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Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒
| 货号 | 13838 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 4488 |
| Ex (nm) | 575 | Em (nm) | |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测甘油的试剂盒，甘油3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间体。动物，真菌和植物使用G3P产生ATP。 它用于再生脑和骨骼肌细胞中的NAD +。 G3P与肥胖等脂质失衡疾病有关。 Amplite G3P分析试剂盒提供了量化G3P最灵敏的方法之一。 该试剂盒使用Amplite Red底物来量化G3P的浓度，其与酶偶联反应循环中形成的过氧化氢的浓度成比例。 该试剂盒是与HTS应用兼容的优化“混合和读取”格式。 如图1所示，它可在100μL检测体积内检测到12.5μMG3P。检测方法可以使用方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化而无需分离步骤。 使用吸光度酶标仪可以在〜576 +/- 5 nm处轻松读取信号。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 比色法甘油-3-磷酸检测试剂盒。
适用仪器
| 光吸收酶标仪 | |
| 吸收： | 575nm |
| 推荐孔板： | 透明底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.制备3-磷酸甘油工作溶液（50 µL）
2.加入3-磷酸甘油标准液或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测575 nm OD处的吸光度增加
溶液配制
1.储存溶液配制
所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。
1.2 G3P标准溶液（10 mM）：
将250 µL ddH2O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。
2.标准溶液配制
G3P标准
将100 µL 10 mM G3P标准储备液添加到900 µL 1X PBS缓冲液中，以生成1000 µM G3P标准溶液。 将200 µL的1000 µM G3P标准溶液加入800 µL的1X PBS缓冲液中，以生成200 µM的G3P标准溶液（CS7），然后进行1：2的系列稀释，以得到其余的G3P标准液（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。
3.工作溶液配制
3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。
3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液（200X）加入同一瓶酶混合液（组分B）中，制成G3P工作溶液（最终瓶应包含组分A，B和C）。 注意：应立即使用G3P工作溶液，并远离光线。
样品操作及实验分析
表1.在透明的底部96孔微孔板中的G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，6.25至200 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| CS1 | CS1 | … | … |
| CS2 | CS2 | … | … |
| CS3 | CS3 | ||
| CS4 | CS4 | ||
| CS5 | CS5 | ||
| CS6 | CS5 | ||
| CS7 | CS7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| CS1-CS7 | 50ul | 连续稀释（6.25至200 µM） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分C） |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备到96孔透明底部/黑色壁微孔板中。对于384孔板，请使用 每孔25 µL试剂，而不是50 µL。 注意：根据需要处理细胞或组织。
2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，将25 µL G3P工作溶液添加到每个孔中，总体积为50 µL /孔。
3.在避光的条件下，将反应在室温下孵育30分钟至1小时。
4.使用酶标仪在575 nm（或570 nm / 610 nm的比率）处监控吸光度的增加。
参考文献
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Journal: J Appl Genet (2011): 451
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Journal: Biochim Biophys Acta (2011): 1323
Rickettsia prowazekii uses an sn-glycerol-3-phosphate dehydrogenase and a novel dihydroxyacetone phosphate transport system to supply triose phosphate for phospholipid biosynthesis
Authors: Frohlich KM, Roberts RA, Housley NA, Audia JP.
Journal: J Bacteriol (2010): 4281
Design and synthesis of small molecule glycerol 3-phosphate acyltransferase inhibitors
Authors: Wydysh EA, Medghalchi SM, Vadlamudi A, Townsend CA.
Journal: J Med Chem (2009): 3317
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Authors: Chen H, Jiang JG, Wu GH.
Journal: J Agric Food Chem (2009): 6178
The presence of distal and proximal promoters for rat mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase
Authors: Aneja KK, Guha P, Shilpi RY, Chakraborty S, Schramm LM, Haldar D.
Journal: Arch Biochem Biophys (2008): 35
Aging and acyl-CoA binding protein alter mitochondrial glycerol-3-phosphate acyltransferase activity
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CTP:glycerol 3-phosphate cytidylyltransferase (TarD) from Staphylococcus aureus catalyzes the cytidylyl transfer via an ordered Bi-Bi reaction mechanism with micromolar K(m) values
Authors: Badurina DS, Zolli-Juran M, Brown ED.
Journal: Biochim Biophys Acta (2003): 196
Stimulation of rat liver mitochondrial sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase by polymyxin B via enhanced extraction of lysophosphatidic acid
Authors: Roy A, Guha N, Veras ID, Chakraborty S, Haldar D.
Journal: Lipids (2003): 965
Purification and characterization of cytosolic glycerol-3-phosphate dehydrogenase from skeletal muscle of jerboa (Jaculus orientalis)
Authors: Berrada W, Naya A, Iddar A, Bourhim N.
Journal: Mol Cell Biochem (2002): 117
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