Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

01 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬

Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

• 細胞増殖/細胞毒性測定用試薬
• ミトコンドリア関連
• 細胞内代謝

解糖系/酸化的リン酸化測定キット

• プレートリーダーを使用するため、高額な装置購入が不要
• 必要試薬は全て入ったAll in Oneのキット形態
• 実験操作の流れが解る詳細なプロトコル

• 製品コード
  G270　 Glycolysis/OXPHOS Assay Kit

<使用回数の目安>
使用回数は、行う実験の種類や検討方法によって異なります。
詳細は、よくある質問「1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。」をご確認ください。

• ご購入方法
• お問い合わせ

マニュアル

Q

1キットあたり測定可能なサンプル数を教えて下さい。

A

 

サンプルの測定をそれぞれn=3で行った場合、下記表に記載のサンプル数を測定頂けます。

	50 tests
	Lactate Assay			ATP Assay
	解糖能評価	代謝シフト評価	代謝経路依存性 評価	解糖能評価	代謝シフト評価	代謝経路依存性 評価
96 well プレート	48 well分		48 well分		48 well分	48 well分
測定可能なサンプル数 （n=3で行った場合）	6 サンプル		4 サンプル		8 サンプル	5 サンプル

※予備実験を行わない場合の最大測定可能サンプル数を記載しています。
※Lactate Assayを行う際、培地に血清を含む場合、バックグラウンドコントロールとして、使用した血清入り培地のみの測定試料を準備することをお勧めします。

 

	50 tests
	Lactate Assay			ATP Assay
	解糖能評価	代謝シフト評価	代謝経路依存性 評価	解糖能評価	代謝シフト評価	代謝経路依存性 評価
96 well プレート	9 well分		9 well分		21 well分	9 well分
測定可能なサンプル数 （n=3で行った場合）	5 サンプル		4 サンプル		4 サンプル	4 サンプル

※予備実験を行った場合の最大測定可能サンプル数を記載しています。
※Lactate Assayを行う際、培地に血清を含む場合、バックグラウンドコントロールとして、使用した血清入り培地のみの測定試料を準備することをお勧めします。

 

 

解糖能評価(Lactate Assay)のプレートレイアウト例(n=3)
(左:予備実験無し、右:予備実験あり)

代謝シフト評価(ATP Assay)のプレートレイアウト例(n=3)
(左:予備実験無し、右:予備実験あり)

代謝経路依存性評価のプレートレイアウト例(n=3)
(左:ATP Assay、右:Lactate Assay)(予備実験なし)

代謝経路依存性評価のプレートレイアウト例(n=3)
(左:ATP Assay、右:Lactate Assay)(予備実験あり)

Q

解糖能の評価において、検出されたサンプルの吸光度の値が培地のみ(blank)の吸光度と変わりません。原因と解決策を教えて下さい。

A

原因として、細胞から放出される乳酸量が少ないことが考えられます。播種する細胞数を増やし、インキュベート時間をさらに延ばしてください(3時間⇒5時間)。

Q

それぞれの評価において、ノーマライズは必要になりますか。また、ノーマライズする場合の方法を教えて下さい。

A

Oligomycinおよび2-DG処理5時間では、タンパク量によるノーマライズ前後での結果はほとんど変わらないことを確認しております。ただし、細胞の刺激に使用する薬剤処理等により、細胞数やタンパク量に大きな変化が無いことを予め確認してから本キットでの評価を行って下さい。

タンパク量でノーマライズする場合は、以下に示す図を参照下さい。
※タンパク量でノーマライズする場合、ATP Assayに使用する試薬の組成上、ATP AssayやLactate Assayに用いた同一細胞サンプルでの評価ができません。そのため、タンパク定量用に別途細胞サンプルをご準備下さい。

Q

Lactate Assayは450 nm以外の吸収フィルターで測定できますか。

A

450 nm以外では、490 nmのフィルターでの使用が可能です。ただし、吸光度値は450 nmで測定した場合と比較し低くなります。

Q

還元物質を含むサンプルは測定できますか。

A

サンプル中に還元性を持つ物質が含まれていると、色素WSTが誤発色して正確なlactateの変化が測定できません。培地に、還元性を持つ薬剤等を添加して実験を行う場合、バックグラウンドコントロールとして「細胞を含まない培地＋薬剤のみ」の試薬ブランクを一緒に測定して下さい。

Q

Working solutionはどのくらい安定ですか。

A

Working solutionは保存できません。用時調製して下さい。また、光に不安定であるため、調製後は遮光して下さい。遮光下室温で4時間安定です。

Q

発光シグナルはどの程度安定ですか。

A

発光シグナルは3時間安定です。ただし、温度と光が発光に影響しますので、すぐに測定できない場合は、遮光し温度を一定(25℃付近)に保てる場所で静置して下さい。

Q

測定用のプレートは白色以外のプレートを使用できますか。

A

測定はできますが、ブラックプレートや透明プレートを用いた場合、発光強度が下がります。また、透明プレートの場合、ブランクが高くなりますので、白色プレートを推奨しております。

この製品に関連する研究では、下記の関連製品も使われています。