Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光

	货号	22840	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	100 Tests	价格	3192
	Ex (nm)		Em (nm)
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光是美国AAT Bioquest研发的用于细胞凋亡和坏死检测的试剂盒，该特定试剂盒旨在同时检测细胞凋亡，坏死和健康。细胞凋亡是一种自主细胞拆解的活跃程序化过程，可避免引发炎症。在细胞凋亡中，磷脂酰丝氨酸（PS）被转移到质膜的外部小叶。作为细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测细胞表面上磷脂酰丝氨酸的出现。该试剂盒中使用的PS传感器在与膜PS结合后具有绿色荧光（Ex / Em = 490 / 525nm）。坏死已被描述为由于环境扰动导致的被动，意外细胞死亡，其中炎性细胞内容物不受控制地释放。如通过膜不可渗透的7-AAD（Ex / Em = 546 / 647nm）标记细胞核的能力所证明的，质膜完整性的丧失代表了证明晚期细胞凋亡和坏死的直接方法。此外，该试剂盒还提供活细胞质标记染料，CytoCalcein Violet 450（Ex / Em = 405/450 nm），用于标记活细胞的细胞质。该试剂盒经过优化，可用流式细胞仪或荧光显微镜同时检测细胞凋亡（绿色），坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。金畔生物是AAT Bioquest 的中国代理商，为您提供最优质的细胞凋亡和坏死检测试剂盒。

产品说明书

样品分析方案

概述

用测试化合物（200μL/样品）制备细胞

添加Apopxin Green测定溶液

在室温下孵育30-60分钟

用流式细胞仪或荧光显微镜分析

在Ex / Em = 490 / 525nm（细胞凋亡），550 / 650nm（坏死）和405 / 450nm（健康细胞）

 

操作步骤

1.用Apopxin Green制备和孵育细胞：

1.1用测试化合物将细胞维持一段所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

1.2离心细胞，得到1-5×105个细胞/管。

1.3将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

1.4将2μLApopxin Green（组分A）加入细胞中。

可选1：将1μL的200X 7-AAD（组分C）加入细胞中用于坏死细胞。

可选2：将100μLDMSO加入到CytoCalcein Violet 450（组分D）的小瓶中，得到200X CytoCalcein Violet 450原液，然后向细胞中加入1μL进行健康细胞染色。

1.5在室温下孵育30至60分钟（避光）。

1.6在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入300μL测定缓冲液（组分B）以增加体积（参见下面的步骤1.7）。

1.7使用流式细胞仪或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 525nm处荧光强度的细胞凋亡，550 / 650nm处坏死，以及405/450nm处的健康细胞（参见下面的步骤2或3）。

 

2.使用流式细胞仪分析细胞：

使用FL1通道（Ex / Em = 490/525 nm）定量Apopxin Green结合，并在添加7-AAD时使用FL3通道（Ex / Em = 490/650 nm）测量细胞活力，和/或 当将CytoCalcein Violet 450加入细胞中时，使用Ex / Em = 405 / 450nm。

注意：Apopxin 与贴壁细胞结合的流式细胞术分析未经常检测，因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。 然而，Casiola-Rosen等人先前报道了利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法。 和van Engelend等人（见参考文献1和2）。

 

3.使用荧光显微镜分析细胞：

3.1从步骤1.5中移取细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。将细胞添加到载玻片盖玻片或黑色墙壁/透明底96孔微孔板的载玻片上。

注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑墙/透明底96孔微孔板）上培养细胞。与Apopxin Green孵育（步骤1.5）后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加回到盖玻片（或黑色壁/透明底96孔微孔板）中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与Apopxin Green温育后，细胞也可以固定在2％甲醛中，并在显微镜下观察。

3.2使用FITC通道在荧光显微镜下用Apopxin Green分析凋亡细胞。当添加7-AAD时使用德克萨斯红色通道测量细胞活力，和当将CytoCalcein Violet 450添加到细胞中时测量/或紫色通道。质膜上的绿色染色表明Apopxin Green与细胞表面的PS结合。

 

数据分析

        在活的非凋亡细胞中，Apopxin Green检测非诱导细胞中的先天性细胞凋亡，其通常为所有细胞的2-6％。在凋亡细胞中，Apopxin Green与磷脂酰丝氨酸结合，磷脂酰丝氨酸位于细胞膜的外部小叶上，导致染色强度增加。

图1.在Jurkat细胞中检测Apopxin Green与磷脂酰丝氨酸的结合活性。 A.在37℃，5％CO 2培养箱中不用（A.蓝色）或用1μM星形孢菌素（A.Red）处理Jurkat细胞5小时，然后加载Apopxin Green 30分钟。使用FL1通道，用FACSCalibur（Becton Dickinson，San Jose，CA）流式细胞仪测量Apopxin Green的荧光强度。 B和C：荧光图像显示活细胞（蓝色，CytoCalcein Violet 450染色），细胞凋亡（绿色，Apopxin Green染色）和Jurkat细胞坏死（红色，7-AAD染色指示）用1μM星形孢菌素处理3小时。用Olympus荧光显微镜分别通过Violet，FITC和TRITC通道拍摄细胞的荧光图像。如上所示，合并来自相同细胞群的每个通道的各个图像。 B：非诱导对照细胞; C：星形孢菌素诱导的细胞的三重染色。

 

参考文献

Anthocyanin-rich blackcurrant extract inhibits proliferation of the MCF10A healthy human breast epithelial cell line through induction of G0/G1 arrest and apoptosis
Authors: Naoki Nanashima, Kayo Horie, Mitsuru Chiba, Manabu Nakano, Hayato Maeda, Toshiya Nakamura
Journal: Molecular Medicine Reports (2017): 6134–6141

Clusterin signals via ApoER2/VLDLR and induces meiosis of male germ cells
Authors: Muhammad Assad Riaz, Angelika Stammler, Mareike Borgers, Lutz Konrad
Journal: American Journal of Translational Research (2017): 1266

Detecting Apoptosis, Autophagy, and Necrosis
Authors: Jack Coleman, Rui Liu, Kathy Wang, Arun Kumar
Journal: Apoptosis Methods in Toxicology (2016): 77–92

 

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Cell Meter 细胞凋亡和细胞坏死检测试剂盒 三色荧光	Cat#22843