qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit（1000*50ul）
使用SYBR Green I进行两步法RT-PCR，用于基因表达分析
- 整合热启动，PCR特异性高
- 可靠定量检测低丰度转录本
- 准确定量检测各种起始量样本
- 提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）两种包装
- 无需优化反应和循环条件
qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit（1000*50ul）
- Real-Time PCR酶与试剂盒
- qPCR16
- 一步法RT-PCR20
- 两步法RT-PCR29
QuantiTect SYBR® Green PCR Kits
使用SYBR Green I进行两步法RT-PCR，用于基因表达分析
- 整合热启动，PCR特异性高
- 可靠定量检测低丰度转录本
- 准确定量检测各种起始量样本
- 提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）两种包装
- 无需优化反应和循环条件
QuantiTect SYBR Green PCR Kit使用SYBR Green I通过两步法real-time RT-PCR对cDNA目标序列进行高特异性的定量检测。热启动和独特的实时定量PCR缓冲液确保了对cDNA目标序列高特异性和灵敏度的real-time定量检测。dNTP混合液含有dUTP，可选择性进行UNG处理。为便于使用，预混液可储存在2–8°C。
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特异性定量检测。
在Rotor-Gene 3000上使用针对人BAX的QuantiTect Primer Assay和指定的试剂盒分析稀释的人白细胞cDNA。熔解曲线分析中出现单峰，NTC反应呈平直曲线，说明使用QuantiTect Kit和Assay可实现高特异性定量。NTC：无模板对照。Norm. Fluoro.：标准化的荧光。
Performance
QuantiTect SYBR Green PCR Kit在宽泛的范围内符合线性规律，可实现特异性定量检测（参见”Specific quantification over a wide linear range”）。与其他聚合酶相比，HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动，进一步提高了PCR反应的特异性。独特的PCR缓冲液和HotStarTaq DNA Polymerase，确保低丰度转录本的定量检测，低至5个拷贝的目标序列也可被准确检测（参见”Highly specific amplification”）。QuantiTect SYBR Green PCR Kit与QuantiTect Reverse Transcription Kit和QuantiTect Primer Assays配合使用，可获得灵敏、可靠的结果（参见”Specific and sensitive quantification”）。
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit中经特别优化的UNG溶液配合经验证的PCR预混液可有效避免PCR产物中的残留污染，并对靶序列进行可靠的定量检测（参见”High specificity in real-time PCR”）。
Principle
QuantiTect SYBR Green PCR Kit含有优化的即用型预混液，可使用SYBR Green I对cDNA靶序列进行高特异性和灵敏度的real-time定量分析。预混液中的荧光染料SYBR Green I可对很多不同的靶序列进行分析，无需合成靶标特异性标记引物。独特的PCR缓冲液含有K+和NH4+，能促使特异性引物退火，获得高PCR特异性和灵敏度（参见”Specific primer annealing”）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase具有严格的热启动，可防止非特异性产物的形成。
QuantiTect SYBR Green PCR预混液含有dUTP，可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 （UNG）预处理，保证之前反应残留的PCR产物会影响后续的PCR反应。
| 组份 | 特点 | 优势 |
|---|---|---|
| HotStarTaq DNA Polymerase | 95ºC孵育15分钟即可活化 | 室温下即可构建qPCR反应体系 |
| QuantiTect SYBR Green PCR Buffer | NH4+和K+的平衡组合 | 特异性引物退火确保PCR结果可靠 |
| dNTP mix | 含有dUTP，会部分替代dTTP，可进行UNG处理 | 可选择进行UNG处理，以消除之前反应残留的PCR产物 |
| SYBR Green I dye | DNA双链结合时，生成强烈的荧光信号 | 高度灵敏的定量检测 |
| ROX dye | 在Applied Biosystems或Agilent的PCR仪上进行荧光信号校准 | 可在需要ROX染料的PCR仪上进行准确的定量检测。不会干扰其他real-time PCR仪 |
Procedure
QuantiTect SYBR Green PCR Kit无需进行繁琐耗时的反应条件优化。只需简单地将引物、探针和cDNA模板加入到即用型PCR预混液中，即可开始反应（参见”Two-step RT-PCR”）。使用操作手册中的实验方案可在任何real-time PCR仪上得到快速、可靠的结果。如果需要，反应液可用尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）预处理，以去除之前反应残留的PCR产物。
为在两步法real-time RT-PCR中获得理想结果，我们推荐使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。此试剂盒可在20分钟内快速合成cDNA，并可去除基因组DNA污染。
QuantiTect SYBR Green PCR Kit配合QuantiTect Primer Assays可在基因表达分析中获得高度特异性的结果。基因组范围、生物信息学验证的引物对覆盖所有人类、小鼠、大鼠和其他各类生物基因。QuantiTect Primer Assays可在GeneGlobe上方便地订购。