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Amplite NADPH检测试剂盒(比色法)
货号 | 15272 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
规格 | 400 Tests | 价格 | 3192 |
Ex (nm) | 460 | Em (nm) | |
分子量 | 溶剂 | ||
产品详细介绍 |
简要概述
Amplite NADPH检测试剂盒(比色法)是美国AAT Bioquest研发的检测NADPH的试剂盒,烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD +)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP +)是细胞中发现的两种重要的辅因子。 NADH是NAD +的还原形式。 NAD形成NADP,通过酯键将磷酸基团添加到腺苷核苷酸的2’位置。传统的NAD / NADH和NADP / NADPH测定基于监测340nm处NADH或NADPH吸收的变化。 NAD / NADH和NADP / NADPH测定的短紫外波长使得传统方法具有低灵敏度和高干扰。 AAT Bioquest的Amplite 比色NADPH检测试剂盒为检测NADPH提供了一种便捷的方法。 NADPH探针是一种生色传感器,在NADPH减少时具有460nm的最大吸光度。 NADPH探针的吸收与溶液中NADPH的浓度成正比。 Amplite 比色NADPH检测试剂盒提供灵敏的检测方法,可在100μL检测体积中检测低至3μM的NADPH。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供最优质的NADH检测试剂盒。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 460nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
产品说明书
96孔板检测示例
概述
准备NADPH反应混合物(50μL)
加入NADPH标准品或测试样品(50μL)
在室温孵育或15分钟至2小时
孵育460 nm处的监测吸光度
注意:在开始实验之前,在室温下解冻每个试剂盒组分中的一个。
操作步骤
1.准备NADPH原液:
将200μLPBS缓冲液加入到NADPH标准品(组分C)的小瓶中以制备1mM(1nmol / L)NADH储备溶液。
注意:未使用的NADH储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。
2.准备NADPH反应混合物:
将1mL NADPH探针(组分A)加入4mL NADPH测定缓冲液(组分B)中,并充分混合。
注意:5mL NADPH反应混合物用于一个96孔。 未使用的NADPH反应混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。
3.准备NADPH标准品的连续稀释液(0至100μM):
3.1将100μLNADPH储备溶液(来自步骤1)加入400μLPBS缓冲液(pH 7.4)中,以产生200μM(100pmol / L)NADPH标准溶液。
注意:稀释的NADPH标准溶液不稳定,应在4小时内使用。
3.2取200μL的200μMNADPH标准溶液进行1:2连续稀释,得到NADPH标准品的100,50,25,12.5,6.25,3.13和0μM连续稀释液。
如表1和2中所述,将NADPH标准品和含有NADPH的测试样品的系列稀释液加入白色/透明底96孔微量培养板中。
注意:根据需要制备细胞或组织样品。 为方便起见,裂解缓冲液(组分D)可用于裂解细胞(详见附录)。
表1在白色/透明底96孔微孔板中的NADPH标准品和测试样品的布局
BL | BL | TS | TS |
NS1 | NS1 | … | … |
NS2 | NS2 | ||
NS3 | NS3 | ||
NS4 | NS4 | ||
NS5 | NS5 | ||
NS6 | NS6 | ||
NS7 | NS7 |
注意:NS = NADPH标准,BL =空白对照,TS =测试样品
表2每个孔的试剂组成
NADPH | 空白对照 | 测试样 |
连续稀释:50 ul | PBS:50 ul | 50 ul |
*注意:将连续稀释的NADPH标准品(3.13μM至200μM)加入NS1至NS7的孔中,一式两份
4.在上清液反应中运行NADPH测定:
4.1将50μLNADPH反应混合物(来自步骤2)加入NADPH标准品,空白对照和测试样品的每个孔中(参见步骤3.3),使总NADPH测定体积为100μL/孔
注1:对于384孔板,每孔加入25μL样品和25μLNADPH反应混合物。
注2:根据需要准备细胞或组织样本。 为方便起见,裂解缓冲液(组分D)可用于裂解细胞(详见附录)。
4.2在室温下孵育反应15分钟至2小时,避光。
4.3用吸光度读板仪在460 nm处检测吸光度的增加。
数据分析
空白孔中的吸光度(仅用PBS缓冲液)用作对照,并从具有NADPH反应的那些孔的值中减去.NADPH标准曲线如图1所示。
图1使用SpectraMax酶标仪(Molecular devices),在96孔白色/透明底板中用Amplite 比色NADPH测定试剂盒测量NADPH剂量反应。 孵育30分钟(n = 3)可以检测到低至3μM的NAPDH,在460nm处测量吸光度。
附录:使用组分D(裂解缓冲液)的测试样品制剂
1.植物细胞样品:用200mg / mL的裂解缓冲液均质化,并以2500rpm离心5-10分钟,使用上清液进行测试。
2.细菌细胞样品:离心收集细菌细胞((10,000 g,0°C,15 min)。使用约1亿至1千万细胞/ mL裂解缓冲液,将处理后的溶液在室温下保持15分钟.2500℃离心 转速5分钟,并用上清液进行试验。
3.哺乳动物细胞样品:从平板孔中取出培养基,每1-5百万个细胞使用约100μL裂解缓冲液(或在96孔细胞培养板中使用50-100μL/孔),并将处理过的溶液保持在室温下 15分钟。 直接使用细胞裂解液或以1500 rpm离心5分钟,使用上清液进行测试。
4.组织样品:称取约20mg组织,用冷PBS洗涤。 在微量离心管中用400μl裂解缓冲液均化。 以2500rpm离心5-10分钟,使用上清液进行测定。
参考文献
Retinoic acid-related orphan receptor C regulates proliferation, glycolysis, and chemoresistance via the PD-L1/ITGB6/STAT3 signaling axis in bladder cancer
Authors: Ziliang Wang, Dalong Cao, Zihao Qi, Yangyang Pang, Haoran Li, Huyang Xie, Junlong Wu, Yongqiang Huang, Yao Zhu, Yijun Shen
Journal: Cancer research (2019): canres–3842
Celastrol attenuates angiotensin II mediated human umbilical vein endothelial cells damage through activation of Nrf2/ERK1/2/Nox2 signal pathway
Authors: Miao Li, Xin Liu, Yongpeng He, Qingyin Zheng, Min Wang, Yu Wu, Yuanpeng Zhang, Chaoyun Wang
Journal: European Journal of Pharmacology (2017): 124–133
Cytosolic Redox Status of Wine Yeast (Saccharomyces Cerevisiae) under Hyperosmotic Stress during Icewine Fermentation
Authors: Fei Yang, Caitlin Heit, Debra L Inglis
Journal: Fermentation (2017): 61
Epigenetic regulation of Runx2 transcription and osteoblast differentiation by nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Min Ling, Peixin Huang, Shamima Islam, Daniel P Heruth, Xuanan Li, Li Qin Zhang, Ding-You Li, Zhaohui Hu, Shui Qing Ye
Journal: Cell & Bioscience (2017): 27
MCU-dependent mitochondrial Ca2+ inhibits NAD+/SIRT3/SOD2 pathway to promote ROS production and metastasis of HCC cells
Authors: T Ren, H Zhang, J Wang, J Zhu, M Jin, Y Wu, X Guo, L Ji, Q Huang, H Yang
Journal: Oncogene (2017)
Metabolic and molecular insights into an essential role of nicotinamide phosphoribosyltransferase
Authors: Li Q Zhang, Leon Van Haandel, Min Xiong, Peixin Huang, Daniel P Heruth, Charlie Bi, Roger Gaedigk, Xun Jiang, Ding-You Li, Gerald Wyckoff
Journal: Cell Death & Disease (2017): e2705
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Journal: Biochemistry (2017)
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Journal: Molecular Nutrition & Food Research (2017)
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Authors: Tatiana Bilova, Elena Lukasheva, Dominic Brauch, Uta Greifenhagen, Gagan Paudel, Elena Tarakhovskaya, Nadezhda Frolova, Juliane Mittasch, Gerd Ulrich Balcke, Alain Tissier
Journal: Journal of Biological Chemistry (2016): 7621–7636
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Authors: Xiaojuan Han, Haoran Tai, Xiaobo Wang, Zhe Wang, Jiao Zhou, Xiawei Wei, Yi Ding, Hui Gong, Chunfen Mo, Jie Zhang
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