产品资料 – DNA修饰酶与克隆技术 – 克隆 & 合成生物学
NEBridge™ 连接酶预混液 收藏
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#M1100S
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产品特点
·试剂盒经优化设计，适用于高效准确的 Golden Gate 组装
·3X 预混液剂型，使用便捷
·搭配 NEB IIS 型限制性内切酶使用
·用于无缝克隆 — 组装后不存在残余序列
·适用于在单个反应中同时进行多片段 (2-25+) 有序组装
·也可用于单片段克隆和文库构建
·Golden Gate 免费设计软件请点击 GoldenGate.neb.com
·连接酶保真度查询工具请点击 Ligase Fidelity Tools（用于设计高保真 Golden Gate 组装）
NEBridge 连接酶预混液为使用者提供更加灵活和便利的试剂，搭配 NEB IIS 型限制性内切酶，可高效和高保真的完成 Golden Gate 组装。
产品描述
NEBridge 连接酶预混液为 3X 浓度剂型，适用于 Golden Gate 组装。该预混液专门设计用于搭配 NEB IIS 型限制性内切酶使用，经优化的反应缓冲液含有 T4 DNA 连接酶和专有的连接增强剂。用户只需选择 NEB IIS 型限制性内切酶，并添加组装的 DNA 底物即可。该产品与其操作方案可支持简单的单片段插入，也支持中等复杂（3–6 个片段）和高度复杂（7–25+ 个片段）的片段组装。
图示：使用 NEBridge 连接酶预混液和传统 T4 DNA 连接酶缓冲液对 lac 基因 进行 25 片段的 Golden Gate 组装
A：使用 NEBridge 连接酶预混液进行 25 个片段组装的原理图
B：使用 BbsI-HF (NEB #R3539M)、24 个插入片段和 pGGAselect 质粒建立 30 µl 反应体系。左图为使用 10 µl NEBridge 连接酶预混液的结果。右图为使用 3 µl 10X T4 DNA 连接酶缓冲液 (NEB #B0202) 和 1 µl T4 DNA 连接酶 (NEB #M0202T/M) 的结果。两个反应分别加 1 µl BbsI-HF，以及 24 个插入片段和 pGGAselect 质粒（每种 0.05 pmol）。反应在 37℃ 5 分钟和 16℃ 5 分钟下进行 60 个循环，最后 60℃ 孵育 5 分钟。每个反应取 2 µl 产物转入 50 µl T7 表达 E. coli 感受态细胞 (NEB #C2566)。取 50 µl 菌液涂 LB 平板（含 1 mg/ml 葡萄糖、1 mg/ml MgCl2、30 µg/ml 氯霉素、200 µM IPTG 和 80 µg/ml X-gal），37℃ 孵育 18 小时，4℃ 储存 4 小时，最后对菌落颜色进行观测和记录。
C：结果展示了总转化株和正确组装转化株（蓝色菌落）百分比的平均值（三个重复），以及平均值的标准偏差。使用 NEBridge 连接酶预混液时，每微克载体 DNA 产生 2.2±0.2X106 个正确组装的蓝色菌落，保真度为 94.3±1%，使用 T4 DNA 连接酶缓冲液时，每微克载体 DNA 产生 8.3±2.1X105 个正确组装的蓝色菌落，保真度为 69.8±10.7% 保真度。