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■ 产品简介 |
Capturem™ Protein G 系列产品是基于Protein G* 原理,结合新型膜技术的一次性抗体纯化柱,特别适用于单克隆抗体和多克隆抗体的小量快速纯化和筛选。室温下操作即可,小量纯化仅需5 min,因此无须担心抗体的降解或失活。Capturem™ 系列产品以高性能的尼龙膜为介质并对其进行改造,增加了膜孔表面积,对抗体的结合能力≥75 mg/cm3。产品最突出的特点是柱床体积小,可在室温下操作,纯化简单快速,可实现抗体的高浓度、高纯度纯化。产品有小量(miniprep)、中量(maxiprep)以及高通量(24 well、96 well)四种规格可供选择。 |
*Protein G是来源于Staphylococcus aureus的细胞壁蛋白质,与许多物种(人、大小鼠等)的单克隆或多克隆IgG型抗体分子的Fc段有高亲和性。本制品使用的是重组protein G,去掉了白蛋白结合结构域、细胞壁和细胞膜结合结构域,从而提高了与抗体Fc片段的结合特异性。 |
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■ 产品特点 |
· 快速方便:从上样到洗脱,室温下操作小量纯化仅需5 min,无需上样后孵育 · 结合力强:膜与抗体的结合能力≥75 mg/cm3 · 高质量:样品停留时间短,从而有效地防止了抗体降解及失活,保障了下游应用的成功率 · 高纯度、高浓度:柱床体积小,带入污染少,可实现大体积洗涤,小体积洗脱 · 高灵活性:可从广泛来源的样品中纯化多种类型的抗体,如动物血清、腹水、细胞培养基等 · 一次性使用:有效减少样品间的交叉污染,单孔的纯化产量因样品类型、物种以及抗体同种型的不同而有所差别。 |
注:Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC(Code No. 635745/635744)经过优化,与旧版本产品(Code No. 635732)相比,收量更高 |
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■ Capturem™ 膜原理 |
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■ 操作流程 |
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■ 产品主要参数 |
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Capturem™ Protein G Miniprep |
Capturem™ Protein G Maxiprep |
Capturem™Protein G 24-Well Plate-HC |
Capturem™Protein G 96-Well Plate |
包装量 |
10次 |
6次 |
24 well |
96 well |
样品上样量*1 |
100~800 μl |
2~20 ml |
0.5~4.3 ml/well |
200~1,000 μl/well |
操作时长 |
5 min |
15 min |
15 min |
15 min |
收量*2 |
60 μg protein/column |
1.2 mg protein/column |
600 μg*3 protein/well |
60 μg protein/well |
洗脱液使用量 |
100-300 μl |
0.5-1.5 ml |
1.8 ml |
100-300 μl |
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*1. 样品与binding buffer的稀释比例为1:2~1:15。建议杂交瘤样品1:2~1:4稀释,血清样品1:15稀释。 |
*2. 收量多少取决于样品的类型、物种以及抗体同种型(isotype)。 |
*3. 这是在HEK293细胞上清液中添加1 mg小鼠IgG1时获得的收量。 |
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■ Protein A和Protein G对于不同来源和亚型抗体的亲和性 |
Species |
Antibody subtype
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Protein A |
Protein G |
Protein A/G |
Human |
Total lgG |
+++ |
+++ |
+++ |
lgG1 |
+++ |
+++ |
+++ |
lgG2 |
+++ |
+++ |
+++ |
lgG3 |
+ |
+++ |
+++ |
lgG4 |
+++ |
+++ |
+++ |
lgM |
+ |
– |
+ |
lgD |
– |
– |
– |
lgA1 |
+ |
– |
+ |
lgA2 |
+ |
– |
+ |
Fab |
+ |
+ |
+ |
scFv |
+ |
– |
+ |
Mouse |
Total lgG |
+++ |
+++ |
+++ |
lgM |
– |
– |
– |
lgG1 |
+ |
++ |
++ |
lgG2a |
+++ |
+++ |
+++ |
lgG2b |
+++ |
+++ |
+++ |
lgG3 |
+++ |
+++ |
+++ |
Rat |
Total lgG |
+ |
++ |
++ |
lgG1 |
+ |
++ |
++ |
lgG2a |
– |
+++ |
+++ |
lgG2b |
– |
+ |
+ |
lgG2c |
+++ |
+++ |
+++ |
Rabbit |
Total lgG |
+++ |
+++ |
+++ |
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+++ strong binding ++ medium binding + weak binding – no binding |
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■ 各试剂盒组成 |
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Capturem™ Protein G Miniprep(635725) |
Miniprep Column 10个 |
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Capturem™ Protein G Maxiprep(635727) |
Maxiprep Column 6个 |
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Capturem™ Protein G 96-Well Plate(635726) |
96 well plate 1块 |
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Capturem™ Protein G 24-Well Plate(635732) |
24 well plate 1块 |
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Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC(635745) |
24 well plate 1块 |
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Capturem™ Protein G 24-Well Plate-HC(635744) |
24 well plate 4块 |
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【注】由于Capturem Protein G系列产品不包含buffer和收集管,请按以下建议配制buffer和准备材料。 |
1. 纯化buffer |
本制品可搭配使用磷酸盐、柠檬酸盐缓冲液等抗体纯化常用试剂。标准的buffer配方请参考说明书中内容,需要注意的是,buffer的盐浓度和pH值对纯化抗体的收量和纯度的影响会因抗体的同种型不同而不同。 |
2. 收集tube/plate |
使用Miniprep产品进行1次纯化,需要额外准备4个2 ml tube |
使用Maxiprep产品进行1次纯化,需要额外准备4个50 ml tube |
使用96 well产品进行1次纯化,需要额外准备4个96 well collection plate |
使用24 well产品进行1次纯化,需要额外准备4个24 well collection plate |
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