从发根提取 DNA 试剂盒

ISOHAIR EASY

　　本试剂可简便地从发根提取 DNA。提取到的 DNA 溶液无需纯化，可直接用作核酸扩增法的模板。

◆特点

　　从人的发根提取 DNA，操作简便，仅需30分钟左右。

◆使用实例

　　准备实验材料（使用乙醇清洗毛发）

 

以 ISOHAIR EASY 为例

　　1. 取３根毛发（带发根），使用剪刀剪断发根约 1.5 cm 处。

　　　 ※确认取得的毛发带有发根（右图）。^*1

　　2. 往 1.5 mL 离心管注入 300 μL乙醇，再用镊子^*2放入３条发根。

　　3. 倒转混合几次后，简单清洗一下。取出发根，置于滤纸或无尘纸上，挥发乙醇。

提取核酸

　　1. 将 ISOHAIR EASY 置于室温，使其溶解，倒转混合均匀后，降速，并静置于冰块上。

　　2. 往 0.2 mL 离心管注入 50 μL ISOHAIR EASY，再放入３条发根。

　　3. 孵化

　　　55°C、孵化 20 分钟^*3

　　　94°C、孵化 10 分钟

　　　置于冰块上迅速冷却至４°C

　　4. 使用移液管混合后，将上清液移至 1.5 mL 离心管（尽量不取出不溶物），用作 DNA 提取液。^*4

　　　 ※使用本产品可从3根毛发提取 1～6.5 ng/μL 的 DNA 。^*5

　　*1　无法肉眼观察到发根的材料或自然脱落的毛发可能无法提取到足够的核酸。

　　*2　为防止污染，每次使用镊子前请使用乙醇清洗。

　　*3　使用 ISOHAIR EASY 孵化毛发时，无法用肉眼观察到变化，实际上，已有 DNA 析出。

　　*4　若不溶物浮于上方，难以取出上清液，请将全部溶液移至 1.5 mL 离心管，进行离心（12,000 rpm× 2 min）后，取出上清液。

              0.2 mL 离心管的耐离心力较低，不建议使用。

　　*5　根据个人发质，毛发提取 DNA 量有所不同。即使是同一个人的毛发，每根毛发的提取 DNA 量也不同。

 

◆Data 1：实时 PCR 法的利用

　　使用 ISOHAIR EASY 从 A、B、C ３人的各３根毛发配制成２μLDNA提取液，将其作为模板，使用GeneAce SYBR^® qPCR Mix α No ROX，进行实时PCR，检测出Gap基因(GAPDH)。（装置：LightCyclerR 96）

 

反应液组成：

2×GeneAce SYBR® qPCR Mix α No   ROX	12.5 µL
Primers（5 µM each）	2.0 µL
DNA提取液（发根基因组DNA）	2.0 µL
d.d.H2O	up to 25.0 µL

 

反应条件：

95°C	10 min.	酶活性化处理
95°C	30 sec.	45次循环
60°C	1 min.	–

 

•溶解曲线分析

　　＜结果＞

溶解曲线

标准曲线

使用Human genomic DNA（Clontech公司），以控制标准曲线。

◆Data 2：LAMP 法的利用

　　使用 ISOHAIR EASY 及 A、B ２人的各３根毛发配制成４μlDNA提取液，将其作为模板，使用 Isothermal Master Mix，利用 LAMP 引物扩增目标域（IL28B基因），并对其扩增产物进行会合曲线分析。（装置：Genie^® II）

Isothermal Master Mix	15.0 µL
LAMP Primers	2.5 µL
DNA提取液(发根基因组DNA)	4.0 µL
d.d.H2O	up to 25.0 µL
扩增	63°C、60分钟
会合曲线分析	98°C-75°C、0.05°C/秒

　　＜结果＞

溶解曲线

Annealing Derivative

（注）LAMP法的原理是使用4种引物及链置换DNA 合成酶，在一定温度下(65°C左右)，使其发生反应，从而扩增基因。

◆备注

• 本产品为实验研究用试剂。请勿用于医疗或其他用途。

◆产品列表

ISOHAIR  EASY (100次用量)
产品	包装	保存	备注
ISOHAIR EASY	1,000 μL × 5 瓶	-20°C

◆相关产品

• 毛发・爪提取人DNA试剂盒　ISOHAIR

• 教育用生物实验　ISOHAIR Jr.

Q：　　ISOHAIR（Code No. 315-03403）及 ISOHAIR EASY（Code No. 319-07781）的区别是什么？

A：　　「ISOHAIR」与「ISOHAIR EASY」的区别如下表所示。ISOHAIR EASY 可从发根简单地提取 DNA，必须使用有发根的样品。

	ISOHAIR	ISOHAIR EASY
样品	・人毛发：     发根样本取毛发的发根处１cm左右、毛干样本取发根样本的    前２～６cm。（亦可使用自然脱落的毛发） ・人指甲：     使用指甲钳剪取指甲，再使用剪刀剪取边约１mm的缘部分，    剪取２个（0.5mg）左右。 ・小鼠体毛：    使用剪刀剪取一撮（约５mg）体毛。 ・小鼠指甲：    剪取１～２mm长度的指甲。    ＊使用新鲜的样品回收量更高。	・人的发根：    取发根处 1.5 cm。（肉眼无法确认是否为发根的材料    或自然脱落的毛发可能无法提取足够的核酸。）
操作用时	・约１小时	・约30分钟
提取结果	・溶解毛发    左：第一次孵化后（55℃，20 分）    右：第二次孵化后（ 55℃，5～10 分）　 　＜完全溶解＞	・使用 ISOHAIR EASY 进行孵化时，肉眼看不出变化。   （肉眼看上去还没有溶解，实际上已有 DNA 析出）