ISHR Starting Kit

in situ Hybridization用试剂

　　本产品为首次使用in situ Hybridization（ISH）法的研究者提供石蜡包埋组织切片专用的练习试剂盒。包含RNA探针制备用试剂，ISH用试剂以及对照探针用的模板DNA，组织切片等。研究者也可以同时制备准备的ISH的样本。

 

◆使用次数

　　载玻片~20个×2次

 

◆试剂盒内容

RNA探针制备用试剂

制备对照探针用模板DNA

●　小鼠神经生长因子（NGF）基因（1 μg/μL）

●　反义链用··2 μL

●　正义链用······2 μL

强碱分解缓冲液 室温保存

●　0.1 mol/L 碳酸钠（pH10.2）··800 μL

Ethachinmate

●　Ethachinmate················10 μL

●　3 mol/L 醋酸钠（pH5.2）·····100 μL

RNA Synthesis Set

●　5×RNA Polymerase Buffer・・20 μL

●　250 mmol/L    NaCl・・・・・・・10 μL

●　10 mmol/L      rATP・・・・・・・・5 μL

●　10 mmol/L      rGTP・・・・・・・・5 μL

●　10 mmol/L      rCTP・・・・・・・・5 μL

●　10 mmol/L      rUTP・・・・・・・・5 μL

●　RNaselnhibitor・・・・・・・・5 μL

●　SP6 RNA Polymerase・・・・・ 5 μL

●　T7 RNA Polymerase・・・・・・5 μL

●　T3 RNA Polymerase・・・・・・5 μL

●　DNase（RT Grade）・・・・・・5 μL

●　H₂O・・・・・・・・・・・・500 μL

对照用组织切片

●　小鼠（雄性）成年 颌下腺 4个

In situ Hybridization用试剂（载玻片~20个×2次）

 

试剂名		组成
ISHR 1	PBS Buffer・・800 mL×2个	0.1 mol/L NaCl, 10 mmol/L 磷酸钠（pH 7.4）
ISHR 2	PBS（Glycine）Buffer・・・400 mL×1个	0.1 mol/L NaCl, 10 mmol/L 磷酸钠（pH 7.4），2 mg/mL Glycine
ISHR 3	Acetylation Buffer・・・・800 mL×1个	0.1 mol/L Triethanolamine（pH 8.0）
ISHR 4	Acetic Anhydｒide・・・・ 1 mL×2个	Acetic Anhydride
ISHR 5	4×SSC・・・・・・・・・・・1 L×2个	0.6 mol/L NaCl, 0.06 mol/L Sodium citrate
ISHR 6	Proteinase K Solution・・ 200 μL×1个	10 mg/mL Proteinase K
ISHR 7	Hybridization Buffer・・・93 μL×8个	50％ Formamide, 2×SSC, 1 μg/μL tRNA, 1 μg/μL Salmon   sperm DNA, 1 μg/μL BSA, 10％ Dextran sulfate
ISHR 8	1.2mol/L DTT Solution・・100 μL×1个	1.2 mol/L DTT
ISHR 9	NTE Buffer・・・・・・・・800 mL×1个	0.5 mol/L NaCl, 10 mmol/L Tris-HCl（pH 8.0）, 1 mmol/L   EDTA
ISHR 10	RNase A Solution・・・・0.40 mL×2个	10 mg/mL RNase A
ISHR 11	0.1×SSC・・・・・・・・・・600 mL×2个	15 mmol/L NaCl, 1.5 mmol/L Sodium citrate

※本产品不含有以下试剂：

固定剂，组织包埋试剂，载玻片涂层试剂，乙醇，二甲苯，甲酰胺，地高辛（DIG）标记和检测试剂，染色试剂，放射自显影试剂。

（※「ISHR 4」是特定麻药的原料和精神药物的原料）

<使用时注意>

根据切片的大小和数量，所需试剂量会变化。请购买单买短缺的单品。

参考文献

[1]　Noji, S. et al. : Nature, 350, 83 （1991）.
[2]　Pardue, M. L. : “In situ hybridization in Nucleic acid hybridization”, IRL Press （1985）.
[3]　Noji, S., Yamaai, T., Koyama, E. and Taniguchi, S. : Radioisotopes, 38, 366 （1989）.
[4]　Noji, S., Takahashi, N., Nohno, T., Koyama, E., Yamaai, T., Muramatsu, M. and Taniguchi, S. :Acta. Histochem.Cytochem., 

        23, 353 （1990）.

[5]　Kiyama, H., Emson, P. C. and Tohyama, M. :Neurosci. Res., 9, 1 （1990）.
[6]　中根一穂 : 「In situ ハイブリダイゼーション手法」（学際企画）（1989）.
[7]　野村慎太郎 : 実験医学, 7（13）（増刊）（1989）.
[8]　野地澄晴編 : 実験医学別冊 「免疫染色・in situ ハイブリダイゼーション」 （1997）.