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| SARS-CoV-2假病毒宿主细胞 | ||||||
| 品牌 | Code No. | 产品名称 | 包装量 | 价格（元） | 说明书 | 数量 |
| Clontech | 631289 | Human ACE2 293T Cell Line | 1 ml | ￥27,106 |  |
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| SARS-CoV-2进入宿主细胞是由刺突蛋白与ACE2受体之间的相互作用所介导的。为了助力病毒与受体相互作用研究和COVID-19疗法开发，我们开发了在CMV启动子控制下稳定表达ACE2的HEK细胞。已证实，经过多次传代该细胞依然可持续高水平表达ACE2，并可被使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备的SARS-CoV-2假病毒高效转导。 |
| ACE2是一种含锌金属酶，位于内皮细胞和其他类型细胞的表面。这种跨膜蛋白可将血管紧张素I转化为血管紧张素1-9(一种在心肌细胞中起抗肥厚作用的9-氨基酸肽)，并将血管紧张素II转化为血管紧张素1-7，这是一种有益的血管扩张剂和防扩散剂。 |
| Human ACE2 293T Cell Line由编码ACE2的慢病毒转导HEK细胞构建而成。通过RT-qPCR方法证实，该细胞经亚克隆能高效表达ACE2。 |
| ■ 概述 |
| · 由CMV启动子控制，组成型表达ACE2的HEK细胞 · 经多次传代证实，ACE2可持续高效表达 · 可被SARS-CoV-2假病毒 (e.g., 使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备)高效转导 |
| ■ 应用 |
| · SARS-CoV-2假病毒中和研究 · 病毒-受体相互作用和病毒侵入分析 |
| ■ 实验例 |
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| 图1 通过流式细胞术分析ACE2表达情况。使用与Alexa Fluor 488共轭抗ACE2抗体(R&D Systems, Code No. FAB9332G)检测表达在人ACE2 293T细胞表面的ACE2，未被标记的细胞作为阴性对照。 |
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| 图2 不同代次细胞中ACE2稳定表达的情况。使用One Step PrimeScript RT-PCR Kit (Perfect Real Time) (Code No. RR064A)通过RT-qPCR方法，测定人ACE2 293T连续细胞代次中ACE2 mRNA相对表达水平。以三个重复测定的管家基因ACTB Ct值为标准对ACE2表达的Ct值进行归一化处理。通过计算2^(-ΔΔCt)，确定相对于293T细胞，稳转细胞中ACE2的表达情况。 |
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| 图3 使用表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（截短形式）并表达ZsGreen1绿色荧光蛋白质的慢病毒粒子。Panel A为感染72小时后被转导细胞的显微图像。Panel B为在转导6天后，通过流式细胞仪测定的每个样品的转导效率。 |
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| 图4 使用表达荧光素酶的SARS-CoV-2假病毒转导人ACE2 293T细胞。使用Lenti-X SARS-CoV-2 Packaging Single Shots制备携带野生型或者D614G变异型刺突蛋白（全长或者截短形式）并表达萤火虫荧光素酶的慢病毒粒子。取10 μl 浓缩病毒液（21倍）转导人ACE2 293T细胞。转导6天后测定荧光素酶活性，以不表达包膜蛋白的病毒作为对照，测定荧光素酶活性背景值。 |
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| 图5 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以非人灵长类动物恢复期混合血清作为阻断剂。野生型（截短形式）SARS-CoV-2假病毒与梯度稀释的恢复期血清(BEI Resources，Code. NR-52401)孵育后转导人ACE2 293T细胞。感染3天后测定荧光素酶水平，作为病毒感染读数。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。阴性对照组添加健康猕猴血清作为阻断剂。 |
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| 图6 使用人ACE2 293T细胞进行中和试验，以可溶性ACE2蛋白作为阻断剂。Panels A和B梯度稀释与IgG (ACE2-Fc)Fc结构域相融合的可溶性ACE2蛋白，和SARS-CoV-2假病毒一起转导人ACE2 293T细胞。图示数据为中和作用相对于仅病毒控制感染的百分比。数值为平均值±标准偏差，实验设置3个平行重复。 |
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页面更新：2021-08-23 15:51:05