pMW 219 DNA

克隆载体

◆原理

　　pMW219 DNA由 Cosmid lorist6、质粒 pBR322、质粒 pSC101、质粒 pUC19 的 DNA 片段构建而成。

　　下图展示了限制性内切酶图谱。

par：质粒稳定化区域
ori：DNA复制开始区域
rep：DNA复制调节基因
lacZ：β-半乳糖苷酶基因
Kmr：卡那霉素抗性基因

◆优点、特色

●　可用于克隆在多拷贝质粒里难以克隆的基因
●　（DNA代谢相关的蛋白编码基因，如，聚合酶、连接酶等基因）
●　在同一菌株内拥有pBR系、pUC系的DNA复制开始区域的质粒里，克隆了基因A的同时也想表达其他基因B时，可作为克隆基因B

●　的克隆载体
●　可用于克隆多克隆位点Hind III、Xba I、BamH I、Sma I、Xma I、Kpn I、Sac I、EcoR I的唯一切割部位
●　在多克隆位点里克隆基因，使用宿主大肠杆菌lacZ、N末端有缺陷的菌株（如JM109）并添加X-Gal和IPTG，重组体容易识别白色

●　菌落旁边蓝色的非重组体
●　可在卡那霉素培养基上选择转化的大肠杆菌

来源：有质粒 pMW219 的E. coli JM109

M.W.： 2.55×10⁶ Da（3,923 bp）

试剂制备：有质粒 pMW219 的E. coli JM109 通过溴化乙锭——氯化铯密度梯度离心分离

形状： 10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）, 1 mmol/L EDTA

浓度： 0.1~0.5 μg/μL

纯度：A260/A280 ≒ 1.8（此数值可能因批次不同有异）

碱基配列：EMBL, GenBank, DDBJ Accession No. AB005478（pMW219）

参考：pMW218・219 DNA的限制性内切酶图

参考文献：

• Bernardi, A. and Bernardi, F. : Nucleic      Acids Res., 12, 9415（1984）

• Yamaguchi, K. and Masamune, Y. : Mol. Gen.      Genet., 200, 362（1985）