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CLAMP F405-Signal Boosting
CLAMP F405-Signal Boosting
- ラベル化剤
- 蛍光色素
- 顕微鏡
- FCM
免疫染色用青色蛍光基質
- 表面抗原の発現量を高感度に測定可能
- 高い選択性と滞留性を実現した染色技術
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製品コードC554 CLAMP F405-Signal Boosting
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
|---|---|
| 10 µl | ￥49,000 |
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マニュアル
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取扱説明書
日本語 
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取扱説明書 English
技術情報
測定原理
本技術では、細胞表面タンパク質に対する一次抗体、 β-Galactosidase標識二次抗体、およびβ-Galactosidaseの蛍光基質CLAMP F405を使用します。この蛍光基質は、無蛍光で細胞膜非透過性という性質を有しております。細胞表面タンパク質を介して細胞表面にβ-ガラクトシダーゼが存在すると、この蛍光基質が反応して、キノンメチド構造を有する化合物を生成します。この反応生成物は細胞膜透過性を有しているため、細胞内に入り込み、細胞内のチオールやアミノ基などと反応して共有結合を形成し、蛍光を発します。この反応は抗原の量に依存したβ-Galactosidaseの存在により、色素が反応し細胞内に蓄積していきます。
このようなメカニズムで、細胞表面タンパク質特異的かつ低発現な抗原に対しても高感度に細胞を蛍光染色することが可能となります。
参考文献：Noguchi, K. et al., “β-Galactosidase-Catalyzed Fluorescent Reporter Labeling of Living Cells for Sensitive Detection of Cell Surface Antigens”, Bioconjugate Chem., 2020, 31(7), 1740–1744.
よくある質問
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Q
染色実績のある細胞種、抗原を教えてください。
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A
下記実績がございます。
サンプルの種類 測定対象 測定抗原 測定方法 Cells HeLa cells CD44, GLUT1 蛍光イメージング、FCM Cells HeLa cells CD63, CD9 蛍光イメージング Cells A549 cells CD44 蛍光イメージング Cells HepG2 cells PD-L1 蛍光イメージング Cells HL60 cells CD44, CD33 蛍光イメージング、FCM Cells MOLT4 cells PD-1, CD44 FCM Cells T2 cells 自己抗体 FCM Cells myocyte cells 自己抗体 蛍光イメージング Cells bjab cells classI抗原 蛍光イメージング Cells 赤血球 表面抗原 FCM Cells マクロファージ化
させたTHP-1 細胞ABCA 1 蛍光イメージング tissue FFPE組織切片
(マウス：肝臓)Actin 蛍光イメージング tissue FFPE組織切片
(ヒト：腎臓)Actin 蛍光イメージング tissue FFPE組織切片
(ヒト：大腸、肺)p16 蛍光イメージング tissue FFPE組織切片
(ヒト：小腸)CD45,α-SMA 蛍光イメージング tissue 凍結組織切片
(マウス：脳)Iba1 蛍光イメージング
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Q
染色したサンプルは、保存できますか。
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A
生細胞の場合、染色後にPFA固定後、PBS中で冷蔵1週間保存可能です。また、固定細胞は染色後、PBS中で冷蔵１週間保存可能です。
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Q
内在性のβGalactosidaseは影響しませんか。
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A
生細胞の場合、CLAMP F405は膜透過性がないため、内在性のβGalactosidaseと反応しません。また、固定細胞・組織の場合、PBS中での染色を行う条件ではバックグラウンド蛍光の上昇は見られません。
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Q
βGal標識二次抗体は入手可能ですか。
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A
弊社では、一次抗体やβ-galactosidase標識抗体は販売しておりません。下記に使用実績のある抗体を示します。
Origin Company Catalog# human arigo biolaboratories ARG21670 mouse arigo biolaboratories ARG21521 Human arigo biolaboratories ARG23882 human arigo biolaboratories ARG24060 rat arigo biolaboratories ARG21691 mouse abcam ab136775 rat abcam ab136716 goat abcam ab136712 rabbit abcam ab136774 mouse abcam ab130781 mouse southernbiotech 1010-06 mouse southernbiotech 1020-06 mouse southernbiotech 1030-06 human southernbiotech 2010-06 human southernbiotech 2040-06 human southernbiotech 2060-06 rat southernbiotech 3030-06 rabbit southernbiotech 4010-06 mouse sigma aldrich 401607
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Q
Staining SolutionをPBS, HBSS以外で調製することは可能ですか。
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A
中性以外の緩衝液や培地等を用いた場合、染色反応に影響があるため使用できません。
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Q
推奨の測定条件を教えてください。
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A
落射型顕微鏡の場合：DAPI filter 励起フィルター320-380 nm, 蛍光フィルター435-485 nm
共焦点顕微鏡の場合：Ex = 405 nm, Em = 425-475 nm
フローサイトメーターの場合：励起 405nm、蛍光フィルター：BV421, Pacific Blue (450/50 nm)
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Q
CLAMP F405-Signal Boosting のDMSO溶液は、凍結融解を繰り返しても安定ですか。
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A
20回まで凍結融解を行っても性能に影響しないことを確認しております。
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Q
Staining Solution は調製して保存できますか。
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A
Staining Solutionは保存できません。用時調製してください。
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Q
バックグラウンド蛍光が高い場合はどうすればいいですか。
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A
マニュアルに記載している“抗体濃度の検討”に従い、適切な一次抗体・二次抗体の濃度を選択してください。また、浮遊細胞を染色する場合には、チューブローテーターなどを用いて懸濁状態を維持しながら染色することにより、バックグラウンドを下げることが可能です。
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Q
蛍光が観察されない場合は、どうすればいいですか。
-
A
Staining Solutionを改めて調製し、37℃で30-60分染色を行ってください。それでも蛍光が観察されない場合、一次/二次抗体の濃度が適切でなかった可能性がありますので、マニュアルに記載している“抗体濃度の検討”に従い、適切な抗体濃度を選択してください。
取扱条件
| 性状： | 無色～淡黄色液体 |
|---|---|
| 含量： | 試験適合 |
| 1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法：冷凍 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
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|---|---|
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