ERseeing ＜Endoplasmic Reticulum Green＞

对活细胞影响少，适用于长时间成像的ER染色试剂

 

本产品是活细胞成像用的不可逆ER染色试剂。与传统的荧光标记 Glibenclamide系ER染色试剂相比，对细胞功能的药理作用小，由于其不可逆性，更换培养基后也可进行观察。

※ 本产品是 funakoshi 基于京都大学工学研究科浜地格教授·田村朋则讲师的研究成果商品化的产品。

※ 本产品仅供研究使用。

◆现有 ER 染色试剂的问题点以及 ERseeing 的优势

过去通用的 ER 染色试剂是将荧光染料附着于在ER中特异表达的 K⁺ 通道拮抗剂 Glibenclamide 上，并广泛用于 ER 的可视化。然而，由于以下的问题，应用范围有限。

●  由于 Glibenclamide 的药理效果，通道活性被抑制，对细胞的影响大。

●  由于是可逆的拮抗剂，因此通过培养基交换等的清洗操作非常容易去除。

与之相对的，ERseeing 是一种新型ER染色试剂，具有与Rhodol绿色荧光染料相连的蛋白标记基团，对 ER 膜成分具有很高的亲和力。通过选择性地集中在 ER 上并用荧光基团标记 ER 蛋白，可以进行不可逆的染色。由于是不可逆的染色，染色后可更换含有 FBS 的培养基，因此可应用于任何的培养基和试剂处理环境下的长期成像。

	传统产品 （荧光标记 Glibenclamide）	本产品 （ERseeing）
原理	在 ER 中发现的 ATP 敏感性钾离子通道中的特异性配  体 Glibenclamide 用荧光标记后，在与受体结合时实  现可视化。	将蛋白标记基团添加到 Rhodol 绿色荧光染料中，  其对 ER 膜成分具有很高的亲和力。通过对 ER 上的  蛋白质进行荧光标记实现可视化。
对细胞的影响	由于 Glibenclamide 的药理效果会抑制钾离子通道，  影响细胞功能。此外，由于依赖钾离子通道表达量，  有些细胞可能无法染色。	不显示药理效果，对细胞功能几乎没有影响。
不清洗观察活细胞	良好	良好
清洗后观察活细胞	灵敏度低	良好
染色后固定	可以，但是存在部分染色灵敏度低的可能性	良好

◆原著论文

Fujisawa et al., J. Am. Chem. Soc., 140, 17060～17070 (2018). Chemical Profiling of the Endoplasmic Reticulum Proteome Using Designer Labeling Reagents.

 

◆特点

●  激发/荧光波长：509 nm/524 nm

    ※  可利用一般的绿色色素FTIC的观察条件

●  与传统的荧光标记 Glibenclamide 系染色试剂相比，可以很好地抑制对细胞的影响。

●  即使培养基中含有 ERseeing 也可以进行观察。

    ※  如果在培养基中长时间染色的话，或许会出现色素呈油滴状聚集等非特异性染色的情况。若想提高特异性，建议清洗后再观察。

●  由于是不可逆性染色，染色后可更换培养基。染色后可在含有FBS培养基等的任意培养基中成像。

●  活细胞染色后，也可固定后观察。还可以与免疫染色法组合使用。

    ※  本试剂不适用于固定后细胞的染色。染色请使用活细胞。

◆应用实例

■  ERM的激发·荧光光谱

激发光谱（蓝）和荧光光谱（绿）

※  适用于一般绿色荧光色素 FTIC 观察条件

■  验证 ER 特异性

通过与各种细胞器标记共染色评价本试剂的ER特异性。观察到 ERseeing（100 nM）与现有的 Glibenclamide 系 ER 染色试剂高度共定位（Pearson 相关系数 > 0.9）。另一方面，未观察到与溶酶体标记和线粒体标记的共定位。高尔基体标记观察到部分共定位，可能是本试剂标记的蛋白通过高尔基体转运，从 ER 转移至分泌途径。然而，添加 ER-Golgi 转运抑制剂的话会减少与高尔基体的共定位。（详情请参考原著论文）

■  评价细胞内滞留性

向无血清培养基培养的HeLa细胞内添加 ERseeing 以及传统的荧光标记 Glibenclamide，染色15 min 后进行观察（左）。然后，更换含有10%FBS的培养基再次观察。荧光标记 Glibenclamide 在清洗后荧光信号明显消失了，但是由于 ERseeing 是不可逆染色的，清洗后也能观察到很强的荧光信号。使用 ERseeing 进行 ER 染色后，可以在含 FBS 的培养基中培养并进行各种成像。