Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光

Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光

货号	11502	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
规格	500 Tests	价格	3192
Ex (nm)	648	Em (nm)	668
分子量		溶剂
产品详细介绍

简要概述

Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒 近红外荧光 是美国AAT Bioquest生产的用于检测过氧化氢的试剂盒，过氧化氢（H₂O₂）是一种活性氧代谢副产物，可作为许多氧化应激相关状态的关键调节剂。它涉及许多与哮喘，动脉粥样硬化，糖尿病血管病变，骨质疏松症，一些神经退行性疾病和唐氏综合症有关的生物学事件。也许H₂O₂生物学最有趣的方面是最近的报告，即抗体具有将分子氧转化为过氧化氢的能力，有助于免疫系统的正常识别和破坏过程。测量这种活性物质将有助于确定氧化应激如何调节各种细胞内途径。

这种Amplite 荧光过氧化氢测定试剂盒使用我们的非荧光Amplite 红色过氧化物酶底物来量化溶液和细胞提取物中的过氧化氢。它还可用于通过酶偶联反应检测多种氧化酶活性。该试剂盒是一种优化的“混合和读数”分析，与HTS液体处理仪器兼容。它提供灵敏的一步荧光测定法，可在100μL测定体积（30 nM，图1）中检测少至3皮摩尔的H₂O₂。该测定可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。 其信号可通过Ex / Em = ~540 / 590 nm的荧光酶标仪或~570 nm的吸光度酶标仪轻松读取。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法过氧化氢检测试剂盒。

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产品说明书

96孔板的测定方案

概述

准备H₂O₂反应混合物（50μL）

加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10-30分钟在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备库存解决方案：

1.1100X Amplite 红色过氧化物酶底物原液：将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在-20℃重新冷冻。

注意：避免反复冻融循环并避免光照。

1.220U / mL过氧化物酶储备溶液：将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中。

注意：未使用的HRP溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20 ℃。

1.320mM H₂O₂储备溶液：将22.7L的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977L的测定缓冲液（组分C）中。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

2.准备H₂O₂反应混合物：

 

3.准备H₂O₂标准品（0至10μM）的连续稀释液：

注意1：在存硫醇如DTT和β-巯基乙醇的情况下，组分A不稳定。 高于10M（最终浓度）的硫醇将显着降低测定动态范围。

注意2：NADH和谷胱甘肽（还原形式：GSH）可能会干扰检测。

3.1将1μL20mM H₂O₂溶液（来自步骤1.3）加入1999μL测定缓冲液（组分C）中，得到10μMH₂O₂标准品。

3.2取200μL10μMH₂O₂标准品进行1：3连续稀释，得到3，1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μMH₂O₂标准品系列稀释液。

3.3如说明书中表2和3中所述，将H₂O₂标准品和含H₂O₂的测试样品的系列稀释液加入到固体黑色96孔微量培养板中。

 

4.在上清液反应中进行H₂O₂测定：

4.1将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤2）加入到H₂O₂标准品，空白对照和测试样品的每个孔中（参见步骤3.3），使总H₂O₂测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLH₂O₂反应混合物。

4.2在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

4.3在Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）下用荧光板读数器监测荧光增加。

注意：也可以将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在576±5nm的波长下读数。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。

 

5.对细胞进行H₂O₂检测：

Amplite 荧光过氧化氢检测试剂盒可用于测量细胞中H₂O₂的释放。 以下是建议的协议，可以进行修改以满足特定的研究需求。

5.1 H2O2反应混合物应按步骤2制备，但分析缓冲液（组分C）应替换为细胞培养系统中使用的培养基。建议的培养基包括（a）Krebs Ringers磷酸盐缓冲液（KRPB）;（b）汉克斯平衡盐溶液（HBSS）; 或（c）无血清培养基。

5.2在96孔板（50-100μL/孔）中制备细胞，并根据需要激活细胞。

注意：包括阴性对照（单独培养基和非活化细胞）用于测量背景荧光。

5.3将50μLH₂O₂反应混合物（来自步骤5.1）加入到细胞和H₂O₂标准品的每个孔中（来自步骤3.3）

5.4在室温下孵育反应15至30分钟，避光。

5.5用Ex / Em = 540±10/590±10nm（最佳Ex / Em = 540 / 590nm）的荧光板读数器监测荧光增加。

 

参考文献

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