Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*

	货号	22855	存储条件	在零下15度以下保存, 避免光照
	规格	25 Tests	价格	4884
	Ex (nm)	649	Em (nm)	664
	分子量		溶剂
	产品详细介绍

简要概述

Cell Meter TUNEL细胞凋亡测定试剂盒是一种强大的工具，可方便地检测由DNA片段化引起的细胞凋亡。该测定是非放射性且快速的。TUNEL分析使用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）催化TF5-dUTP在片段DNA的游离3′-羟基末端的掺入。通过荧光显微镜（Cy5滤光片组）或用633或640 nm激光和660/20 nm滤光片（APC通道）进行流式细胞术分析所得的TF5标记的DNA。它的红色发射可以方便地与GFP标记的靶标多路复用。直接掺入荧光TF5标记的核苷酸可明显减少检测步骤。该试剂盒经过优化，可检测固定细胞和福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片中的凋亡。

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产品说明书

样品分析方案

概述

根据需要处理样品

在冰上用4％甲醛溶液固定细胞30分钟

在冰上用70％冰冷的乙醇透化细胞60分钟

将TdT染色溶液添加到样品中并在37°C下孵育60分钟

使用带有Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度 

工作溶液配制

操作步骤

以下方案可用作参考，实际情况应根据需要进行调整。

1. 根据需要处理样品。
2. 用您选择的缓冲液（例如含Ca⁺²和Mg⁺²的PBS）洗涤样品。
3. 通过在PBS中加入100 µL 4％多聚甲醛固定样品，并在冰上孵育30分钟。
4. 除去固定液并用PBS洗涤样品。
5. 向样品中加入100 µL 70％的冰冷乙醇，并在冰上孵育60分钟。
   注意：样品在使用前可以在-20°C下保存几天。
6. 除去酒精并用PBS洗涤细胞。
   注意：对于阳性对照，将固定样品与2-5 µg / mL DNAse在含有Ca ⁺²和Mg ⁺²的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse并彻底清洗细胞，并继续进行其余操作。
7. 向样品中加入50µL TdT染色溶液，并在37°C下孵育60至120分钟。
8. 除去TdT工作溶液，并用PBS洗涤样品。
9. 将样品重悬于PBS中，并使用流式细胞仪使用660/20 nm滤光片（APC通道）或带有Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

以下方案可用作参考，实际应根据需要进行调整。

去石蜡和水化

1. 通过将载玻片在Coplin广口瓶中在室温下浸入新鲜的二甲苯中5分钟，从而对组织切片（附着在载玻片上）进行脱蜡。再重复一次。（共2次洗涤）
2. 将载玻片在室温下在Coplin广口瓶中浸入100％乙醇中5分钟，以洗涤样品。
3. 通过在室温下将载玻片浸入各种浓度的酒精（100、95、85、70、50％）中，分别在室温下浸泡5分钟，从而对样品进行水化处理。
4. 在室温下将载玻片浸入0.85％NaCl中5分钟，以洗涤样品。
5. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤） 

固定

1. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4％多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
2. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤）
3. 除去液体，然后将载玻片放在平坦的地方。用100 µL 20 µg / mL蛋白酶K溶液处理组织切片。（添加至足够覆盖整个组织表面。在室温下孵育载玻片10分钟。）
4. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。
5. 通过在室温下将载玻片浸入PBS中的4％多聚甲醛溶液中15-20分钟来固定组织切片。
6. 在室温下将载玻片浸入PBS中5分钟，以洗涤样品。重复一遍。（共2次洗涤） 

染色

1. 可选：对于阳性对照，将固定的样品与2-5 µg / mL的DNAse在含有Ca⁺²和Mg⁺²的PBS中于37°C 孵育60分钟。除去DNAse，并用PBS彻底清洗细胞，并继续进行其余操作。
2. 向样品中加入50 µL TdT染色溶液，并在37°C下孵育60至120分钟。
3. 除去TdT工作溶液，并用PBS洗涤样品。
4. 加入含DAPI的封固剂（＃20005），并用带Cy5滤光片组的荧光显微镜检测荧光强度。 

图示

图1.用   HeLa细胞进行TUNEL分析的荧光图像。 固定HeLa细胞，并在37°C下分别使用和不使用DNAse处理60分钟。然后将细胞用Cell Meter™固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒（Cat＃22855）染色。DNA链断裂在DNAse处理的细胞中表现出强烈的荧光染色。使用Cy5滤光片组在荧光显微镜下检测信号。  

参考文献

A Novel Theranostic Combination of Near-infrared Fluorescence Imaging and Laser Irradiation Targeting c-KIT for Gastrointestinal Stromal Tumors.
Authors: Fujimoto, Shota and Muguruma, Naoki and Okamoto, Koichi and Kurihara, Takeshi and Sato, Yasushi and Miyamoto, Yoshihiko and Kitamura, Shinji and Miyamoto, Hiroshi and Taguchi, Takahiro and Tsuneyama, Koichi and Takayama, Tetsuji
Journal: Theranostics (2018): 2313-2328

Multicomponent Synthesis of Some Molecular Hybrid Containing Thiazole Pyrazole as Apoptosis Inducer.
Authors: Kumar, Parvin and Duhan, Meenakshi and Kadyan, Kulbir and Bhardwaj, Jitender Kumar and Saraf, Priyanka and Mittal, Meenu
Journal: Drug research (2018): 72-79

[Salvianolate protects H9c2 cells from hypoxia/reoxygenation injury-induced apoptosis by attenuating mitochondrial DNA oxidative damage].
Authors: Yue, R C and Yang, X L and Zhang, R Y and Liu, S and Liu, J and Zeng, J and Liang, H and Wang, W and Hu, H X and Zeng, C Y
Journal: Zhonghua xin xue guan bing za zhi (2017): 57-63

Caspase 3 as a therapeutic target for regulation of intervertebral disc degeneration in rabbits.
Authors: Sudo, Hideki and Minami, Akio
Journal: Arthritis and rheumatism (2011): 1648-57

Induction of apoptosis and inhibition of PI3K/Akt pathway in PC-3 and LNCaP prostate cancer cells by ethanolic neem leaf extract.
Authors: Gunadharini, Dharmalingam N and Elumalai, Perumal and Arunkumar, Ramachandran and Senthilkumar, Kalimuthu and Arunakaran, Jagadeesan
Journal: Journal of ethnopharmacology (2011): 644-50

[Effect of 5-aminolevulinic acid-mediated photodynamic therapy on human gastric cancer xenografts in nude mice in vivo].
Authors: Zhou, Guang-jun and Huang, Zong-hai and Yu, Jin-long and Li, Zhou and Ding, Lian-shu
Journal: Zhonghua wei chang wai ke za zhi = Chinese journal of gastrointestinal surgery (2008): 580-3

[Effect of phenylhexyl isothiocyanate on inducing apoptosis of multiple myeloma cells in vitro].
Authors: Lu, Quan-Yi and Wang, Zhao and Liu, De-Long
Journal: Zhongguo shi yan xue ye xue za zhi (2008): 89-92

[Effect of qihong capsule in inhibiting cell apoptosis induced by Coxsackie virus B].
Authors: Song, Xiao-dong and Wang, Lun and Ji, Bo
Journal: Zhongguo Zhong xi yi jie he za zhi Zhongguo Zhongxiyi jiehe zazhi = Chinese journal of integrated traditional and Western medicine (2005): 511-5

Dual excitation multi- fluorescence flow cytometry for detailed analyses of viability and apoptotic cell transition.
Authors: Mazzini, G and Ferrari, C and Erba, E
Journal: European journal of histochemistry : EJH (2003): 289-98

Co-localization of active caspase-3 and DNA fragmentation (TUNEL) in normal and hyperthermia-induced abnormal mouse development.
Authors: Mirkes, P E and Little, S A and Umpierre, C C
Journal: Teratology (2001): 134-43