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SPiDER-βGal

03 分子生物学関連試薬

SPiDER-βGal

分子生物学関連試薬
細胞機能解析
細胞老化

β-galactosidaseの検出試薬

製品コード

SG02　 SPiDER-βGal
CAS番号

1824699-57-1
化学名

(2S,3R,4S,5R,6R)-2-{[3′-(Diethylamino)-5′-(fluoromethyl)-3H-spiro(isobenzofuran-1,9′-xanthen)-6′-yl]oxy}-6-(hydroxymethyl)tetrahydro-2H-pyran-3,4,5-triol
分子式・分子量

C₃₁H₃₄FNO₈=567.60

容　量	メーカー希望小売価格	富士フイルム和光純薬
20 μg x 3	￥44,600	343-09161

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アプリケーション β-ガラクトシダーゼ検出試薬（基質）の選択ガイド – 発生学 –
試薬選択ガイド β-ガラクトシダーゼ検出試薬（基質）の選択ガイド
試薬選択ガイド β-ガラクトシダーゼ検出試薬の比較データ

技術情報

原理

β-galactosidaseの検出試薬 SPiDER-βGal　同仁化学研究所

図1 SPiDER-βGalの細胞染色原理
SPiDER-βGal は生細胞膜を透過した後、細胞中のβ-galactosidaseによる酵素反応を受け、その中間体はタンパク質中の求核性基と共有結合を形成することで細胞内に滞留する。

参考文献

参考文献を表示する

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3) Y. Nakamura, A. Mochida, T. Nagaya, S. Okuyama, F. Ogata, P. L. Choyke, H. Kobayashi, "A topically-sprayable, activatable fluorescent and retaining probe, SPiDER-βGal for detecting cancer; Advantages of anchoring to cellular proteins after activation ", Oncotarget., 2017, doi: 10.18632/oncotarget.17080.
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よくある質問

Q 既存法に対する利点を教えてください。また、既存法との相関性はありますか？: A

①生細胞に適用できます。同様に生細胞に適用できるGFP融合タンパク質発現細胞を用いて相関性があることを確認しました。
②GFP法と比べて固定化後も蛍光観察ができます。
③既存の低分子β-ガラクトシダーゼ蛍光検出試薬と比較して、「細胞膜透過性」及び「細胞内滞留性」が優れるため、β-ガラクトシダーゼ発現細胞のみを一細胞レベルで染色できます。

Q Working solutionは、Hanks’ HEPES以外でも調製できますか？: A

PBS, HBSSなどが使用できます。

Q Working solutionは、どのくらい安定ですか？: A

保存できません。調整した日のうちに使用してください。

Q フローサイトメーターで使用可能ですか？: A

使用できます。β-ガラクトシダーゼ発現および未発現のHEK細胞の混合試料をフローサイトメーターで測定して、測り分けすることができました。取扱説明書に手順と条件を記載しています。

Q 固定後、試料の染色はできますか？: A

可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。固定化によりβ-ガラクトシダーゼ活性は低下しますので、固定化条件の検討を行ってください。

Q 推奨フィルターを教えてください。: A

以下のフィルターを推奨します。
・蛍光顕微鏡：　励起（500-540 nm）, 蛍光（500-540 nm）
・フローサイトメーター：　励起（488 nm）, 蛍光（500-540 nm）

取扱説明書の「励起/蛍光スペクトル」及び「上記フィルターを用いた蛍光顕微鏡測定例」もご参考ください。

Q 染色後、試料の固定はできますか？: A

可能です。 4%パラホルムアルデヒドやメタノールで固定化しても蛍光観察ができます。

Q 組織染色は可能ですか？: A

可能です。細胞染色と比べてWorking solution濃度を高くして染色条件をご検討ください（10-20 μmol/Lを目安）。組織染色用プロトコルをご用意しています。

取扱条件

規格
性状：	本品は赤色～赤紫色固体でアセトニトリル及びジメチルスルホキシドに溶ける。
純度(HPLC)：	85.0％以上
NMRスペクトル：	試験適合
蛍光スペクトル：	試験適合