荧光蛋白观察用、油浸物镜适用封片剂

Super Clear Mount封片剂

Super Clear Mount（RI:1.52）是将折射率（RI）调整到与浸油（RI:1.52）以及盖玻片（RI:1.52）折射率完全一致的产品。与传统封片剂相比，Super Clear Mount提高了深层部位的分辨率，可用于更高分辨率的分析。另外，用油镜观察时，即使在深部也可以维持稳定的亮度与分辨率（尤其是z分辨率），也可用于超分辨率的应用。

 

数据来源：国立研究开发法人理化学研究所 柯孟岑老师、今井猛老师（现九州大学医学研究院）

 

◆原理/性能表

图1. Super Clear Mount原理

	Super Clear Mount
封固后的硬化性	非硬化性*、可长期保存（长达1年）
折射率	1.52
适用样品厚度	0~200 μm
防止荧光蛋白褪色	+++**
存储温度	室温

*Super Clear Mount虽为非硬化性，但与空气接触部分会硬化。因此，可以通过滴入过量的Super Clear Mount，用多余部分硬化盖玻片、样本和载玻片。

**与其他市售品比较，+++：好。

◆特点（深层部位的高分辨率、高明亮度）

图2. 使用Super Clear Mount的深部高分辨率、高明亮度数据

（A）使用共聚焦显微镜（pinhole size，1 AU）与油浸物镜（100 ×：NA 1.40；WD 0.13 mm）进行荧光微球(diameter, 100 nm)PSF分析。

（B）lateral 以及 axial　FWHM（分辨率）数据

（A）深层部位可维持高分辨率。

（C）使用罗丹明色素的共聚焦axial scans数据

（A）深层部位可维持高分辨率。

◆防止荧光蛋白褪色的效果

在广泛的频谱范围内发挥保持信号与防褪色效果

图3. 使用Super Clear Mount的荧光蛋白防褪色效果数据

（A）荧光蛋白EGFP光褪色曲线图

（A）HEK293细胞中的荧光蛋白表达后，分别使用Super Clear Mount、PBS、其他公司商品（荧光蛋白适用）封片。

（A）持续使用水银灯照射并检测荧光亮度变化。物镜为20× dry（NA 0.4）。将照射开始时的荧光亮度设为1。

（B）各荧光蛋白荧光亮度的稳定性。

◆使用超分辨率显微镜的应用实例

使用超分辨率显微镜，实现深部超分辨率成像

图4. 使用Super Clear Mount，并用超分辨率显微镜观察

传统的封片剂会使画面失真，但使用Super Clear Mount能在深部获得高分辨率图像。

（A）使用超分辨率显微镜观察细胞膜上的丝状伪足延伸在HEK293T细胞的细胞膜上表达EGFP后，使用核染料、线粒体染料进行观察通过超分辨显微镜获取细胞膜上的丝状伪足延伸。

（B）使用超分辨率显微镜观察果蝇大脑

（A）果蝇大脑延髓神经节的神经细胞：使用荧光蛋白（GFP）标记Mi1，使用超分辨率观察（深度约为100 μm）。

（A）实现深层部分超分辨率成像。