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Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光
货号 | 13620 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
规格 | 200 Tests | 价格 | 2544 |
Ex (nm) | 655 | Em (nm) | |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
简要概述
Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 蓝色荧光是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒,鞘磷脂酶(SMase)是一种酶,负责将鞘磷脂(SM)切割成磷酸胆碱和神经酰胺。细胞中SMase的激活在细胞反应中起重要作用。已经基于它们的阳离子依赖性和最佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶(SMase)。它们是溶酶体酸性SMase,分泌锌依赖性酸性SMase,镁依赖性中性SMase,镁依赖性中性SMase和碱性SMase。在这五种类型中,溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。
我们的Amplite 比色鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了一种灵敏的方法。 该试剂盒使用我们专有的Amplite Blue作为比色探针,间接定量鞘磷脂酶(SMase)水解鞘磷脂(SM)产生的磷酸胆碱。它可用于测量血液,细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。655nm处的光吸收与磷酸胆碱的形成成比例,因此与SMase活性成比例。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析,与HTS液体处理仪器兼容。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的Amplite 比色法鞘磷脂酶检测试剂盒 。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 655nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
产品说明书
96孔板测定示例
概述
准备鞘磷脂工作溶液(50μL)
添加SMase标准品和/或SMase测试样品(50μL)
在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物(50μL)
在室温下孵育
持续1-2小时监测655nm处的吸光度
注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶(或瓶)。
操作方法
1.准备鞘磷脂工作液:
将50μL鞘磷脂(组分B)加入5mL SMase反应缓冲液(组分D)中,并充分混合。
注意:应及时使用鞘磷脂工作液。
2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品:
2.1将20μL含0.1%BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品(组分F)的小瓶中,制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。
注意:应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。
2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液(来自步骤2.1)加入1000μL测定缓冲液(组分E)中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。
注意:稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定,应在4小时内使用。
2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释,得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。
2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入白壁/透明底或透明96孔微孔板中,如说明书中的表1和2所示。
注意:根据需要处理您的细胞或组织样本。
2.5将50μL鞘磷脂工作溶液(来自步骤1)加入到鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(来自步骤2.4)。
2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。
3.准备200X Amplite Blue原液:
将100μLDMSO(组分G)加入到Amplite Blue(组分C)的小瓶中以制备200X Amplite Blue原液。
注意1:未使用的Amplite Blue原液应等分并保存在-20℃(避光)。
注意2:在硫醇(如DTT和2-巯基乙醇)存在下,Amplite Blue不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应低于10μM。Amplite Blue在高pH(> 8.5)下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。
4.准备鞘磷脂酶测定混合物:
4.1将5 mL测定缓冲液(组分E)加入酶混合物瓶(组分A)中,并充分混合。
4.2将50μL200XAmplite Blue原液(来自步骤3)加入到酶混合溶液瓶中(来自步骤4.1,在开始测定之前制备鞘磷脂酶测定混合物)。
注意1:应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。
注意2:混合物的混浊是正常的; 它不会干扰分析性能。
5.运行鞘磷脂酶测定:
5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物(来自步骤4.2)加入鞘磷脂酶标准品,空白对照和测试样品(来自步骤2.4)的每个孔中,以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。
注意:对于384孔板,每孔加入25μL样品,25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。
5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时(避光)。
5.3使用吸光度酶标仪在655 nm处检测吸光度的增加。
参考文献
Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
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Journal: The Anatomical Record (2017)
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Mitochondrial respiration controls lysosomal function during inflammatory T cell responses
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The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
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Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179
A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414
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