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Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光
货号 | 20113 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 | |
规格 | 25 Tests | 价格 | 3840 | |
Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 517 | |
分子量 | 溶剂 | |||
产品详细介绍 |
简要概述
我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞,胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 此Cell Meter 活细胞caspase 6活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 6活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中激活的caspase 6活性,或用于筛选caspase 6抑制剂。 FAM-VEID-FMK,绿色标记试剂,可通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的caspase 6。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。
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适用仪器
流式细胞仪 | |
激发: | 见表1 |
发射: | 见表1 |
荧光显微镜 | |
激发: | 见表1 |
发射: | 见表1 |
推荐孔板: | 黑色透明 |
荧光酶标仪 | |
激发: | 见表1 |
发射: | 见表1 |
通道: | 黑色透明 |
读取模式: | 底读模式 |
表1:参数信息
FAM-VEID-FMK | 碘化丙啶 | hoechst 染料 | |
流式细胞仪 | 530/30nm滤波片(FITC通道) | 610/20nm滤波片(PE-Texas Red通道) | 450/40nm滤波片(Pacific Blue通道) |
荧光显微镜 | FITC 通道 | TRITC 通道 | DAPI通道 |
荧光酶标仪 | 490/525nm | 535/635nm | 350/461nm |
产品说明书
分离细胞的检测方案
概述
用密度为5×105到2×106个细胞/ mL的测试化合物制备细胞
将FAM-YVAD-FMK以1:150的比例加入到细胞溶液中
在室温下孵育1小时
将细胞沉淀,用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞
在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞
注:使用前将所有部件在室温下解冻。
操作方法
1.根据您的特异性诱导方案,将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度,但不超过2 x 106个细胞/ mL。同时,对于每种标记条件,以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子:
1)用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。
2)用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。
3)用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。
4)用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。
注意:应对每个细胞系进行单独评估,以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2.通过向FAM-YVAD-FMK(组分A)的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。
3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液(来自步骤1)以1:150的比例添加到细胞溶液中,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育1小时。
注1:对于FAM-YVAD-FMK标记,细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。
注2:对于粘附细胞,用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整,并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
注3:适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。
4.将细胞以约200g旋转5分钟,并用1mL洗涤缓冲液(组分B)洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。
注1:FAM-YVAD-FMK是荧光的,因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。
注2:对于分离的细胞,应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样,用于步骤6。
5.如果需要,用DNA染色标记细胞(如用于死细胞的碘化丙锭,或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst)。
6.通过荧光显微镜,流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度(对于碘化丙锭,Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料,Ex / Em = 350 / 461纳米)。
6.1对于流式细胞仪,使用FL1通道监测荧光强度(FL2通道用于碘化丙锭染色)。
6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。
注意:如果需要平衡细胞浓度,调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失,则此调整步骤是可选的。
6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞(用于碘化丙啶染色的TRITC通道,用于Hoechst染色的DAPI通道)。
6.4使用荧光酶标仪,使用Ex / Em = 490 / 525nm(在515nm处截止)底部读取模式监测荧光强度。
参考文献
Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58
Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12
Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407
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