新标准　抗体纯化树脂

KANEKA KanCapA™

   

　　

　　本产品为 Protein A 亲和层析树脂。用于从活体样本及细胞培养上清纯化免疫球蛋白及包含 Fc 段的重组抗体。

　　本产品由高交联纤维素微珠及新研发的耐碱 Protein A 配体构成，可用于 IgG 的亲和纯化。

◆特点

•　耐碱

•　良好洗脱条件

•　高抗体结合能力

•　可循环使用

•　便于扩增

◆关于改良 Protein A

　　

　　KanCapA™ 采用的不是天然 Protein A，而是使用变异型Ｃ域５聚物的新型 Protein A。

　　天然 Protein A的Ｃ域结合于 Fc 段，也结合于 Fab 段，其中与VH3亚家族抗体的反应性较高。该类型的解离需要弱酸条件下洗脱。

　　为改善该问题，使用分子设计系统重新设计分子，研发了保持耐碱性、改善 Fab 段的非特异性结合及洗脱曲线的 Protein A。

本产品采用的 Protein A

1. C5 聚体蛋白质		良好pH条件下清晰地洗脱抗体
2. 较高的耐碱性
3. 减少 Fab 段的非特异性结合

◆产品特性

KANEKA KanCapA™　产品特性

矩阵	高交联纤维	※ 　　1)　平均粒度为累积体积分布的中间粒度 　　2)　５%动态结合容量为前端分析测定（停留时间３分钟） 　　3)　可在强碱条件下清洗，但请避免长时间的清洗 　　4)　请勿冷冻
平均粒度1)	65-85 μm
配体	Protein A，重组(抗强碱)
结合	化学结合（还原胺化）
动态结合容量2)	≧35 mg 人多克隆 IgG／mL载体
化学稳定性3)	使用亲和层析通用可溶性溶媒时较稳定
pH 范围3)	pH 2-13
静止清洗条件3)	0.1-0.5 mol/L氢氧化钠 6-8 mol/L尿素、6 mol/L盐酸胍
流量	最大 500cm/h（层高：20-25 cm）
停留时间	≧３分钟（建议：４-６分钟）
保存条件4)	20%乙醇浑浊液，１～10℃

◆应用

1、Fab段　纯化应用

　　•　利用 KANEKA KanCapA™ 的特点，可从经木瓜蛋白酶处理后的 IgG 溶液分馏 Fc 段及 Fab 段。

2、IgG 洗脱曲线（pH3.5 & pH3.0）

　　•　洗脱范围已优化，可清晰地分馏提纯。

3、通过强碱清洗进行树脂循环

　　•　进行 300 次循环处理后（0.1M 氢氧化钠溶液 15 分钟），IgG 的结合容量的减少率仍低于20%，表明其循环性能较高。

使用 0.1 M 氢氧化钠溶液进行循环处理后的 IgG 结合活性曲线数据

循环处理后（0.1 M 氢氧化钠溶液 15 分钟）的IgG回收率及 Protein    A 配体的渗滤量的曲线数据

4、动态结合容量　曲线数据

　　•　在4-6分钟停留时间过程中，DBC 较高。

　　※　动态结合容量表示纯化样本在流动的状态下，回收程度的数值。动态结合容量较高的载体的流速较快，可回收大量目标分子，因此可以认为在短时间内有效纯化目标分子的优质载体。

　　　　　　　KANEKA KanCapA™的Dynamic Binding Capacity (DBC; 动态结合容量)　曲线数据

5、不同大小的树脂填充装柱的压力/流速绘图数据

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　填充依赖压力的计算方法是从整体压力减去系统压力。

6、KANEKA KanCapA™　于各种大小的柱的填充效果

　　•　KANEKA KanCapA™ 适用于各种大小的柱。

充填方法	L. D.(cm)	高度(mm)	培养皿/m	非对称性
流动填充	4.4	200	5710	1.14
轴向力填充	7	199	6063	1.06
流动填充	10	201	5276	1.18
流动填充	30	200	5208	1.17
轴向力填充	45	233	4712	1.09

以下是脉冲注入数据：

　　可溶性溶媒：1(v/v)% 丙酮

　　注入量：1% 柱容量

　　流速：60 cm/h

相关资料：

抗体纯化树脂说明书

抗体纯化树脂.pdf

参考文献

使用Kaneka KanCapA纯化单克隆抗体

使用该Kaneka KanCapA^TM从CHO细胞培养上清中纯化单克隆抗体