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Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒
| 货号 | 10087 | 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
| 规格 | 200 Tests | 价格 | 5136 |
| Ex (nm) | 540 | Em (nm) | 590 |
| 分子量 | 溶剂 | ||
| 产品详细介绍 | |||
简要概述
Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒是美国AAT Bioquest生产的荧光染料。α-酮戊二酸（α-酮戊二酸）是克雷布斯循环中的关键分子，其决定了生物体的柠檬酸循环的总体速率。作为谷氨酸和谷氨酰胺的前体，α-酮戊二酸也是胃肠道细胞的中枢代谢燃料。它可以降低蛋白质分解代谢并增加蛋白质合成，从而增强骨骼肌中的骨组织形成，并可用于临床应用。 α-酮戊二酸用于肾脏疾病;肠道和胃部疾病，包括细菌感染;肝脏问题;白内障;和反复发酵的酵母菌感染。它还用于改善接受血液透析治疗的肾病患者处理蛋白质的方式。 AAT Bioquest的Amplite™比色α-酮戊二酸定量试剂盒提供灵敏的比色分析，用于定量生物样品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶联反应释放过氧化氢，可通过Amplite™Red在吸光度酶标仪中在570 nm处检测到。金畔生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供最优质的Amplite 荧光法α-酮戊二酸定量试剂盒。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| 激发： | 540nm |
| 发射： | 590nm |
| cutoff： | 570nm |
| 推荐孔板： | 黑色底板 |
产品说明书
样品实验方案
简要概述
1.准备测试样品和连续稀释的α-酮戊二酸标准品（50μL）
2.加入等体积的α-酮戊二酸工作液（50μL）
3.在37°C孵育60-90分钟
4.监测570nm处的吸光度强度
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.1 Amplite 红色储备液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入到Amplite Red（组分A）的小瓶中以制备200X储备溶液。
2.标准溶液
2.1α-酮戊二酸标准
将10μL10mMα-酮戊二酸标准品（组分D）加入990μLPBS中，得到100μMα-酮戊二酸标准溶液（AKG7）。 然后进行1：2连续稀释以获得连续稀释的α-酮戊二酸标准品（AKG6-AKG1）。
3.工作溶液
3.1将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一个酶混合物1瓶（组分B1）中并充分混合。
3.2将100μLDdH2O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中并充分混合。
3.3将整个小瓶（100μL）的酶混合物2和25μL的200X Amplite Red储备溶液转移到小瓶混合物1的小瓶中并充分混合以制备α-酮戊二酸的工作溶液。 注意：5mLα-酮戊二酸工作溶液足以容纳一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。
样品分析
表1.实心黑色96孔微孔板中α-酮戊二酸标准品和测试样品的布局。 AKG =α-酮戊二酸标准品（AKG1-AKG7,0.1至30μM），BL =空白对照，TS =测试样品。
| BL | BL | TS | TS |
| AKG1 | AKG1 | … | … |
| AKG2 | AKG2 | … | … |
| AKG3 | AKG3 | ||
| AKG4 | AKG4 | ||
| AKG5 | AKG5 | ||
| AKG6 | AKG6 | ||
| AKG7 | AKG7 |
表2.每个孔的试剂组成
| 孔 | 容积 | 试剂 |
| AKG1-AKG7 | 50ul | 连续稀释液（0.1至30μM） |
| BL | 50ul | 分析缓冲液（组分C） |
| TS | 50ul | 测试样品 |
1.根据表1和2中提供的布局制备α-酮戊二酸标准品（AKG），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。
2.向α-Ketoglutarate标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μLα-酮戊二酸测定工作溶液，使总测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μLα-酮戊二酸工作溶液，总体积为50μL/孔。
3.将反应在37℃孵育30-60分钟。
4.用Ex / Em = 540 / 590nm（截止值= 570nm）的荧光板读数器监测荧光增加。
参考文献
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Journal: Arch Immunol Ther Exp (Warsz). (2016)
alpha-Ketoglutarate dehydrogenase complex moonlighting: ROS signalling added to the list: An Editorial highlight for ‘Reductions in the mitochondrial enzyme alpha-ketoglutarate dehydrogenase complex in neurodegenerative disease – beneficial or detrimental?’
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Alpha-ketoglutarate reduces ethanol toxicity in Drosophila melanogaster by enhancing alcohol dehydrogenase activity and antioxidant capacity
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