Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒

简要概述

Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测羟基丁酸的试剂盒，当血糖水平下降时，酮体由肝脏产生并在外周用作能量来源。两个主要的酮体是 β-羟基丁酸酯 (Beta-HB) 和乙酰乙酸酯，而丙酮是第三丰富的酮体。正常情况下，这两种主要的酮体在禁食和长时间运动时少量存在于血液中。在患有糖尿病、酒精或水杨酸中毒、激素缺乏、儿童低血糖等急性疾病状态的患者中，血液中会发现大量的酮体。血液中酮体的过度产生和积累（酮症）可导致病理性代谢性酸中毒（酮症酸中毒）。在极端情况下，酮症酸中毒可能是致命的。量化 Beta-HB 的血酮测试方法，血液中的主要酮体（约 75%）已被用于诊断和监测酮症酸中毒的治疗。 Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒提供灵敏的荧光分析，用于测量生物样品中的 Beta-HB 水平。该测定基于 Beta-HB 的酶偶联反应，其中产物 NADH 可以通过荧光 NADH 传感器进行特异性监测。荧光信号可以通过荧光酶标仪测量。使用此荧光β-羟基丁酸检测试剂盒，我们能够在 100 µL 反应体积中检测低至 1.4 µM 的 Beta-HB。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法β-羟基丁酸（酮体）检测试剂盒。 

产品说明书

样品实验方案

简要概述

1.准备β-HB工作溶液（50 µL）
2.添加β-HB标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

溶液制备 

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1. NAD储备溶液（100X）：
将100 µL H₂O加入NAD小瓶（组分C）中，制成100X NAD储备溶液。

2.β-HB标准溶液（100 mM）：
将1 mL H₂O或1X PBS缓冲液添加到小瓶β-HB标准溶液（组分D）中，制成100 mMβ-HB标准溶液。

2.标准溶液

β-HB标准
向990 µL 1X PBS缓冲液中加入10 µL 100 mMβ-HB标准储备液，以生成1000 µMβ-HB标准溶液（HB7）。取1000 µMβ-HB标准溶液（HB7），并在PBS中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的β-HB标准溶液（HB6-HB1）。 注意：稀释的β-HB标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

3.2 将50 µL NAD储备溶液添加到组分A + B的瓶子中，并充分混合以制成β-HB工作溶液（组分A + B + C）。 注意：此β-HB工作溶液不稳定，请立即使用，并避免直接暴露在光线下。

样品操作及实验分析

表1.底部透明的96孔微孔板中β-HB标准品和测试样品的布局。 HB =β-HB标准（HB1-HB7，1至1000 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将β-HB标准品（HB），空白对照（BL）和测试样品（TS）制成黑色96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。

2.将50 µLβ-HB工作溶液添加到β-HB标准品，空白对照和测试样品的每个孔中，以使总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µLβ-HB工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在激发= 530-570 nm，发射= 590-600 nm（最佳Ex / Em = 540/590 nm，在570 nm截止）下监测荧光的增加。

参考文献

A platform for assessing outer segment fate in primary human fetal RPE cultures
Authors: Qitao Zhang, Feriel Presswalla, Kecia Feathers, Xu Cao, Bret A Hughes, David N Zacks, Debra A Thompson, Jason ML Miller
Journal: Experimental eye research (2018)

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