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In-Fusion Snap Assembly Master Mix
品牌	Code No.	产品名称	包装量	价格（元）	说明书	数量
Clontech	638947	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	10 Rxns	￥1,155 ￥866
Clontech	638948	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	50 Rxns	￥5,204 ￥3,903
Clontech	638949	In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix	250 Rxns	￥20,747 ￥15,560

*红字为促销价格，促销时间: 2022年9月1日-2022年10月31日

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效率更高、重复性更好的无缝克隆试剂登场了！
In-Fusion Snap Assembly Master Mix是在In-Fusion HD Cloning Kit基础上升级的新产品，与其他公司同类产品相比克隆效率更高。
In-Fusion HD Cloning Kit与其他公司同类产品对比数据参见：In-Fusion与其他公司的无缝克隆产品对比有何不同？

■ 制品说明

In-Fusion Snap Assembly是Takara推出的新一代无缝克隆试剂，延续了上一代HD系列产品的优点，仅通过15分钟反应，即可将1个或多个PCR片段按照设计要求插入到任意载体的任意位置，对于待克隆的PCR片段，不需要进行限制酶酶切、磷酸化及末端平滑化等处理。Snap Assembly系列的实验效率和一致性均超过HD系列产品，更擅长多片段克隆以及高通量实验。

■ 制品内容

· 5X In-Fusion Snap Assembly Master Mix
· linearized pUC19 Control Vector
· 2 kb Control Insert

※ PCR产物纯化需要另外准备纯化试剂，例如可使用TaKaRa MiniBEST Agarose Gel DNA Extraction Kit Ver.4.0（Code No. 9762）纯化柱。
※ 试剂盒中不附带感受态细胞，转化实验请使用高效率的感受态细胞，例如 E. coli HST08 Premium Competent Cells（Code No. 9128）或 Stellar感受态细胞。
※ 扩增目的片段及对载体进行反向PCR时建议使用高保真酶 PrimeSTAR Max DNA Polymerase（Code No.：R045A/B）。

■ 制品特点

· 可在任意载体的任意位置进行定向克隆
· 操作简单方便，无需进行反复的酶切连接
· 对于50 bp～15 kb的插入片段，克隆效率可超过95%
· 与现有的In-Fusion HD Cloning Kit相比，多片段克隆效率大幅提升
· 在高正确率的基础上，转化后得到的菌落数比其他公司的同类产品更多

■ In-Fusion原理

In-Fusion技术利用In-Fusion酶，通过识别DNA片段（例如PCR片段和线性化载体）末端15 bp的同源序列来实现高效、准确地融合。这15 bp的同源序列可在设计目的片段扩增引物时，使用我们的在线引物设计工具进行设计。In-Fusion酶从线性DNA链的3'末端切割核苷酸，这样，两个DNA片段之间便形成互补碱基对，可通过退火使片段连接起来。通过这一原理可将单个或多个片段克隆到载体中，而无需亚克隆。除此之外，In-Fusion技术还可以应用于突变导入、基因合成、特定基因结构域改变等。

图1. In-Fusion克隆标准工作流程示意图（适用所有In-Fusion克隆试剂盒）。

■ In-Fusion引物设计

In-Fusion克隆用引物的设计与目的片段PCR扩增用引物的设计基本相同。不同之处是需要在特异性引物的5'末端添加15个与载体末端序列相同的碱基（参考下图）。Takara为您提供了方便的在线引物设计工具，欢迎使用。

■ 对比实验例

实验例1

图2. In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD性能比较。分别使用In-Fusion Snap Assembly和In-Fusion HD将五个不同的插入片段（大小从405 bp到1,005 bp不等）同时克隆到一个经反向PCR线性化的2.7 kb的载体中，每组克隆反应重复三次。两个反应系统除了酶预混液不同之外，扩增引物和其他试剂全部相同。转化涂菌后显示Snap Assembly组长出的菌落数是HD组的4倍，挑取10个转化菌落，进一步使用Sanger测序法进行验证，结果显示二者正确率均超过90%。

实验例2

数据来源于Takara Bio USA, Inc.

图3. In-Fusion Snap Assembly与其他公司同类产品A的比较（使用反向PCR的方法线性化载体）。 将3.8 kb的片段（图A）或34.2 kb的腺病毒片段（图B）克隆到通过反向PCR线性化的2.7 kb的载体中，每组克隆反应重复三次。引物按照所使用试剂厂家的要求进行设计。转化涂菌后显示In-Fusion Snap Assembly组长出的菌落数是A产品组的2倍，各挑取20个转化菌落，再使用Sanger测序法和菌落PCR的方法分别进行验证，结果显示In-Fusion Snap Assembly的正确率超过95%。

实验例3

数据来源于Takara Bio USA, Inc.

图4．In-Fusion Snap Assembly与其他公司同类产品A的比较（使用限制酶酶切的方法线性化载体）。将3.8 kb的片段克隆到通过限制酶酶切线性化的标准载体中，载体因使用不同的限制酶而产生三种不同末端，5'突出端（图A），平端（图B）和3'突出端（图C），每组克隆反应重复三次，引物按照所使用试剂厂家的要求进行设计。转化涂菌后显示In-Fusion Snap Assembly组长出的菌落数是A产品组的5-16倍，根据载体末端类型的不同而不同。各挑取20个转化菌落，进一步使用Sanger测序法进行验证，结果显示In-Fusion Snap Assembly的正确率超过95%。

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