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3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯 CAS 55750-62-4
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货号 | 4507 | 存储条件 | 在零下15度以下保存 |
| 规格 | 100 mg | 价格 | 1236 | |
| Ex (nm) | Em (nm) | |||
| 分子量 | 266.21 | 溶剂 | DMSO | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯是美国AAT Bioquest生产的荧光探针，3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯是不可裂解和膜可渗透的交联剂。它含有胺反应性琥珀酰亚胺酯（SE）和巯基反应性马来酰亚胺基团。NHS酯在pH 7-9下与伯胺反应形成稳定的酰胺键。马来酰亚胺与pH6.5-7.5的巯基反应形成稳定的硫醚键。SE-基团的3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯与载体蛋白上的赖氨酸残基反应，将它们转化为反应性马来酰亚胺。3-马来酰亚胺基丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯是广泛用于产生稳定的马来酰亚胺活化的载体蛋白的试剂，其可以自发地与巯基反应。或者，可将这些相对稳定的马来酰亚胺活化的中间体冻干并储存，以便随后与半抗原缀合。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的3-马来酰亚胺基丙酸羟基琥珀酰亚胺酯。
产品说明书
样品实验方案
1.制备含胺蛋白质的缀合缓冲液，蛋白质-NH 2 （缓冲液A）：磷酸盐缓冲盐水（PBS，pH 7.2）或pH值为7.2至8.0的其他无胺缓冲液可用于此。
注意：避免在缀合过程中含有伯胺（如Tris或甘氨酸）和巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。
2.制备含巯基蛋白质的缀合缓冲液，蛋白质-SH（缓冲液B）：pH为6.5-7.5的不含巯基的缓冲液可用于此。
注1：在缀合过程中避免使用含有巯基的缓冲液，因为它们会与预期的反应竞争。如有必要，将样品透析或脱盐至适当的缓冲液如PBS中。
注2：加入1-5mM EDTA有助于螯合二价金属，从而减少含巯基蛋白质中的二硫化物形成。
3.准备脱盐柱，将改性蛋白与过量交联剂和反应副产物分离。
4.在其缀合缓冲液A和缓冲液B中制备含胺蛋白质（蛋白质-NH2）和含巯基蛋白质（蛋白质-SH）溶液。
5.制备蛋白质1-NH 2 -SMCC（或SMCC Plus）缀合物：将适量的SMCC（或SMCC Plus）加入到缓冲液A中的含胺蛋白质溶液中。蛋白质-NH 2的浓度 决定SMCC（或SMCC Plus）摩尔过量使用。SMCC（或SMCC Plus）摩尔过量的建议体积如下，但最佳比例必须使用目标蛋白质通过实验确定：
- 蛋白质样品<1 mg / mL使用40-80倍摩尔过量。
- 1-4 mg / mL的蛋白质样品使用20倍摩尔过量。
- 5-10 mg / mL的蛋白质样品使用5至10倍摩尔过量。
6.将上述反应混合物在室温下孵育30-60分钟或在4℃孵育2-4小时。
注1：为了在完成前停止缀合反应，加入含有还原半胱氨酸的缓冲液，其浓度比Protein-SH的巯基浓度高几倍。
注2：可以通过电泳分离和随后的蛋白质染色来估计缀合效率。
7.使用用共轭缓冲液A平衡的脱盐柱除去多余的SMCC（或SMCC Plus）。
8.将含硫醇（蛋白-SH）和脱盐的含胺蛋白（蛋白-NH 2）SMCC（或SMCC Plus）缀合物混合并混合，摩尔比对应于最终缀合物所需的摩尔比，并与亲属一致两种蛋白质上存在的巯基和活化胺的数量。
注意：与马来酰亚胺部分反应的分子必须具有游离（还原的）巯基。对于蛋白质，在室温下使用5mM TCEP还原二硫键30分钟，然后通过合适的脱盐柱两次。请注意，蛋白质（例如抗体）可能会通过完全还原其二硫键而失活。可以用2-巯基乙胺·HCl（2-MEA）实现IgG中铰链区二硫键的选择性还原。可以使用N-琥珀酰亚胺基S-乙酰硫代乙酸酯（SATA）或2-亚氨基硫杂环戊烷·盐酸盐（Traut’s Reagent）将巯基化合物添加到分子中，后者可以修饰伯胺。
参考文献
N-glycan targeted gene delivery to the dendritic cell SIGN receptor
Authors: Kevin Anderson, Christian Fernandez, Kevin G Rice
Journal: Bioconjugate chemistry (2010): 1479–1485