Amplite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对酶标仪进行了优化*

简要概述

Amplite 荧光总核酸定量试剂盒是以简单、准确的方式检测核酸总量，包括双链 DNA (dsDNA)、单链 DNA (ssDNA) 和 RNA。 该试剂盒包含所有基本试剂，包括 Helixyte Green All 试剂、稀释缓冲液和预稀释的 DNA 标准品。 Helixyte Green All 试剂是一种灵敏的荧光核酸探针，用于测量样品中可能含有 dsDNA、ssDNA、RNA 和长寡核苷酸的核酸总量。 Helixyte Green All 试剂不加选择地与 dsDNA、ssDNA 和 RNA 结合。 Amplite 荧光总核酸定量试剂盒针对使用荧光酶标仪测量核酸总量进行了优化。

适用仪器

产品说明书

实验方案

概述

1.添加 100 µL 核酸标准品或测试样品
2.添加 100 µL Helixyte Green ALL溶液
3.在室温下孵育 5-10 分钟
4.检测Ex/Em=490/525 nm 处的荧光强度

注：以下方案是使用 Helixyte Green All 定量总核酸含量的示例。 打开前让所有成分升温至室温。 没有关于 Helixyte Green All（总核酸染色剂）的致突变性或毒性的数据。 由于该试剂与核酸结合，因此应将其视为潜在的诱变剂并小心处理。 应特别小心处理 DMSO 原液，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

溶液制备
核酸标准品
将 10 uL 100 ug/mL 核酸标准溶液（组分 C）加入 190 uL 检测缓冲液（组分 B）中，得到 5 ug/mL 标准溶液，然后进行 1:3 稀释，得到连续稀释的核酸标准溶液（ NS1-NS7)。请使用AAT Bioquest连续稀释计算器以方便数据处理。

Helixyte Green ALL工作溶液
将 100 μL Helixyte Green All（组分 A）加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，制备 Helixyte Green All 工作溶液。 通过用箔纸覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注意：建议在塑料容器而不是玻璃容器中制备工作溶液，因为染料可能会吸附到玻璃表面。 为获得最佳效果，该溶液应在稀释后几小时内使用。
注意：10 mL 的工作溶液对于一个 96 孔板就足够了。

操作步骤

表 1. 96 孔黑色微孔板中核酸标准品和测试样品的布局。 NS= 核酸标准品（NS1 – NS7，1667 至 2.3 ng/mL）； BL=空白； TS=测试样品

表2.各孔试剂组成

1.根据表 1 和 2 中提供的布局准备核酸标准 (NS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 µL 试剂，而不是 100 µL。
2.将 100 µL Helixyte Green All 工作溶液加入核酸标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使测定体积为 200 µL/孔。 对于 384 孔板，将 25 µL Helixyte Green All 工作溶液添加到每个孔中，以获得 50 µL/孔的总体积。
3.在室温下孵育反应 5 到 10 分钟，避光。
4.使用 Ex/Em = 490/525 nm（Cutoff在 515 nm ）处的荧光酶标仪检测荧光增加。

图示

图 1. 使用 Amlite 荧光总核酸定量试剂盒在 96 孔黑色板中测量总核酸剂量反应。

参考文献

Assessing Nucleic Acid: Cationic Nanoparticle Interaction for Gene Delivery.
Authors: Singh, Moganavelli
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2021): 43-55

High throughput quantification of short nucleic acid samples by capillary electrophoresis with automated data processing.
Authors: Dangerfield, Tyler L and Huang, Nathan Z and Johnson, Kenneth A
Journal: Analytical biochemistry (2021): 114239

High-resolution visualization and quantification of nucleic acid-based therapeutics in cells and tissues using Nanoscale secondary ion mass spectrometry (NanoSIMS).
Authors: He, Cuiwen and Migawa, Michael T and Chen, Kai and Weston, Thomas A and Tanowitz, Michael and Song, Wenxin and Guagliardo, Paul and Iyer, K Swaminathan and Bennett, C Frank and Fong, Loren G and Seth, Punit P and Young, Stephen G and Jiang, Haibo
Journal: Nucleic acids research (2021): 1-14

Integrated microneedle-smartphone nucleic acid amplification platform for in-field diagnosis of plant diseases.
Authors: Paul, Rajesh and Ostermann, Emily and Chen, Yuting and Saville, Amanda C and Yang, Yuming and Gu, Zhen and Whitfield, Anna E and Ristaino, Jean B and Wei, Qingshan
Journal: Biosensors & bioelectronics (2021): 113312

Nodal metastatic load in papillary thyroid carcinoma. Morphological and molecular analysis with one-step nucleic acid amplification on more than 550 lymph nodes.
Authors: Iglesias, Carmela and González, Oscar and Temprana-Salvador, Jordi and García-Burillo, Amparo and Caubet, Enric and Ramón Y Cajal, Santiago and Zafon, Carles
Journal: Endocrinologia, diabetes y nutricion (2021): 346-353

Open-Source Miniature Fluorimeter to Monitor Real-Time Isothermal Nucleic Acid Amplification Reactions in Resource-Limited Settings.
Authors: Coole, Jackson and Kortum, Alex and Tang, Yubo and Vohra, Imran and Maker, Yajur and Kundrod, Kathryn and Natoli, Mary and Richards-Kortum, Rebecca
Journal: Journal of visualized experiments : JoVE (2021)

Quantifying viscosity and surface tension of multicomponent protein-nucleic acid condensates.
Authors: Alshareedah, Ibraheem and Thurston, George M and Banerjee, Priya R
Journal: Biophysical journal (2021): 1161-1169

Role of highly sensitive nucleic acid amplification testing for plasma cytomegalovirus DNA load in diagnosis of cytomegalovirus gastrointestinal disease among kidney transplant recipients.
Authors: Taksinwarajarn, Touchapong and Sobhonslidsuk, Abhasnee and Kantachuvesiri, Surasak and Thongprayoon, Charat and Cheungpasitporn, Wisit and Bruminhent, Jackrapong
Journal: Transplant infectious disease : an official journal of the Transplantation Society (2021): e13635

A highly sensitive and rapid enzymatic method using a biochemical automated analyzer to detect inorganic pyrophosphate generated by nucleic acid sequence-based amplification.
Authors: Isobe, Atsushi and Iwabuchi, Yuki and Yajima, Miki and Sakasegawa, Shin-Ichi and Yamaguchi, Yoshitaka and Seimiya, Masanori and Umemura, Tsukuru and Osawa, Susumu
Journal: Clinica chimica acta; international journal of clinical chemistry (2020): 298-305

Detection of Locked Nucleic Acid Gapmers from Mouse Muscle Samples Using ELISA.
Authors: Lim, Kenji Rowel Q and Nguyen, Quynh and Yokota, Toshifumi
Journal: Methods in molecular biology (Clifton, N.J.) (2020): 233-239