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钙离子荧光探针Cal-520, 钠盐
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货号 | 21135 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 10×50 ug | 价格 | 3840 | |
| Ex (nm) | 493 | Em (nm) | 515 | |
| 分子量 | 840.54 | 溶剂 | Water | |
| 产品详细介绍 | ||||
简要概述
Cal-520®提供了一种功能强大的基于荧光的均质检测工具，用于检测细胞内钙的动员。Cal-520®AM是一种新型的荧光钙敏感染料，与现有的绿色钙指示剂（如Fluo-3 AM和Fluo-4 AM）相比，信噪比和细胞内滞留性显着提高。表达通过钙信号的感兴趣的GPCR或钙通道的细胞可以预装可穿过细胞膜的Cal-520®AM。一旦进入细胞，Cal-520 AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶裂解，从而产生带负电荷的荧光染料，并留在细胞内部。与钙结合后，其荧光大大增强。当细胞被激动剂刺激时，该受体发出信号释放细胞内钙，可以显着提高Cal-520®的荧光。Cal-520®AM具有长波长，高灵敏度和> 100倍荧光增强的特性，使其成为测量细胞钙的理想指示剂。高信噪比和更好的细胞内滞留性使Cal-520®钙测定成为评估GPCR和钙通道靶标以及筛选其激动剂和拮抗剂的强大工具。Cal-520®钠盐或钾盐是细胞中Cal-520®AM的水解盐。它选择性地与钙离子结合，并具有强烈依赖于钙浓度的荧光。
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钙离子篇：时间轴式讲解应用于钙离子检测的探针
产品说明书
使用Cal-520 AM，Cal-570 AM或Cal-630 AM酯类
1.使用Cal-520 ，Cal-590 或Cal-630 AM酯：
AM酯是非极性酯，其易于穿过活细胞膜，并且通过活细胞内的细胞酯酶快速水解。AM酯广泛用于非侵入性地将各种极性荧光探针装载到活细胞中。但是，使用AM酯时必须小心，因为它们易于水解，特别是在溶液中。它们应在使用前重新配制成高质量的无水二甲基亚砜（DMSO）。DMSO储备溶液可以在-20℃下干燥储存并避光。在这些条件下，AM酯应稳定数月。以下是我们推荐的将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯加入活细胞的方案。该方案仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。
a）在高质量无水DMSO中制备2至5 mM Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的储备溶液。
b）在实验当天，将Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM溶解在DMSO中或将等份的指示剂储备溶液解冻至室温。在Hanks和Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（0.04％Pluronic®F-127）中制备10至20μM的染料工作溶液。细胞加载所需指示剂的确切浓度必须凭经验确定。
注意：非离子型洗涤剂Pluronic®F-127有时用于增加Cal-520 AM，Cal-590 AM或Cal-630 AM酯的水溶性。
c）如果您的细胞（如CHO细胞）含有有机阴离子转运蛋白，可将丙磺舒（1-2 mM）加入染料工作溶液中（最终浓度为0.5-1 mM）以减少渗漏去酯化指标。
d）将等体积的染料工作溶液（来自步骤b或c）加入细胞板中。
e）将染料加载板在细胞培养箱中孵育60至90分钟，然后在室温下将板孵育另外30分钟。
注意：孵育染料超过2小时可以为某些细胞系提供更好的信号强度。
f）用HHBS或您选择的缓冲液（含有阴离子转运蛋白抑制剂，如1mM丙磺舒，如果适用）替换染料工作溶液，以去除多余的探针。
g）在Ex / Em = 490 / 525nm（对于Cal-520 AM），540 / 5000nm（对于Cal-590 AM）或600 / 640nm（对于Cal-630 AM）进行实验。
2.测量细胞内钙响应：
为了确定溶液的游离钙浓度或单波长钙指示剂的Kd，使用以下等式：
[Ca]free = Kd[F ─ Fmin]/Fmax ─ F]
其中F是实验钙水平下指示剂的荧光，Fmin是不存在钙时的荧光，Fmax是钙饱和探针的荧光。
解离常数（Kd）是探针对钙的亲和力的量度。 与校准溶液相比，荧光指示剂的Ca结合和光谱性质在细胞环境中变化非常显着。 细胞内指标的原位反应校准通常产生显着高于体外测定的Kd值。 通过在离子载体如A-23187,4-溴A-23187和离子霉素存在下将加载的细胞暴露于受控的Ca2+缓冲液来进行原位校准。 或者，细胞透化剂如洋地黄皂苷或X-100可用于将指示剂暴露于细胞外培养基的受控Ca2+水平。
参考文献
A Critical Period for the Rapid Modification of Synaptic Properties at the VPm Relay Synapse
Authors: Libiao Pan, Junhua Yang, Qian Yang, Xiaomeng Wang, Liya Zhu, Yali Liu, Huifang Lou, Chou Xu, Ying Shen, Hao Wang
Journal: Frontiers in molecular neuroscience (2017)
Advances in Two-Photon Scanning and Scanless Microscopy Technologies for Functional Neural Circuit Imaging
Authors: Simon R Schultz, Caroline S Copeland, Amanda J Foust, Peter Quicke, Renaud Schuck
Journal: Proceedings of the IEEE (2017): 139–157
Bidirectional communication between sensory neurons and osteoblasts in an in vitro co-culture system
Authors: Daisuke Kodama, Takao Hirai, Hisataka Kondo, Kazunori Hamamura, Akifumi Togari
Journal: FEBS Letters (2017)
Ca 2+ signals initiate at immobile IP 3 receptors adjacent to ER-plasma membrane junctions
Authors: Nagendra Babu Thillaiappan, Alap P Chavda, Stephen C Tovey, David L Prole, Colin W Taylor
Journal: Nature Communications (2017): 1505
Calcium Imaging Across Large Areas of Intact Vascular Endothelium Reveals Stimulus-Specific Sensory Cells
Authors: Matthew D Lee, Calum Wilson, John G McCarron
Journal: The FASEB Journal (2017): 1005–8
Calcium transient assays for compound screening with human iPSC-derived cardiomyocytes: Evaluating new tools
Authors: Neil J Daily, Radleigh Santos, Joseph Vecchi, Pinar Kemanli, Tetsuro Wakatsuki
Journal: Journal of evolving stem cell research (2017): 1
Characterization of postsynaptic calcium signals in the pyramidal neurons of anterior cingulate cortex
Authors: Xu-Hui Li, Qian Song, Tao Chen, Min Zhuo
Journal: Molecular Pain (2017): 1744806917719847
Direct measurement of TRPV4 and PIEZO1 activity reveals multiple mechanotransduction pathways in chondrocytes
Authors: M Rocio Servin-Vences, Mirko Moroni, Gary R Lewin, Kate Poole
Journal: eLife (2017): e21074
Expression of the GluA2 subunit of glutamate receptors is required for the normal dendritic differentiation of cerebellar Purkinje cells
Authors: Masahiko Tanaka, Tomomi Senda, Naohide Hirashima
Journal: Neuroscience Letters (2017)
Extensive Ca 2+ leak through K4750Q cardiac ryanodine receptors caused by cytosolic and luminal Ca 2+ hypersensitivity
Authors: Akira Uehara, Takashi Murayama, Midori Yasukochi, Michael Fill, Minoru Horie, Toru Okamoto, Yoshiharu Matsuura, Kiyoko Uehara, Takahiro Fujimoto, Takashi Sakurai
Journal: The Journal of general physiology (2017): 199–218
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