NEB® Golden Gate 组装试剂盒（BsmBI-v2） 收藏
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特性
·试剂盒含 BsmBI-v2，经优化用于 Golden Gate 组装
概述
NEB Golden Gate 组装试剂盒（BsmBI-v2）是 BsmBI-v2 和 T4 DNA 连接酶的优化预混液。BsmBI-v2 是 NEB 公司研发的 BsmBI 的升级版本，在 Golden Gate 组装中的表现优于原酶。这些酶联合使用可完成多个插入片段/模块的组装，也可用于单插入片段克隆/文库构建。试剂盒提供 pGGAselect 目的质粒，作为组装骨架。该多功能目的质粒上定向克隆有 BsmBI-、BsaI- 和 BbsI- 的识别位点，使其能方便地与这三种在 Golden Gate 中最常用的 IIS 型限制性内切酶一起使用。该质粒还含有多个限制性内切酶识别位点，方便进行亚克隆，并具有 T7/SP6 启动子序列，供体外转录使用。
图 2. Golden Gate 工作流程
简单来讲，Golden Gate 组装需要 IIS 内切酶的识别位点，在本示例中，需要在 dsDNA 片段的两端加上其识别位点（CGTCTC）。酶切后，识别位点被切除，组装片段末端带有设计好的特定 4 碱基突出以指导组装。
图3. 用 BsmBI-v2 进行高效和高保真 Golden Gate 组装
遵循 11-20+ 片段组装的推荐循环步骤，在含有 LacI/LacZ 的表达框中组装 24 个片段。虽然 30 个循环足以完成复杂组装，但 BsmBI-v2 和 T4 DNA 连接酶的稳定性允许连续进行 65 个循环的组装且背景低。（a）组装效率和（b）组装准确性（保真度）与循环数的关系如图所示。
图4. 用 BsmBI-v2 和 T4 DNA 连接酶进行复杂组装
NEB Golden Gate 组装试剂盒（BsmBI-v2）包含：
– NEB® Golden Gate 酶预混液
– T4 DNA 连接酶反应缓冲液（10X）
– pGGAselectII DNA
用于 Golden Gate 的 IIS 型限制性内切酶
– BsaI (NEB #R0535)
– BsaI-HFv2 (NEB #R3733)
– BbsI (NEB #R0539)
– BbsI-HF (NEB #R3539)
– BsmBI (NEB #R0580)
– BsmBI-v2 (NEB #R0739)
– Esp3I (NEB #R0734)
NEB Golden Gate 组装试剂盒（BsmBI-v2）包含：
– NEB® Golden Gate 酶预混液
– T4 DNA 连接酶反应缓冲液（10X）
– pGGAselectII DNA
用于 Golden Gate 的 IIS 型限制性内切酶
– BsaI (NEB #R0535)
– BsaI-HFv2 (NEB #R3733)
– BbsI (NEB #R0539)
– BbsI-HF (NEB #R3539)
– BsmBI (NEB #R0580)
– BsmBI-v2 (NEB #R0739)
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质保声明
NEB Golden Gate 组装混合液经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。更多信息请登陆 www.neb.com 或 www.neb-china.com。
参考文献
1. Engler, C. et al.(2008).PLoS ONE. 3, e3647.