乙型肝炎病毒特异性检测

HBsAgGi抗体 & HBsAgGi ELISA试剂盒

◆HBsAgGi HBs抗原的糖链异构体

本产品是针对M-HBs的O型糖链修饰的PreS2的单克隆抗体，可特异性识别含有DNA的传染性病毒颗粒。

 

关于乙肝肝炎病毒及HBsAgGi

乙型肝炎病毒（HBV）作为一个全球性的健康问题，是传染性最强的病毒之一。

HBV包膜蛋白由三种表面抗原S-、M-和L-HBs组成，它们由含有PreS1、PreS2和S-结构域的HBsAg基因产生¹。 HBsAg被 N-聚糖和 O-聚糖高度糖基化^2,3。全聚糖结构分析显示，PreS2结构域中，只有在M-HBs上含有基因型C (gC) 中所包含的高度保守的O-糖基化位点，而L-HBs上却没有^4,5。

HBsAgGi，是能与HBsAg的糖链异构体相结合的重组单抗，其使用含有O型糖链的PreS2糖肽制备所得。与传统的识别所有病毒颗粒的HBsAg检测相比，HBsAgGi抗体可以特异性识别传染性HBV颗粒（DNA病毒粒子）。

 

产品信息

HBsAgGi Recombinant mouse IgG1, 50μg

产品编号	635-54381
对应基因分型	Genotype C
同种型（isotype）	小鼠IgG1
轻链	Kappa(κ)   型
包装	50   μg
用途	1.WB   2.HBV颗粒的免疫沉淀/分离   3.ELISA   4.HBV感染抑制测定   5.免疫组化
保存方法	短期请保存于4℃，长期请保存于-20℃，避免冻融。

HBsAgGi可特异性识别HBV颗粒中的M-HBsAg

HBV由衣壳蛋白质（HBsAg），HBV核心，HBV DNA组成。HBsAg的基因由PreS1（蓝），PreS2（红），S（黑）三个领域组成。S-HBsAgs约一半都被N型糖链所修饰，其余不含糖链。而M-HBsAg的PreS2结构域被O型糖链高度修饰，但L-HBsAg在同一位点却几乎不会被修饰。S-HBsAg存在数量最多，非传染性颗粒大部分由S-HBsAg所构成。而传染性HBV颗粒内核含有HBV DNA，被由所有类型的HBsAg所形成的衣壳所包裹。HBsAgGi可特异性的识别在乙肝分型c型M-HbsAg中所特有的O型糖链修饰PreS2领域。

HBsAgGi与基于S抗体的HBV颗粒识别

HBV患者的血清中含有的HBV DNA的传染性颗粒比非传染性颗粒要多得多。抗S抗体会对包括非传染性颗粒在内的所有HBV颗粒进行识别，而相比之下，HBsAgGi由于是识别含有M-HBsAg的传染性HBV颗粒，因此HBsAgGi检测不同于S抗体检测，可更准确地识别HBV患者。

在HBV感染患者的血清中，大部分（超过99.9%）的HBV颗粒是亚病毒颗粒（SVP），主要是S-HBs。相比之下，感染性颗粒（DNA 病毒粒子）在整个 HBV颗粒中含量比例不到0.1%。HBsAgGi可以从众多HBV颗粒中，高效区分含DNA颗粒的糖肽结构（粉色标记）。

HBsAgGi 和其他检测HBV的标志物对比

下表对HBV标志物进行了对比。qHBsAg和HBV-DNA是传统标志物，而HBcrAg和 HBV-RNA是新型标志物。列于表中的是目标HBV颗粒或分子。〇代表标志物可检测的颗粒或分子，×代表无法识别此标志物，或不推荐使用。

HBsAgGi 可检测含有 M-HBsAg 的颗粒，例如 DNA 或 RNA 病毒粒子。

应用实例

使用 HBsAgGi（左）和 PreS2（右）抗体进行Western Blot

・左: HBsAgGi-gC (RCA-001)，右: anti-PreS2 antibody   ・Lane1: S-HBs (CHO) 50 ng   ・Lane2: M-HBs (HEK293) 50 ng   ・Lane3: L-HBs (yeast) 50 ng   ・Lane4: serum (HBV patient) 1 μg   ・二抗: HRP-labeled anti-mouse IgG

HBsAgGi-gC（左）可以检测出M-HBs但不能检测L-HBs。而市售的PreS2抗体（右）对L-HBs的识别能力很强，对M-HBs的识别能力很弱。在HBV患者的人血清中，HBsAgGi-gC特异性识别M-HBs，而PreS2抗体识别M-HBs和L-HBs。

使用HBsAgGi-gC 包被的ELISA板 (RCEK-001) 和重组M-HBsAg 作为标准品进行ELISA法检测

・标准品: M-HBs (3.7 900 ng/mL)   ・检测样品: HBV患者血清 (2 µL)   ・血清 #1: HBsAg 6610 IU/mL, HBV DNA 3.1   ・血清 #2: HBsAg 8612 IU/mL, HBV DNA 0   ・血清 #3: HBsAg 36600 IU/mL, HBV DNA 8.3   ・检测：生物素化 HBsAgGi-gC 抗体和 HRP 标记的链霉亲和素

ELISA板用HBsAgGi-gC包被，用HEK293细胞中表达的M-HBs制备标准曲线。HBV患者的血清(#1-3)经稀释（100 µL中含有2 µL血清）并在同一ELISA板上进行测量。HBsAgGi-gC也可以检测NUC处理后的血清样本(HBV DNA=0)。

使用 HBsAgGi-gC 进行免疫沉淀

・原始样品: HBV 患者血清 (4.1 logIU/20 μL)   ・免疫沉淀条件：生物素化 HBsAgGi-gC (RCA-001) 2 μg，   ・链霉亲和素偶联磁珠10 μL/1 mL TBS-T, 4°C, 16 hours   ・HBV DNA 的定量：通过实时 PCR 检测20 μL 沉淀部分    ・(免疫沉淀) 和上清部分 (Sup) 中的 HBV DNA。

将HBV颗粒稀释至1 mL (4.1 logIU/20 μL) 并通过HBsAgGi-gC沉淀。在这种情况下，HBsAgGi-gC可以收集含有HBV DNA的HBV颗粒。

◆HBsAg糖链异构体检测用HBsAgGi ELISA试剂盒

本ELISA试剂盒含有可检测M-HBs的O型糖链糖基化修饰PreS2的单抗，可检测含有DNA的病毒颗粒。

试剂盒规格

产品编号	638-54371
对应基因分型	Genotype C
包装	96 Test

组成

HBsAgGi 包被96孔板：96 孔 (8孔板×12)
M-HBsAg标准品 (1 mL)	HRP标记HBsAgGi (10 mL)
稀释液 (24 mL)	TMB底物 (11 mL)
20X 洗涤液 (50 mL)	终止液   (12 mL)

ELISA使用方法

步骤1：HBV DNA颗粒首先被HBsAgGi抗体捕获。

步骤2：洗涤后，ELISA微孔上捕获的HBV颗粒将与HRP标记的HBsAgGi抗体进一步反应。

步骤3：进一步洗涤后，将HRP底物（TMB底物）加入孔中。孵育后，停止反应并测量450nm处的吸光度数值。

标准曲线

将试剂盒中所包含的标准品 M-HbsAg（800ng/mL）梯度稀释，调整为标准M-HBsAg（6.25～400ng/mL）溶液，制作标准曲线。

使用HBsAgGi ELISA试剂盒进行血清中HBsAgGi检测   检测样本：HBV患者3名的血清（1 µL），每个样本分别进行6次实验 标准M-HBsAgs (6.25 – 400 ng/mL)

样品	qHBsAg (IU/mL)	HBsAgGi (µg/mL)	CV (%)
血清 #1	2100	4.5	2.52
血清 #2	8200	8.92	2.65
血清 #3	2200	11.04	1.82

参考文献

1. Schadler and Hildt (2009) Viruses 1:185-209.

2. Schmitt et al. (2004) J Gen Virol 85:2045-2053.

3. Dobrica et al. (2020) Cells 9:1404.

4. Wagatsuma et al. (2018) Anal Chem 90:10196-10203.

5. Angata et al. (2021) Biochim Biophys Acta Gen Subj.  1866:130020  全文