上海金畔生物科技有限公司代理日本同仁化学试剂盒全线产品，欢迎访问日本同仁化学dojindo官网了解更多信息。
Mitophagy Detection Kit
Mitophagy Detection Kit
- 細胞染色用色素
- 細胞機能解析
- ミトコンドリア関連
マイトファジー検出キット
-
製品コードMD01 Mitophagy Detection Kit
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 1 set | ￥37,200 | 344-91901 |
| 1 set | ・Mtphagy Dye ・lyso Dye |
5 μg x 1 30 μg x 1 |
|---|
- ご購入方法
- お問い合わせ
マニュアル
-
取扱説明書
日本語 
-
取扱説明書 English
-
プロトコル マイトファジ―を検出したい
技術情報
検出原理
Mtphagy Dyeによるマイトファジー検出機構
本製品の測定原理・使用例が記載された論文は、参考文献4)をご覧ください。
マイトファジーのリアルタイム観察
HeLa細胞をCCCP処理し、マイトファジー検出試薬（MtphagyDye）及びミトコンドリア染色試薬（MitoBright LT Green）にて共染色しタイムラプス撮影(6時間)しました。
|
＜検出条件＞ |
技術や使用製品に関する補足
長期滞留性・血清培地中で使用可能
【ミトコンドリア染色試薬】
・MitoBright LT Green
・MitoBright LT Red
・MitoBright LT Deep Red
参考文献
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) |
細胞（HeLa） |
フローサイトメーター | J. Koniga, C. Otta, M. Hugoa, T. Junga, A. L. Bulteaub, T. Grunea and A. Hohna, "Mitochondrial contribution to lipofuscin formation", Redox Biology, 2017, 11, 673. |
| 2) | 細胞（KB） | 蛍光顕微鏡 | K. Kameyama, "Induction of mitophagy-mediated antitumor activity with folate-appended methyl-β-cyclodextrin", International Journal of Nanomedicine, 2017, 12, 3433. |
| 3) |
細胞（SH-SY5Y, 初代ラット皮質神経細胞） |
蛍光顕微鏡 | E. F. Fang, T. B. Waltz, H. Kassahun, Q. Lu, J. S. Kerr, M. Morevati, E. M. Fivenson, B. N. Wollman, K. Marosi, M. A. Wilson, W. B. Iser, D. M. Eckley, Y. Zhang, E. Lehrmann, I. G. Goldberg, M. S. Knudsen, M. P. Mattson, H. Nilsen, V. A. Bohr and K. G. Becker, "Tomatidine enhances lifespan and healthspan in C. elegans through mitophagy induction via the SKN-1/Nrf2 pathway", Scientific Reports, 2017, 7, (46208), DOI: 10.1038/srep46208. |
| 4) | 細胞（HeLa、Parkin発現HeLa） | 蛍光顕微鏡 | H. Iwashita, S. Torii, N. Nagahora, M. Ishiyama, K. Shioji, K. Sasamoto, S. Shimizu and K. Okuma, "Live Cell Imaging of Mitochondrial Autophagy with a Novel Fluorescent Small Molecule", ACS Chem. Biol., 2017, 12, (10), 2546. |
| 5) |
細胞（Cardiomyocytes） |
フローサイトメーター | Y. Feng, NB. Madungwe, CV. da Cruz Junho and JC. Bopassa, "Activation of G protein-coupled oestrogen receptor 1 at the onset of reperfusion protects the myocardium against ischemia/reperfusion injury by reducing mitochondrial dysfunction and mitophagy.", Br. J. Pharmacol., 2017, 174, (23), 4329. |
| 6) |
細胞（HCT116） |
蛍光顕微鏡 | K. M. Elamin, K. Motoyama, T. Higashi, Y. Yamashita, A. Tokuda and H. Arima, "Dual targeting system by supramolecular complex of folate-conjugated methyl-β-cyclodextrin with adamantane-grafted hyaluronic acid for the treatment of colorectal cancer.", Int. J. Biol. Macromol., 2018, doi: 10.1016/j.ijbiomac.2018.02.149. |
| 7) |
細胞（Parkin-HeLa） |
プレートリーダー | N. Furuya, S. Kakuta, K. Sumiyoshi, M. Ando, R. Nonaka, A. Suzuki, S. Kazuno, S. Saiki and N. Hattori, "NDP52 interacts with mitochondrial RNA poly(A) polymerase to promote mitophagy.", EMBO Rep. ., 2018, doi: 10.15252/embr.201846363. |
| 8) |
細胞（NKT） |
フローサイトメーター | L. Zhu, X. Xie, L. Zhang, H. Wang, Z. Jie, X. Zhou, J. Shi, S. Zhao, B. Zhang, X. Cheng and S. Sun, "TBK-binding protein 1 regulates IL-15-induced autophagy and NKT cell survival", Nature Communications., 2018, 9, (1), doi:10.1038/s41467-018-05097-5. |
| 9) |
細胞（HeLa） |
フローサイトメーター | K. Araki, K. Kawauchi, W. Sugimoto, D. Tsuda, H. Oda, R. Yoshida and K. Ohtani, "Mitochondrial protein E2F3d, a distinctive E2F3 product, mediates hypoxia-induced mitophagy in cancer cells", Commun Biol., 2019, DOI: 10.1038/s42003-018-0246-9. |
| 10) |
細胞（Bovine Sertoli） |
蛍光顕微鏡 | E. Adegoke, S. Adeniran, Y. Zeng, X. Wang, H. Wang, C. Wang, H. Zhang, P. Zheng and G. Zhang , "Pharmacological inhibition of TLR4/NF-κB with TLR4-IN-C34 attenuated microcystin-leucine arginine toxicity in bovine Sertoli cells.", J Appl Toxicol., 2019,doi: 10.1002/jat.3771. |
| 11) |
組織（マウス） |
蛍光顕微鏡 | E. F. Fang, Y. Hou, K. Palikaras, B. A. Adriaanse, J. S. Kerr, B. Yang, S. Lautrup, M. M. Hasan-Olive, D. Caponio, X. Dan, P. Rocktaschel, D. L. Croteau, M. Akbari, N. H. Greig, T. Fladby, H. Nilsen, M. Z. Cader, M. P. Mattson, N. Tavernarakis and V. A. Bohr, "Mitophagy inhibits amyloid-β and tau pathology and reverses cognitive deficits in models of Alzheimer's disease.", Nat. Neurosci. ., 2019,DOI:10.1038/s41593-018-0332-9. |
| 12) |
細胞（HepG2） |
蛍光顕微鏡 | Iwasawa, T. Shinomiya, N. Ota, N. Shibata, K. Nakata, I. Shiina, and Y. Nagahara , "Novel Ridaifen-B Structure Analog Induces Apoptosis and Autophagy Depending on Pyrrolidine Side Chain", Biological and Pharmaceutical Bulletin., 2019, 42, (3), 401-410, doi: 10.1248/bpb.b18-00643. |
| 13) |
細胞（U2OS） |
蛍光顕微鏡 プレートリーダー |
T. Namba, "BAP31 regulates mitochondrial function via interaction with Tom40 within ER-mitochondria contact sites ", Sci Adv., 2019, 5, (6), 1386. |
| 14) | 細胞（ラット：INS-1） | 蛍光顕微鏡 | A. Inamura, S. M. Hirayama, and K. Sakurai, Loss of Mitochondrial DNA by Gemcitabine Triggers Mitophagy and Cell Death', Biol. Pharm. Bull.., 2019, 42, 1977. |
| 15) |
細胞（HRCEpiC, HRPTEpic） |
プレートリーダー | Y. Zhao and M. Sun, Metformin rescues Parkin protein expression and mitophagy in high glucose-challenged human renal epithelial cells by inhibiting NF-κB via PP2A activation., Life Sci.., 2020, DOI:10.1016/j.lfs.2020.117382. |
| 16) |
細胞（RAES） |
蛍光顕微鏡 | N. Liu, J. Wu, L. Zhang, Z. Gao, Y. Sun, M. Yu, Y. Zhao, S. Dong, F. Lu and W. Zhang , "Hydrogen Sulphide modulating mitochondrial morphology to promote mitophagy in endothelial cells under high‐glucose and high‐palmitate ", J. Cell. Mol. Med., 2017, 21, (12), 3190. |
| 17) |
細胞（BAECs） |
蛍光顕微鏡 | N. Kajihara, D. Kukidome, K. Sada, H. Motoshima, N. Furukawa, T. Matsumura, T. Nishikawa and E. Araki, "Low glucose induces mitochondrial reactive oxygen species via fatty acid oxidation in bovine aortic endothelial cells", J Diabetes Investig, 2017, 8, (6), 750. |
| 18) |
細胞（HT22） |
蛍光顕微鏡 | M. Jin, H. Ni and L. Li, "Leptin Maintained Zinc Homeostasis Against Glutamate-Induced Excitotoxicity by Preventing Mitophagy-Mediated Mitochondrial Activation in HT22 Hippocampal Neuronal Cells.", Front Neurol, 2018, 9, (9), 332. |
| 19) |
細胞（BMDMs） |
フローサイトメーター | D. Bhatia, K. P. Chung, K. Nakahira, E. Patino, M. C. Rice, L. K. Torres, T. Muthukumar, A. M. Choi, O. M. Akchurin and M. E. Choi , "Mitophagy-dependent macrophage reprogramming protects against kidney fibrosis", JCI Insight, 2019, 4, (23), e132826. |
| 20) |
細胞（U2OS） |
蛍光顕微鏡 | J. Zheng, D. L. Croteau, V. A. Bohr and M. Akbari, "Diminished OPA1 expression and impaired mitochondrial morphology and homeostasis in Aprataxin-deficient cells. ", Nucleic Acids Res., 2019, 47, (8), 4086. |
| 21) |
細胞（HT22） |
蛍光顕微鏡 | D. D. Wang, M. F. Jin, D. J. Zhao and H. Ni, "Reduction of Mitophagy-Related Oxidative Stress and Preservation of Mitochondria Function Using Melatonin Therapy in an HT22 Hippocampal Neuronal Cell Model of Glutamate-Induced Excitotoxicity", Front Endocrinol (Lausanne), 2019, 10, 550. |
| 22) |
細胞（CD4+T-cells, HeLa） |
蛍光顕微鏡 フローサイトメーター |
A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, A. Bektas, S. H. Schurman, M. G. Freire, C. A. Dunn, A. K. Singh, F. Macian, A. M. Cuervo, R. Sen and L. Ferrucci, "Age-associated changes in human CD4+ T cells point to mitochondrial dysfunction consequent to impaired autophagy.", Aging (Albany NY)., 2019, 11, (21), 9234-9263. |
| 23) |
細胞（ALM） |
フローサイトメーター | T. Nechiporuk, S.E. Kurtz, O. Nikolova, T. Liu, C.L. Jones, A. D. Alessandro, R. C. Hill, A. Almeida, S. K. Joshi, M. Rosenberg, C. E. Tognon, A. V. Danilov, B. J. Druker, B. H. Chang, S. K McWeeney and J. W. Tyner, "The TP53 Apoptotic Network Is a Primary Mediator of Resistance to BCL2 Inhibition in AML Cells.", Cancer Discov., 2019, 9, (7), 919. |
| 24) |
細胞（PK-15） |
蛍光顕微鏡 | Y. Zhang, R. Sun, X. Li and W. Fang, "Porcine Circovirus 2 Induction of ROS Is Responsible for Mitophagy in PK-15 Cells via Activation of Drp1 Phosphorylation", Viruses., 2020, 12, (3), 289. |
| 25) |
細胞（HCE） |
蛍光顕微鏡 | Y. Huo, W. Chen, X. Zheng, J. Zhao, Q. Zhang, Y. Hou, Y. Cai, X. Lu and X. Jin , "The protective effect of EGF-activated ROS in human corneal epithelial cells by inducing mitochondrial autophagy via activation TRPM2.", J. Cell. Physiol., 2020, DOI: 10.1002/jcp.29597. |
| 26) |
細胞（ラット：心筋細胞） |
蛍光顕微鏡 | Y. Sun, F. Lu, X. Yu, B. Wang, J. Chen, F. Lu, S. Peng, X. Sun, M. Yu, H. Chen, Y. Wang, L. Zhang, N. Liu, H. Du, D. Zhao and W. Zhang, "Exogenous H2S Promoted USP8 Sulfhydration to Regulate Mitophagy in the Hearts of db/db Mice.", Aging Dis., 2020, 11, (2), 269. |
| 27) |
細胞（HCFs） |
蛍光顕微鏡 | R. Tanaka, M. Umemura, M. Narikawa, M. Hikichi, K. Osaw, T. Fujita, U. Yokoyama, T. Ishigami, K. Tamura and Y. Ishikawa, "Reactive fibrosis precedes doxorubicin-induced heart failure through sterile inflammation.", ESC Heart Fail., 2020, 7, (2), 588. |
| 28) |
細胞（VSMCs） |
蛍光顕微鏡 | C. Duan, L. Kuang, X. Xiang, J. Zhang, Y. Zhu, Y. Wu, Q. Yan, L. Liu and T. Li, "Drp1 regulates mitochondrial dysfunction and dysregulated metabolism in ischemic injury via Clec16a-, BAX-, and GSH- pathways ", Cell Death Dis., 2020, 11, 251. |
| 29) |
細胞（Bovine Sertoli） |
蛍光顕微鏡 | E. O. Adegoke, W. Xue, N. S. Machebe, S. O. Adeniran, W. Hao, W. Chen, Z. Han, Z. Guixue and Z. Peng, "Sodium Selenite inhibits mitophagy, downregulation and mislocalization of blood-testis barrier proteins of bovine Sertoli cell exposed to microcystin-leucine arginine (MC-LR) via TLR4/NF-kB and mitochondrial signaling pathways blockage.", Ecotoxicol. Environ. Saf., 2018, 116, 165. |
| 30) |
細胞（HeLa） |
蛍光顕微鏡 | D. Takahashi, J. Moriyama, T. Nakamura, E. Miki, E. Takahashi, A. Sato, T. Akaike, K. I. Nakama and H. Arimoto, "AUTACs: Cargo-Specific Degraders Using Selective Autophagy. ", Mol. Cell, 2019, 76, (5), 797. |
| 31) |
細胞（primary hepatocyte） |
蛍光顕微鏡 | H. Kim, J. H. Lee and J. W. Park, "IDH2 deficiency exacerbates acetaminophen hepatotoxicity in mice via mitochondrial dysfunction-induced apoptosis.", Biochim Biophys Acta Mol Basis Dis, 2019, 1865, (9), 2333. |
| 32) |
細胞（C3H10T1/2s） |
蛍光顕微鏡 | M. S. Rahman and Y. S. Kim, "PINK1-PRKN mitophagy suppression by Mangiferin promotes a brown-fat-phenotype via PKA-p38 MAPK signalling in murine C3H10T1/2", Metabolism, 2020, 101, 154228. |
| 33) |
細胞（NHEKs） |
蛍光顕微鏡 | S. Ikeoka and A. Kiso , "The Involvement of Mitophagy in the Prevention of UV-B-Induced Damage in Human Epidermal Keratinocytes ", J. Soc. Cosmet. Chem. Jpn., 2020, 54(3), 252. |
| 34) | 細胞（MIN6-M9） | 蛍光顕微鏡 | R. Inoe, T. Tsuno, Y. Togashi, T. Okuyama, A. Sato, K. Nishiyama, M. Kyohara, J. Li, S. Fukushima, T. Kin, D. Miyashita, Y. Shiba, Y. Atobe, H. Kiyonari, K. Bando, A. S. Shapiro, K. Funakoshi, R. N. Kulkarni, Y. Terauchi, and J. Shirakawa, "Uncoupling protein 2 and aldolase B impact insulin release by modulating mitochondrial function and Ca2+ release from the ER", 2022, iScience, doi:10.1016/j.isci.2022.104603. |
よくある質問
-
Q
既存法に対する利点を教えてください。
-
A
pHセンサーKeimaタンパク質を用いた検出方法と比較して、本キットは低分子蛍光試薬を用いるため、蛍光タンパク質を発現させる必要がありません。また、一般的なライブセルイメージング用の蛍光試薬と同様の操作方法で染色、観察することができます。
-
Q
DMSO stock solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
Mtphagy Dye、Lyso Dyeともに、調製後、-20℃で保存してください。調製後1か月間安定です。使用量に応じて小分けして保存することをお勧めします。
-
Q
Working solutionは、どのくらい安定ですか？
-
A
保存できません。用時調製してください。
-
Q
培地中のフェノールレッドは測定に影響しますか？
-
A
観察する際、共焦点レーザー顕微鏡をご使用であれば殆どフェノールレッドの影響はありませんが、落射型蛍光顕微鏡をご使用の場合はフェノールレッドによるバックグラウンドが観察されます。（下記観察データを参照）そのため落射型蛍光顕微鏡をご使用になる際は、Working solutionまたは染色時にはフェノールレッド不含の培地またはHBSSをご使用ください。
-
Q
蛍光顕微鏡の推奨フィルターを教えてください。
-
A
各試薬に応じて以下のフィルターを推奨します。
Mtphagy Dye： 励起（500～560 nm）、蛍光（670～730 nm）
Lyso Dye： 励起（350～450 nm）、蛍光（500～560 nm）取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「蛍光顕微鏡による測定例」もご参考ください。
-
Q
多重染色時の注意点を教えてください。
-
A
Mtphagy Dyeは一般的なRed系の蛍光色素に比べストークスシフトが長いため、Deep Redの蛍光色素と共染色する時には特に注意が必要です。
つまりMtphagy Dyeは500–560 nmで励起し、670-730 nmで蛍光を検出するため、Deep Redの蛍光検出波長と重なります。そのため、Deep Redの色素が励起されない波長でMtphagy Dyeを励起し、一方でMtphagy Dyeが励起されない波長でDeep Redの色素を励起する必要があります。［漏れ込みの事例］
① MitoBright Deep Redのみを添加した細胞（Mtphagy Dyeは添加していない条件）を用意した。
② MitoBright Deep Redの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下右図）。
③ Mtphagy Dyeの励起・蛍光波長で観察し、蛍光が観察されるかを確認した（下左図）。
④ ③にてMitoBright Deep Red由来の蛍光が観察された（下左図）。
※上記の様に蛍光の漏れ込みが確認された場合、下記をご参照ください。
[漏れ込み時の対処法]
○励起フィルター変更による対処
上記の確認例にある通りEx 561 nmではMitoBright Deep Redも励起されていることから、Mtphagy Dyeの励起波長をより500 nmに近いレーザーまたはフィルターに変更しMitoBright Deep Redが励起されない条件に設定する。○励起強度および蛍光検出感度の調整による対処
MitoBright Deep Redの蛍光がMtphagy Dyeの観察波長に漏れ込んでいる場合、蛍光が観察されないレベルまで励起強度または観察時の感度を下げる。
その後、変更したそれぞれの観察条件でMtphagy Dyeの蛍光が検出できることを確認する。[漏れ込みの確認方法]
Mtphagy Dye、Lyso Dye（リソソーム染色試薬）、MitoBright Deep Red（ミトコンドリア染色試薬）を用いた三重染色時の確認1. 細胞を3つのdishまたはwellに準備する。
（Mtphagy Dye、Lyso Dye、MitoBright Deep Redは、それぞれ異なるdishまたはwell中の細胞に加え染色する）
2. Mtphagy DyeおよびMitoBright Deep Redをそれぞれの細胞に添加する。（血清不含培地中）
3. 37℃で30分間培養する。
4. マイトファジー誘導条件（飢餓培養など）にて培養する。
5. Lyso Dyeを上記2.で使用していない細胞へ添加する。（血清不含培地中）
6. 37℃で30分間培養する。
7. それぞれの試薬に滴した励起波長、蛍光波長で観察する。
8. 使用している試薬以外の観察波長で、蛍光の漏れ込みがないことを確認する。［観察条件］
Lyso Dye：Ex 350-450 nm、Em 500-560 nm
Mtphagy Dye： Ex 500-560 nm、Em 670-730 nm
MitoBright Deep Red： Ex 640 nm、Em 656-700 nm
取扱条件／SDS
| 性状： | |
|---|---|
| Mtphagy Dye： | 試験適合 |
| Lyso Dye： | 試験適合 |
取扱条件
| 1.保存方法：冷蔵,遮光, 2.窒素置換,吸湿注意 |
関連製品
この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。
-
マイトファジー検出試薬
Mtphagy Dye
-
ミトコンドリア染色用色素 Green
MitoBright LT Green
-
老化細胞検出キット
Cellular Senescence Detection Kit – SPiDER-βGal
-
ミトコンドリア膜電位検出キット
JC-1 MitoMP Detection Kit