. Sasamoto, K. Hayashizaki, Y. Kinjo, O. Ohara, T. Nakayama and Y. Endo, "Acsbg1-dependent mitochondrial fitness is a metabolic checkpoint for tissue Treg cell homeostasis", 2021, doi:10.1016/j.celrep.2021.109921.
5 細胞 (CT26) Flow Cytometer L. Sun, K. Morikawa, Y. Sogo and Y. Suiura, "MHY1485 enhances X-irradiation-induced apoptosis and senescence in tumor cells", 2021, doi:10.1093/jrr/rrab057.
6 細胞 (C2C12) 蛍光顕微鏡 C. Lin, P. Wu, K. Liu, Y. Fan and J. Yu, "An Environmental Friendly Tapioca Starch-Alginate Cultured Scaffold as Biomimetic Muscle Tissue", 2021, doi:10.3390/polym13172882.
7 細胞 (BMM) 蛍光顕微鏡/
Flow Cytometer
W. Ling, K. Krager, K. K. Richardson, A. D. Warren, F. Ponte, N. Aykin-Burns, S. C. Manolagas, M. Almeida and H. Kim, "Mitochondrial Sirt3 contributes to the bone loss caused by aging or estrogen deficiency", 2021, doi:10.1172/jci.insight.146728.
8 細胞 (mouse erythrocytes) 蛍光顕微鏡 M. Niikura, T. Fukutomi, J. Mitobe and F. Kobayashi, "Roles and Cellular Localization of GBP2 and NAB2 During the Blood Stage of Malaria Parasites", 2021, doi:10.3389/fcimb.2021.737457.

 

 

よくある質問

Q

MitoBright LT は DMSO溶液ですが、凍結融解を繰り返しても劣化しないのでしょうか?

A

小社では凍結融解を30回繰り返した溶液を用いて、染色が可能であったことを確認しております。

Q

MitoBright LTとMitoBrightの違いを教えてください。

A

MitoBright LTはMitoBrightの細胞内滞留性を高めた製品です。また、MitoBright LTはDMSOに溶解した製品であり、染色溶液を調製する手間がなくすぐにお使い頂けます。その他の性能の違いは下記表をご参照ください。

ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

Q

MitoBright LTシリーズで染色した後に脱分極すると、染色度合いに影響はありますか?

A

脱分極条件や細胞種などにより影響は確認されます。また、MitoBright LTの各色素で影響の度合は異なります。
参考として小社ではHeLa細胞を各MitoBright LTで染色し、下記条件にて脱分極処理を行って蛍光染色の変化を観察しました。 

ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

<染色条件>
HeLa細胞をMitoBright LT (100 μmol/l、30分インキュベーション)にて染色しHBSSにて洗浄後
FCCP処理(100μmol/l 、60分インキュベーション)しHBSSにて2回洗浄後観察した。

 

    <検出条件>
     MitoBright LT Green       :Ex 488 nm/Em 500–560 nm
     MitoBright LT Red          :Ex 561 nm/Em 560–620 nm
     MitoBright LT Deep Red  :Ex 640 nm/Em 650–700 nm

 

 

ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所 ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、黄色液体である。
吸光度: 0.600~0.800(490 nm付近)
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍
危険・有害
シンボルマーク
ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所
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ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

  • ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

    ミトコンドリア内鉄イオン検出試薬

    Mito-FerroGreen

  • ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

    ミトコンドリア脂溶性過酸化物検出試薬

    MitoPeDPP

  • ミトコンドリア染色用色素 Green MitoBright LT Green 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

05 細胞染色用色素

mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素

  • ミトコンドリアスーパーオキサイドを長波長励起(Deep Red)で検出可能
  • 緑色や赤色の蛍光色素と共染色が可能
  • スーパーオキサイドとの選択性が高い
  • 製品コード
    MT14  mtSOX Deep Red – Mitochondrial Superoxide Detection
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 nmol ¥20,000 348-09851
  • ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所 日本語
    ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所
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    ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

技術情報

既存試薬との比較

活性酸素種に対する反応選択性

mtSOX Deep Redと既存品(T社)の各活性酸素種(ROS)に対する反応性を比較しました。既存品と比べてmtSOX Deep Redはスーパーオキサイド選択性が高いことが確認されました。

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

また、mtSOX Deep Redは既存品よりも長波長の蛍光を発するため、これまで困難であったミトコンドリア膜電位染色色素(JC-1色素MT09, TMRE, MT-1色素MT13)との共染色が可能です。

 ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

よくある質問

Q

mtSOX Deep Redの検出原理を教えてください。

A

mtSOX Deep Redはスーパーオキシド選択的に酸化され発蛍光する色素です。
さらに、本色素は膜電位依存的に細胞内のミトコンドリアに局在するため、ミトコンドリアのスーパーオキシドを特異的に検出することができます。
スーパーオキシド誘導に伴いミトコンドリアの膜電位が消失する場合、反応後の色素は核小体や細胞質に分散します。

Q

培地以外でWorking solutionの調製は可能ですか?

A

可能です。培地以外でしたらHBSSやPBSをご使用いただけます。

Q

検出可能な検出器と適切なフィルターを教えてください。

A

共焦点レーザー顕微鏡、落射型蛍光顕微鏡、プレートリーダーで検出可能です。

・共焦点レーザー顕微鏡
Ex/Em: 561/640-700 nm (赤色色素と共染色しない場合)
Ex/Em: 633/640-700 nm (赤色色素と共染色する場合)

・落射型蛍光顕微鏡
TxRedフィルター
Ex/Em: 540-580/590-670 nm 

・プレートリーダー
Ex/Em: 535–565/660–690 nm

Q

刺激後の染色は可能ですか?

A

ミトコンドリア膜電位が低下しない条件であれば可能です。
本色素は膜電位依存的にミトコンドリアに集積します。そのため刺激により膜電位が低下する場合は、刺激後の染色ではミトコンドリアに集積できず正確なスーパーオキシドの検出ができません。
上記特徴から、小社では刺激前染色を推奨しております。

ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所 ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 白色~淡紫色固体
確認試験: 試験適合
含量: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵
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ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

関連製品

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。

  • ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

    ミトコンドリア膜電位検出キット

    JC-1 MitoMP Detection Kit

  • ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

    MT-1ミトコンドリア膜電位検出キット

    MT-1 MitoMP Detection Kit

  • ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

    トータルROS検出キット

    ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-

  • ミトコンドリア スーパーオキサイド検出用蛍光色素 mtSOX Deep Red - Mitochondrial Superoxide Detection 同仁化学研究所

    マイトファジー検出キット

    Mitophagy Detection Kit

免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所

上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品,欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。

免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所MitoBright IM Red for Immunostaining

05 細胞染色用色素

MitoBright IM Red for Immunostaining

免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 細胞機能解析
  • ミトコンドリア関連

免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red

  • 免疫染色法と共染色できる
  • 固定化・膜透過処理後もミトコンドリアに滞留しやすい
  • 血清培地中で染色できる
  • 製品コード
    MT15  MitoBright IM Red for Immunostaining
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
20 μl ¥12,000 345-09861
20 μl x 3 ¥25,000 341-09863
  • 免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所
試験成績書

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  • ご購入方法
  • お問い合わせ

マニュアル

  • 取扱説明書 免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所 日本語
    免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所
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    免疫染色用ミトコンドリア検出蛍光色素 Red MitoBright IM Red for Immunostaining 同仁化学研究所

技術情報

免疫染色法との共染色

既存の低分子ミトコンドリア染色試薬には、免疫染色法と共染色する際に鮮明さに課題がありました。これは、ミトコンドリアに集積していた試薬が、細胞染色後の固定化や膜透過処理によってミトコンドリア以外の細胞質や細胞外へ移動することで、バックグラウンドの増加や蛍光シグナルの低下を起こします。MitoBright IMは、生細胞で染色した後の免疫染色の工程でもミトコンドリアに保持されやすい構造を有するため、免疫染色と併用する際の課題を解決する新しい色素です。

 

MitoBright IMでミトコンドリアを染色したHeLa細胞を固定化と膜透過処理後、小胞体のマーカータンパクであるKDEL抗体を用いた免疫染色法と共染色しました。また、蛍光画像の矢印(青色)で示した範囲において、各々の蛍光強度を測定しました(右図)。その結果、鮮明にミトコンドリアおよび近接する小胞体の形態を観察できました。
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<検出条件>
MitoBright IM Red (赤) Ex: 561 nm, Em: 560-620 nm
KDEL抗体-Alexa 488 (緑) Ex: 488 nm, Em: 490-550 nm
スケールバー:10 μm

よくある質問

Q

MitoBright IM Red は DMSO溶液ですが、凍結融解を繰り返しても劣化しないのでしょうか?

A

小社では凍結融解を5回繰り返した溶液を用いても、染色が可能であったことを確認しております。
長期間保存を行われる場合は、小分けした後に保存することを推奨致します。

Q

細胞を薬剤処理した後にMitoBright IMで染色したところ、染まり方にムラが生じました。 対処方法を教えてください。

A

薬剤処理をする前にMitoBright IMで染色してください。
本色素はミトコンドリア膜電位に応じて集積する性質を持ち、著しく膜電位が低下したミトコンドリアには集積しません。

(参考)
HeLa細胞をFCCPによる処理前後でMitoBright IMで染色し、蛍光観察しました。
MitoBright IMで染色後にFCCP処理を行うと蛍光が観察されましたが、FCCP処理後に染色した場合は、蛍光が観察されませんでした。

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取扱条件

規格
性状: 赤紫色液体
含量: 試験適合
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷凍
危険・有害
シンボルマーク
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ペルオキシダーゼ用発色基質・セレンの検出試薬 DAB 同仁化学研究所

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ペルオキシダーゼ用発色基質・セレンの検出試薬 DAB 同仁化学研究所DAB

05 細胞染色用色素
10 酸化還元系発色試薬

DAB

ペルオキシダーゼ用発色基質・セレンの検出試薬 DAB 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 酸化還元系発色試薬

ペルオキシダーゼ用発色基質・セレンの検出試薬

  • 製品コード
    D006  DAB
  • CAS番号
    7411-49-6
  • 化学名
    3,3′-Diaminobenzidine, tetrahydrochloride
  • 分子式・分子量
    C12H18Cl4N4=360.11
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 mg ¥6,400 343-00901
1 g ¥19,600 349-00903
5 g ¥72,200 347-00904
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技術情報

応用可能な物質

検出試薬として  : ペルオキシダーゼ
比色試薬として  : Se, V, ジアセチル
蛍光比色試薬として: Se

参考文献

参考文献を表示する

1) A. B. Novikoff, P. M. Novikoff, C. Davis and N. Quintana, "Studies on Microperoxisomes V. Are Microperoxisomes Ubiquitous in Mammalian Cells", J. Histochem. Cytochem.197321, 737. 
2) V. Herzog and H. D. Fahimi, "A New Sensitive Colorimetric Assay for Peroxidaase Using 3, 3'-Diaminobenzidine as Hydrogen Donor", Anal. Biochem.197355, 554. 
3) H. Yamada, S. Mori, S. Ueda, M. Kawata and Y. Sano, "Improvement of Technique of Immunohistochemical Demonstraction of Bioactive Substances in the Central Nervous System", Acta Histochem. Cytochem.198720, 629.
4) K. L. Cheng, "Determination of Traces of Selenium 3,3'-Diaminobenzidine as Selenium(IV) Organic Reagent", Anal. Chem.195628, 1738.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~桃灰色粉末で水によく溶け、有機溶媒には溶けない。
純度(滴定,乾燥物換算): 97.0% 以上
水溶状: 試験適合
トリス緩衝液溶状: 試験適合 0.040 以下(500 nm) 0.080 以下(400 nm)
吸光度(セレン錯体): 0.500 以上(420 nm付近)
乾燥減量: 5.0% 以下
強熱残分(硫酸塩): 0.05% 以下
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:冷蔵,遮光
危険・有害
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05 細胞染色用色素

FSB solution

アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素

アミロイド染色用色素

  • 製品コード
    F308  FSB solution
  • 化学名
    1-Fluoro-2,5-bis(3-carboxy-4-hydroxystyryl)benzene, DMSO solution
  • 分子式・分子量
    C24H17FO6=420.39
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
100 μl ¥30,200 341-90811
  • アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所
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  • プロトコル アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所 細胞を染色したい
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技術情報

使用例

サンプルの固定法:エタノール固定もしくはホルマリン固定

参考文献

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参考文献

1) 安東 由喜雄, Dojin News2002, 104, 1.
2) Y. Ando, H. Terazaki, Y. Tanoue, K. Haraoka, K. Ishikawa, S. Katsuragi, M. Nakamura, X. Sun, K. Nakagawa, K. Sasamoto, K. Takesako, T. Ishizaki, Y. Sasaki and K. Doh-ura, "A novel tool for detecting amyloid deposits in systemic amyloidosis in vitro and in vivo." Lab. Invest.200383(12), 1751.
3) D. M. Skovronsky, B. Zhang, M.-P. Kung, H. F. Kung, J. Q. Trojanowski and V. M.-Y. Lee, "In vivo Detection of amyloid Plaques in a Mouse Model of Alzheimer's Disease", Proc. Natl. Acad. Soc. USA200097, 7609.
4) K. Sato, M. Higuchi, N. Iwata, T. C. Said and K. Sasamoto, "Fluoro-substituted and 13C-labeled styrylbenzene derivatives for detecting brain amyloid plaques", Eur. J. Med. Chem.200439, 573.
5) M. Higuchi, N. Iwata, Y. Matsuba, K. Sato, K. Sasamoto and T. C. Saido, "19F and 1H MRI detection of amyloid β plaques in vivo", Nature Nurosci., 20058(4), 527. http://dx.doi.org/10.1038/nn1422

よくある質問

Q

FSBを蛍光観察する際の励起波長および蛍光波長を教えてください。

A

波長は以下の通りです。
励起波長:390 nm, 蛍光波長:511 nm

アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所 アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、淡黄色~黄褐色液体である。
吸光度: 0.600~0.850(370 nm付近)
取扱条件
1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法:冷蔵,遮光
危険・有害
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アミロイド染色用色素 FSB solution 同仁化学研究所
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05 細胞染色用色素
10 酸化還元系発色試薬

TMBZ

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  • 細胞染色用色素
  • 酸化還元系発色試薬

ペルオキシダーゼ用発色基質

  • 製品コード
    T022  TMBZ
  • CAS番号
    54827-17-7
  • 化学名
    3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine
  • 分子式・分子量
    C16H20N2=240.34
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 g ¥7,400 346-04031
5 g ¥26,200 342-04033
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技術情報

溶解例

1 g/100 mL(熱メチルアルコール)

参考文献

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1) V. R. Holland, B. C. Saunders, F. L. Rose and A. L. Walpole, "A Safer Substitute for Benzidine in the Detection of Blood", Tetrahedron, 1974, 30, 3299. 
2) W. Levin, D. Ryan, S. West and A. Y. H Lu, "Preparation of Partially Purified, Lipid-depleted Cytochrome P-450 and Reduced Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate-cytochrome c Reductase from Rat Liver Microsomes", J. Biol. Chem., 1974, 249, 1747. 
3) P. E. Thomas, D. Ryan and W. Levin, "An Improved Staining Procedure for the Detection of the Peroxidase Activity of Cytochrome p-450 on Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gels", Anal. Biochem., 1976, 75, 168. 
4) H. H. Liem, F. Cardenas, M. Tavassoli, M. B. Poh-Fitzpatrick and U. Muller-Eberhard, "Quantitative Determination of Hemoglobin and Cytochemical Staining for Peroxidase Using 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine dihydrochloride, a Safe Substitute for Benzidine", Anal. Biochem., 1979, 98, 388. 
5) R. C. Lijana and M. C. Williams, "Tetramethylbenzidine- A substitute for Benzidine in Hemoglobin Analysis", J. Lab. Clin. Med., 1979, 94, 266. 
6) R. M. Jaffe and W. Zierdt, "A New Occult Blood Test Not Subject to False-Negative Results from Reducing Substances", J. Lab. Clin. Med., 1979, 93, 879. 
7) 吉野二男, "還元剤によっても偽陰性を示さない新しい潜血反応試薬", 臨床検査, 1980, 24, 140. 
8) K. Suzuki, H. Ota, S. Sasagawa, T. Sakatani and T. Fujikura, "Assay Method for Myeloperoxidase in Human Polymorphonuclear Leukocytes", Anal. Biochem., 1983, 132, 345. 
9) 鈴木和男, 笹川澄子, 坂谷達一郎, 太田洋美, 大西寿, 藤倉敏夫, "自動マルチウェルリーダーを用いた酵素活性の高感度レートアッセイ法 -多形核白血球ミエロパーオキシデースをモデルとして", 医学のあゆみ, 1984, 131, 163. 
10) F. H. Pujol, I. Rodriguez, M. Devesa, R. Rangel-Aldao and F. Liprandi, "A Double Sandwich Monoclonal Enzyme Immunoassay for Detection of Hepatitis B Surface Antigen", J. Immunol., 1993, 14, 21. 
11) F. B. Serrat, "Colorimetric Method for Determiantion of Chlorine with 3,3',5,5'-Tetramethylbenzidine", Talanta, 1994, 41, 2091.

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~淡灰褐色結晶性粉末で、水にあまり溶けないが、メチルアルコールには溶ける。
純度(HPLC): 99.0% 以上
メチルアルコール溶状: 試験適合
モル吸光係数: 24,000 以上(287 nm付近)
融点: 165~171℃
IRスペクトル: 試験適合
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ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ 同仁化学研究所

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ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所

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ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所TMBZ・HCl

05 細胞染色用色素
10 酸化還元系発色試薬

TMBZ・HCl

ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所

  • 細胞染色用色素
  • 酸化還元系発色試薬

ペルオキシダーゼ用発色基質

  • 製品コード
    T039  TMBZ・HCl
  • CAS番号
    207738-08-7
  • 化学名
    3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, dihydrochloride, dihydrate
  • 分子式・分子量
    C16H22Cl2N2・2H2O=349.30
容 量 メーカー希望
小売価格
富士フイルム
和光純薬
1 g ¥14,400 340-06491

ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所お詫び:CAS番号を訂正しました。(2020/05/20)

 なお、訂正前の製品と化学構造・化学名・分子量は同一です。

 正) 207738-08-7 二水和物
 誤) 64285-73-0  無水物

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溶解例

200 mg/20 mL(水)

よくある質問

Q

TMBZ・HClを中性の緩衝液に溶解すると沈殿が析出します。これは何でしょうか?

A

中性の緩衝液に溶解されたのであれば、沈殿は『TMBZのフリー体』です。
TMBZ・HClは水によく溶けますが、その時のpHは酸性です。

中性の緩衝液ではHClが中和され、水への溶解性が低いTMBZのフリー体となるため沈殿が析出することになります。

 

ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所 ペルオキシダーゼ用発色基質 TMBZ・HCl 同仁化学研究所

取扱条件

規格
性状: 本品は、白色~微桃色結晶性粉末で水にはよく溶けるが、有機溶媒には溶けない。
純度(滴定): 98.0% 以上
水溶状: 試験適合
pH(25℃): 2.0~2.5
水分: 8.0~12.0%
IRスペクトル: 試験適合
取扱条件
1.保存方法:遮光
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