Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光

货号	13621	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	200 Tests	价格	2544
Ex (nm)	571	Em (nm)	584
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒 红色荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测鞘磷脂的试剂盒，阳离子依赖性和最佳作用pH鉴定了五种类型的鞘磷脂酶（SMase），它们是溶酶体酸性SMase，分泌锌依赖性酸性SMase，镁依赖性中性SMase，镁依赖性中性SMase和碱性SMase。 在这五种类型中，溶酶体酸性SMase和镁依赖性中性SMase被认为是细胞对应激反应中产生神经酰胺的主要候选物。

我们的Amplite 荧光鞘磷脂酶检测试剂盒为检测中性SMase活性或筛选其抑制剂提供了最灵敏的方法。该试剂盒使用Amplite Red作为荧光探针，间接定量鞘磷脂酶（SMase）水解鞘磷脂（SM）产生的磷酸胆碱。它可用于测量血液，细胞提取物或其他溶液中的SMase活性。Amplite Red的荧光强度与磷酸胆碱的形成成正比，因此与SMase活性成正比。Amplite Red使测定可在荧光强度模式或吸收模式下读取。该试剂盒是一种优化的“混合和读取”试验，可用于Smase活动的实时监测。我们的试剂盒13622已经开发用于监测酸性SMase活性。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法鞘磷脂酶检测试剂盒。 

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产品说明书

96孔板测定示例

概述

准备鞘磷脂工作溶液（50μL）

添加SMase标准品和/或SMase测试样品（50μL）

在37°C孵育1-2小时加入鞘磷脂酶测定混合物（50μL）

在室温下孵育持续1-2小时

监测Ex / Em = 540/590 nm处的荧光强度（在570 nm处截止）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶（或瓶）。

 

操作方法

 

1.准备鞘磷脂工作液：

将50μL鞘磷脂（组分B）加入5mL SMase反应缓冲液（组分D）中，并充分混合。

注意：应及时使用鞘磷脂工作液。

 

2.制备鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的样品：

2.1将20μL含0.1％BSA的PBS加入到鞘磷脂酶标准品（组分F）的小瓶中，制成10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液。

注意：应将未使用的鞘磷脂酶标准储备液等分并保存在-20℃。

2.2将1μL的10单位/ mL鞘磷脂酶标准储备液（来自步骤2.1）加入1000μL测定缓冲液（组分E）中以产生10mU / mL鞘磷脂酶标准品。

注意：稀释的鞘磷脂标准储备液不稳定，应在4小时内使用。

2.3取500μL10mU / mL鞘磷脂酶标准品进行1至2次连续稀释，得到5,2.5,1.25,0.625,0.313,0.156,0.078和0 mU / mL连续稀释的鞘磷脂酶标准品。

2.4将连续稀释的鞘磷脂酶标准品和/或含鞘磷脂酶的测试样品加入固体黑色96孔微量培养板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理您的细胞或组织样本。

2.5将50μL鞘磷脂工作溶液（来自步骤1）加入到鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（来自步骤2.4）。

2.6将反应混合物在37℃下孵育1-2小时。

 

3.准备200X Amplite™Red原液：

将80μLDMSO（组分G）加入到Amplite™Red（组分C）的小瓶中以制备200X Amplite™Red储备溶液。

注意1：未使用的Amplite™Red原液应等分并保存在-20℃（避光）。

注意2：在硫醇（如DTT和2-巯基乙醇）存在下，Amplite™Red不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的最终浓度应低于10μM。 Amplite™Red在高pH（> 8.5）下也不稳定。反应应在pH 7-8下进行。建议将pH 7.4用于测定缓冲液。

 

4.准备鞘磷脂酶测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分E）加入酶混合物瓶（组分A）中，并充分混合。

4.2在开始测定之前，将25μL的200X Amplite™Red储备溶液（来自步骤3）加入到酶混合物溶液瓶（来自步骤4.1）中以制备鞘磷脂酶测定混合物。

注意：应立即使用鞘磷脂酶试验混合物并避光; 较长的储存可能会导致高分析背景。

 

5.运行鞘磷脂酶测定：

5.1将50μL鞘磷脂酶测定混合物（来自步骤4.2）加入鞘磷脂酶标准品，空白对照和测试样品（来自步骤2.4）的每个孔中，以使总鞘磷脂酶测定体积为150μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品，25μL鞘磷脂工作溶液和25μL鞘磷脂酶测定混合物。

5.2在室温下孵育反应混合物1-2小时（避光）。

5.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540 / 590nm（在570nm处截止）观察荧光增加。

 

参考文献

Doxepin mitigates noise induced neuronal damage in primary auditory cortex of mice via suppression of acid sphingomyelinase/ceramide pathway
Authors: Yu-Ting Su, Xing-Xing Meng, Xi Zhang, Yi-Bin Guo, Hai-Jun Zhang, Yao-Ping Cheng, Xiao-Ping Xie, Yao-Ming Chang, Jun-Xiang Bao
Journal: The Anatomical Record (2017)

New Aspects of Silibinin Stereoisomers and their 3-O-galloyl Derivatives on Cytotoxicity and Ceramide Metabolism in Hep G2 hepatocarcinoma Cell Line
Authors: Mahdi Mashhadi Akbar Boojar, Shahram Ejtemaei Mehr, Mahsa Hassanipour, Masoud Mashhadi Akbar Boojar, Ahmad Reza Dehpour
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Riccardin DN induces lysosomal membrane permeabilization by inhibiting acid sphingomyelinase and interfering with sphingomyelin metabolism in vivo
Authors: Lin Li, Huanmin Niu, Bin Sun, Yanan Xiao, Wei Li, Huiqing Yuan, Hongxiang Lou
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Mitochondrial respiration controls lysosomal function during inflammatory T cell responses
Authors: Francesc Baixauli, Rebeca Acín-Pérez, Carolina Villarroya-Beltrí, Carla Mazzeo, Norman Nunez-Andrade, Enrique Gabandé-Rodriguez, Maria Dolores Ledesma, Alberto Blázquez, Miguel Angel Martin, Juan Manuel Falcón-Pérez
Journal: Cell metabolism (2015): 485–498

The ATP-binding cassette transporter-2 (ABCA2) regulates esterification of plasma membrane cholesterol by modulation of sphingolipid metabolism
Authors: Warren Davis
Journal: Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids (2014): 168–179

A high-throughput sphingomyelinase assay using natural substrate
Authors: Miao Xu, Ke Liu, Noel Southall, Juan J Marugan, Alan T Remaley, Wei Zheng
Journal: Analytical and bioanalytical chemistry (2012): 407–414

 

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