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α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
細胞機能解析
細胞内代謝

α-ケトグルタル酸測定キット

これまでの課題だったデータのバラツキと再現性を改善
ミトコンドリア活性の指標に
代謝の変化を捉える充実のラインナップ

製品コード

K261　 α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
100 tests	￥64,000	343-09801

キット内容

100 tests	・Fluorescent Dye ・α-KG Standard ・Enzyme Mix ・Coenzyme ・Assay Buffer ・lysis Solution ・Control Buffer ・ALT Solution ・Reaction Buffer	×1 300 ×l×1 ×1 ×1 6.5 ml×1 2 ml×1 25 ml×1 35 ×l×1 5 ml×1

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技術情報

α-ケトグルタル酸の測定原理

α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric は、α-ケトグルタル酸を定量するキットです。
サンプル中の α-Ketoglutarate ならびに Pyruvate との酵素反応により生成した Resorufin（Ex：530 – 560 nm、Em：580 – 600 nm）の蛍光を測定することで、細胞内のα-ケトグルタル酸を定量できます。また、本キットは96穴マイクロプレートに対応しているため、多検体測定が可能です。

α-ケトグルタル酸測定キット α-Ketoglutarate Assay Kit-Fluorometric　同仁化学研究所

よくある質問

Q 1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。: A

検量線の作成およびサンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、12サンプルの測定が可能です。
96ウェルプレートのレイアウト例については、取扱説明書をご参照ください。

Q ブラックプレート以外のプレート(クリアプレートやホワイトプレート)での測定はできますか。: A

ホワイトプレートやクリアプレートを用いた場合、正確な検量線が作成できませんので、ブラックプレートをご使用下さい。

Q サンプルが発色しない場合、原因として何が考えられますか？: A

本キットで定量可能な α-Ketoglutarate 濃度は 0.2 µmol/l 以上です。α-Ketoglutarate 濃度が 0.2 µmol/l 以下の測定試料は本キットでは定量できません。
また、測定試料を希釈している場合、希釈後の測定試料に含まれている α-Ketoglutarate 濃度が 0.2 µmol/l よりも低い可能性があります。
希釈倍率を下げ、測定試料の濃度を定量可能範囲内にして下さい。

Q Working solutionは保存できますか？: A

Working solutionは保存できませんので、用時調製して下さい。
また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。
※Working solutionは調製後、遮光下であれば室温で2時間程度は安定です。

Q 測定試料は保存できますか。: A

取扱説明書の操作中、「－細胞内α-ケトグルタル酸定量用サンプルの調製－」の操作(5)の溶液^※は、冷凍(-20℃)で10日間の保存が可能です。
なお、冷凍保存後に沈殿を生じることがございます。その場合は遠心後の上澄みを測定試料としてください。
※Lysis Solution 20 µlを加え、ピペッティングにより混合、8000×gで10分間遠心後の上清

Q 組織を用いた実験例はありますか？: A

マウス肝臓組織を用いてα-KG量を測定した事例がございます。

実験操作の詳細は下記をご参照ください。

アルカリ抽出法による肝臓サンプルからの代謝指標の抽出

1. マウス肝臓100 mgあたり500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液を入れる。
＊使用する組織は必ず灌流操作等で十分に脱血してください。血液の残存は測定に影響を与えます。
2. ダウンス型ホモジナイザーで組織を破砕する。
3. サンプルを回収し、サンプルチューブに移す。破砕に使用した容器をを500 µlの冷えた0.5 mol/l KOH水溶液で共洗いし、チューブ内のサンプルと合わせる。（全量 1 ml）
4. 冷えた超純水 1 mlをサンプルチューブに加え、よく混合し氷上で5分間静置する。（全量 2 ml）
＊溶液の粘性が高いと、次操作の遠心後の分離が困難になる場合があります。その際は、シリンジに25 g程度の細い針を付け、サンプル溶液をシリンジでスムーズに出し入れができるまで(20-30回)混合してください。
5. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清を900 µlずつ二つのサンプルチューブに回収する。
α-KG測定用サンプルの調整
6. 上記5. で調整した900 µlのサンプルに200 µl の1 mol/l KH₂PO₄水溶液を入れ中和し、よく混合後氷上で5分間静置する。
7. 12,000 x g , 4℃で5分間遠心し、上清1 mlをサンプルチューブに回収し測定用サンプルとする。

<測定時の注意点>
※組織抽出サンプルは保存できません。その日のうちに測定してください。
※ご使用のチップによっては組織抽出サンプルがチップ内に液残りすることがございます。データがバラつく原因となりますので、サンプルの吸い上げ吐出しはゆっくり行い、可能な限りチップ内に液が残らないようにして下さい。
※スタンダード、サンプルの希釈には希釈用溶液として0.5 mol/l KOH水溶液と1 mol/l KH₂PO₄水溶液を9:5の比率で混合したものを使用してください。

＜測定例＞
NASH誘導マウス肝臓組織におけるα-KG量の変化