qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

详细介绍

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit

cDNA合成和gDNA去除仅用20分钟完成
有效去除基因组DNA，无需设计RNA特异性引物或探针
高特异性，即便是低丰度的转录本也能获得高产量的cDNA
转录本的5' 和3' 端区域都可以进行cDNA 合成

For 50 x 20 ul reactions: 100 ul 7x gDNA Wipeout Buffer, 50 ul Quantiscript Reverse Transcriptase, 200 ul 5x Quantiscript RT Buffer, 50 ul RT Primer Mix, 1.9 ml RNase-Free Water

逆转录试剂盒组分确保高效、高灵敏的Real-Time RT-PCR

组分	优点
gDNA Wipeout Buffer	仅在real-time RT-PCR 中检测RNA
Quantiscript Reverse Transcriptase	可用于广泛RNA起始量（10 pg to 1 µg RNA），高特异性
Quantiscript RT Buffer	可通读困难模板
RT Primer Mix	所有转录本区域合成cDNA, 甚至从5' 端区域

原理

为获得准确的real-time RT-PCR基因表达分析结果，很重要的是仅扩增和检测cDNA。基因组DNA的干扰可通过设计横跨外显子/外显子边界的引物或探针避免。尽管如此，在某些特殊情况下（如：cDNA来自一个单外显子基因），起始RNA样品必须无基因组DNA。

使用QuantiTect Reverse Transcription Kit，基因组DNA污染物可使用独特的gDNA去除缓冲液迅速有效的去除（见图：“高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR”）。因为纯化RNA样品后无需另外采用DNA酶消化，从而可节省时间和费用。并且也无需设计RNA特异性引物和探针。

低丰度转录本获得更高产量的cDNA

	C_T values for IL12A （low expression）		C_T values for IL1RN （higher expression）
Input RNA （ng）	QIAGEN	Supplier A_II	QIAGEN	Supplier A_II
1000	30.9	32.0	23.1	24.9
100	34.2	35.4	26.3	26.6
10	37.8	46.8	29.7	30.3
1	N.D.	N.D.	32.4	34.5

应用Real-time，两步法RT-PCR 分析IL12A 和IL1RN，起始RNA量不同。应用QuantiTect Reverse Transcription Kit 或来自供应商Supplier A_II的试剂盒逆转录总 RNA 。在 ABI PRISM 7900 上应用的QuantiTect Probe PCR Kit 、IL12A或 IL1RN的 QuantiTect Gene Expression Assays 分析合成的。应用凯杰试剂盒C_T值较低，尤其中等丰度的基因IL12A（粗体），cDNA产量更高。N.D.：未检测（Not detected）。

RT Primer Mix包含有特别优化的oligo-dT和随机引物的混合物，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始，甚至可从5'区域开始（见图：“高灵敏度检测12.5 kb 转录本5'区域的靶分子”）。相对于其他供应商提供的试剂盒来说，QuantiTect Reverse Transcription Kit为real-time PCR分析提供高产量的cDNA，无需考虑待扩增目标序列位于转录本的哪个区域。同时，QuantiTect Reverse Transcription Kit也确保了real-time RT-PCR结果更好的重复性。

操作流程

使用QuantiTect逆转录试剂盒可在20分钟内去除基因组DNA和合成cDNA（见流程图）。由于两个反应均在同一孵育温度并使用预混液构建反应，因此操作过程快速且方便。相反，供应商I提供的试剂盒操作需更多移液步骤且经常需要调整孵育温度，因此需要更长时间和更多手动操作。

应用

QuantiTect Reverse Transcription Kit可从各种类型的起始样品中合成cDNA以实现高效和高灵敏度的real-time RT-PCR，包括激光显微切割样品和活组织切片样品。与其他供应商提供的试剂相比，QuantiTect Reverse Transcription Kit在检测低丰度基因时具有更高的灵敏度（见图：“Real-Time，两步法RT-PCR精确度更高”）。

为获得高特异性和高灵敏度的real-time RT-PCR结果，又避免耗时的反应步骤优化过程，我们推荐QuantiTect Reverse Transcription Kit和其他QuantiTect产品联合使用。包括经优化的PCR反应预混液和即用型引物，使用SYBR Green染料法或序列特异性探针法进行 real-time RT-PCR。

Images

qiagen205311QuantiTect Rev. Transcription Kit 高效去除基因组DNA，确保精确的Real-Time RT-PCR — A 高灵敏度检测12.5 kb转录本5'区域的靶分子快速方便的cDNA合成高灵敏度的Real-Time，两步法RT-PCR

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