Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光

	货号	20115	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 Tests	价格	3840
	Ex (nm)	493	Em (nm)	517
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

我们的Cell Meter 活细胞胱天蛋白酶活性测定试剂盒基于胱天蛋白酶的荧光FMK抑制剂。 这些抑制剂是细胞可渗透的和无细胞毒性的。 一旦进入细胞，胱天蛋白酶抑制剂就与活性胱天蛋白酶共价结合。 该Cell Meter 活细胞caspase 8活性测定试剂盒旨在通过测量活细胞中的caspase 8活化来检测细胞凋亡。 它用于定量凋亡细胞中激活的caspase 8活性，或用于筛选caspase 8抑制剂。 FAM-LETD-FMK，绿色标记试剂，可通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪直接检测凋亡细胞中活化的胱天蛋白酶8。 该试剂盒为所有必需成分提供了优化的测定方案。

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产品说明书

分离细胞的检测方案

概述

用密度为5×10⁵到2×10⁶个细胞/ mL的测试化合物制备细胞

将FAM-YVAD-FMK以1：150的比例加入到细胞溶液中

在室温下孵育1小时

将细胞沉淀，用缓冲液或生长培养基洗涤并重悬细胞

在Ex / Em = 490 / 525nm处分析细胞

注：使用前将所有部件在室温下解冻。

操作方法

1.根据您的特异性诱导方案，将细胞培养至最适于细胞凋亡诱导的密度，但不超过2 x 10⁶个细胞/ mL。同时，对于每种标记条件，以与诱导群体相同的密度培养非诱导的阴性对照细胞群。以下是一些诱导悬浮培养细胞凋亡的例子：

1）用2μg/ ml喜树碱处理Jurkat细胞3小时。

2）用1μM星形孢菌素处理Jurkat细胞3小时。

3）用4μg/ ml喜树碱处理HL-60细胞4小时。

4）用1μM星形孢菌素处理HL-60细胞4小时。

注意：应对每个细胞系进行单独评估，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。

2.通过向FAM-YVAD-FMK（组分A）的小瓶中加入50μLDMSO制备150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液。

3.将150×FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液（来自步骤1）以1：150的比例添加到细胞溶液中，并将细胞在37℃，5％CO 2培养箱中孵育1小时。

注1：对于FAM-YVAD-FMK标记，细胞可以浓缩至~5×10 6个细胞/ mL。 未使用的150X FAM-YVAD-FMK DMSO储备溶液应分为单次使用的等分试样并储存在-20°C。

注2：对于粘附细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用FAM-YVAD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。

注3：适当的孵育时间取决于所用的细胞类型和细胞浓度。 优化每个实验的孵育时间。

4.将细胞以约200g旋转5分钟，并用1mL洗涤缓冲液（组分B）洗涤细胞两次。 将细胞重悬于所需量的洗涤缓冲液中。

注1：FAM-YVAD-FMK是荧光的，因此清除任何未结合的试剂以消除背景非常重要。

注2：对于分离的细胞，应将细胞浓度调节至每个微量滴定板孔中2-5×10 5个细胞/100μL等分试样，用于步骤6。

5.如果需要，用DNA染色标记细胞（如用于死细胞的碘化丙锭，或用于细胞核染色的整个群体的Hoechst）。

6.通过荧光显微镜，流式细胞仪或荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm处检测荧光强度（对于碘化丙锭，Ex / Em = 535/635 nm;对于Hoechst染料，Ex / Em = 350 / 461纳米）。

6.1对于流式细胞仪，使用FL1通道监测荧光强度（FL2通道用于碘化丙锭染色）。

6.2用于荧光显微镜和荧光酶标仪。将100μL细胞悬浮液置于96孔黑壁/微量滴定板透明底部的每个孔中。

注意：如果需要平衡细胞浓度，调整诱导细胞的悬浮体积以接近非诱导细胞群的细胞密度。如果您的细胞治疗不会导致受刺激细胞群数量的显着损失，则此调整步骤是可选的。

6.3使用FITC通道在荧光显微镜下观察细胞（用于碘化丙啶染色的TRITC通道，用于Hoechst染色的DAPI通道）。

6.4使用荧光酶标仪，使用Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）底部读取模式监测荧光强度。

参考文献

Helicobacter pylori Secreted Protein HP1286 Triggers Apoptosis in Macrophages via TNF-Independent and ERK MAPK-Dependent Pathways
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: Frontiers in Cellular and Infection Microbiology (2017): 58

Death receptor 3 mediates necroptotic cell death
Authors: Sebastian Bittner, Gertrud Knoll, Martin Ehrenschwender
Journal: Cellular and Molecular Life Sciences (2016): 1–12

Helicobacter pylori protein JHP0290 exhibits proliferative and anti-apoptotic effects in gastric epithelial cells
Authors: Raquel Tavares, Sushil Kumar Pathak
Journal: PloS one (2015): e0124407

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