人iPS 细胞·小鼠 ES 细胞冻存用

StemSure^® 细胞冻存液 Update！！

　　

　　本产品是可用于冻存以小鼠 ES 细胞为代表的各种通用细胞株的无血清型细胞冻存液。含 BSA 和 10% DMSO 。标准测试中用小鼠 ES 细胞 D3 株冻存、复苏，确认其细胞存活率。本产品采用缓慢冻存法冻存细胞，无需使用程序降温盒。

　　使用本产品对小鼠 ES 细胞 D3 株在 -80℃ 进行保存，可冻存２年；普通细胞在 -150℃ 下可冻存 30 个月，并且可维持很高的存活率。

　　另外，本产品已确认可用于冻存人 iPS 细胞。

 

◆特点

●  可在维持人 iPS 细胞、小鼠 ES 细胞未分化能力的状态下，直接进行冻存。

●  可在 -80℃ 下进行长时间冻存。

●  冻存的通用动物细胞株的细胞存活率好。

●  无血清型

●  无需自行配制试剂

●  无需使用程序降温盒

 

◆测试项目

●  细胞存活率时间（使用小鼠 ES 细胞 D3 株进行实验）

●  无菌实验

●  内毒素实验

●  支原体实验

 

◆使用方法

人 iPS 细胞的冻存

1.    冻存

①    去除人 iP S细胞培养皿中的营养液，用 PBS 清洗后，用 Accutase 等剥离细胞。

②    添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培养基（hPSC 培养基（+ROCKi）），用移液器吹打成单细胞。

③    将吹打分散的细胞悬浮液移至样本管，离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。

④    添加含 hPSC 培养基（+ROCKi）的培养基，用移液器悬浮。

⑤    计算细胞数量。

⑥    以１×10⁶ cells/管分注在细胞悬浮液保存管中。

⑦    离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清液。

⑧    使用 50 μL/管本产品进行悬浮，在 -80℃ 下进行冻存。

2.    复苏

①    在冻存管中添加 hPSC 培养基（+ROCKi），复苏冻结细胞（不使用温水浴法）。

②    离心（1,000 rpm，3 min，室温）后去除上清，再次添加 hPSC 培养基（+ROCKi），悬浮。

③    计算细胞数量。

④    在培养皿中按照２×10⁵ cells/6 cm 进行细胞培养。

小鼠ES细胞、通用动物细胞株的冻存

1.    冻存

①    收集细胞至样本管中。

②    离心，去除上清。

③    在样本管中加入本产品，悬浮。

④    分注至悬浮液保存管中。

⑤    将保存管在-80℃冻洁一晚。

⑥    保存于-150℃或-80℃

2.    复苏

①    将冻存管置于37℃的水浴槽中解冻。

②    在培养用的培养基中进行悬浮。

③    离心去除上清后用培养基进行重悬。

④    在培养容器内培养细胞。

 

◆人iPS 细胞 201B7 细胞系的冻存 Update！！

　　

　　将人 iPS 细胞 201B7 株分散为单细胞后，在 StemSure^® 冻存液中悬浮，并在-80℃下冻存４天。反复冻结、复苏３次之后，确认细胞存活率和各种未分化标记（Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81）的表达。

细胞生存率

未分化标记表达的确认

◆小鼠 ES 细胞 D3 细胞系的冻存

-150℃保存（30个月）

-80℃保存（24个月）

<冻存>

①    在 1 mL本产品中悬浮１~2×10⁶ cells，分注至冻存管中。

②    在 -80℃冻存１天后转移至-150℃冻存。或者在-80℃冻存。

<复苏>

③    在37℃的温浴槽中复苏。

④    在细胞培养基中悬浮、离心。

⑤    弃上清，用细胞培养基重悬细胞并进行培养。

 

○确认细胞集落形成

培养细胞数：500个细胞/孔（含胶原蛋白涂层的６孔板）

培养时间：10天

 

 

◆冻存通用动物细胞系后的细胞存活率

　　

　　用 StemSure^® 细胞冻存液冻存各种动物细胞株。可确认到冻存30个月后仍维持高存活率，且复苏后细胞可移植。

细胞种类	存活率（%）			细胞移植
	2个月	4个月	30个月
人
HeLa	97	93	97	○
293T	96	95	95	○
K562	91	84	84	○
灵长类
COS-7	97	93	92	○
Vero	95	94	91	○
狗
MDCK	98	99	100	○
小鼠
NIH/3T3	93	93	89	○
P19	93	76	77	○
STO	90	91	91	○
L929	94	90	91	○
仓鼠
CHO	97	96	98	○

<冻存>

①    在 1 mL本品中悬浮 1~2×10⁶ cells，分注至冻存管中。

②    在-80℃冻存1天后转移至-150℃分别冻存２个月、４个月、30个月。

<复苏>

③    在37℃的水浴槽中复苏。

④    细胞培养用培养基中悬浮、离心。

★其他冻存液★

产品编号	产品名称	规格	容量
031-24051	CultureSure® DMSO CultureSure® 二甲基亚砜	细胞培养用	10 mL×10
039-23511	CultureSure® Freezing Medium 通用动物细胞用冻存液	细胞培养用	10 mL

◆相关产品

★StemSure^® 系列★

　　本系列产品适用于培养 ES 细胞和 iPS 细胞。每个批次产品都适用小鼠 ES 细胞 D3 细胞系进行品质实验检测。

产品编号	产品名称	规格	容量
197-16275	StemSure® D-MEM (High Glucose) with Phenol Red and Sodium Pyruvate StemSure® D-MEM（高糖）含酚红和丙酮酸钠	细胞培养用	500 mL
191-18375	Stemsure® Serum Replacement   Stemsure® 血清替代品	细胞培养用	500 mL
198-15781	StemSure® 10 mmol/L 2-Mercaptoethanol Solution ( × 100) StemSure® 10 mmol/L 2-巯基乙醇	细胞培养用	100 mL
195-15791	StemSure® 50 mmol/L Monothioglycerol Solution ( × 100) StemSure® 50 mmol/L 硫代甘油	细胞培养用	100 mL
190-15805	StemSure® 0.1w/v% Gelatin Solution StemSure® 0.1w/v%明胶溶液	细胞培养用	500 mL
199-16051	StemSure® LIF, Mouse, recombinant, Solution StemSure® 白细胞抑制因子溶液，小鼠，重组	细胞培养用	106 units
195-16053	StemSure® LIF, Mouse,recombinant, Solution StemSure®   白细胞抑制因子溶液,小鼠，重组	细胞培养用	106 units×10

★rBC2LCN-FITC★

　　rBC2LCN 可特异性识别未分化的人ES/iPS细胞。将本产品添加至含有人ES/iPS细胞的培养液中，可对活性状态下的未分化细胞进行染色。<详情>

★液体培养基·细胞培养用试剂★

　　FUJIFILM Wako 充分准备了以液体培养基为代表的平衡盐溶液、细胞分离·分散用溶液、抗生物素溶液、细胞外基质等产品。<详情>

★ES·iPS细胞研究用试剂★

　　2007年 iPS 细胞树突发表后，许多与iPS细胞有关的文献被发表出来。FUJIFILM Wako 推出了在各个文献中都有所报道的与维持ES细胞·iPS细胞的未分化能和分化诱导相关的低分子化合物。<PDF下载>

★LIF，人，重组体，培养上清★

　　LIF 具有抑制小鼠 ES 细胞分化的作用，因此可在培养细胞时，用来维持 ES 细胞的未分化状态。<详情>

无动物源成分的干细胞冻存液，请点击：StemSure^® hPSC冻存液, AF