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ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
- 酸化ストレス関連試薬
- 蛍光色素
トータルROS検出キット
- トータルROSを高感度に検出
- 蛍光顕微鏡、プレートリーダー、フローサイトメーターで検出可能
-
製品コードR252 ROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-
| 容 量 | メーカー希望 小売価格 |
富士フイルム 和光純薬 |
|---|---|---|
| 100 tests | ￥18,000 | 340-09811 |
| 100 tests | ・Highly Sensitive DCFH-DA Dye ・loading Buffer (10x) |
10 ×l×1 1.0 ml×1 |
|---|
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マニュアル
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取扱説明書
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取扱説明書 English
技術情報
既存試薬との比較
活性酸素種に対する反応選択性
Highly Sensitive DCFH-DAは活性酸素種（ROS）に対して、DCFH-DAと同様の反応性を示します。
また、DCFH-DAと同様の蛍光特性（λex：505 nm、λem：525 nm）を持つため、同じ励起・蛍光波長での検出が可能です。
検出感度の比較
過酸化水素処理したHeLa細胞（1×104 cells/ml）をDCFH-DAまたはROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-で染色し、細胞内ROSの検出能を比較しました。 結果、いずれの検出装置においてもROS Assay Kit -Highly Sensitive DCFH-DA-ではDCFH-DAよりも高感度に細胞内のROSを検出できました。
①蛍光顕微鏡での検出
※Highly Sensitive DCFH-DAの観察条件で比較
|
|
<検出条件>
GFPフィルター(Ex. 450 – 490 nm / Em. 500 – 550 nm)
細胞種：HeLa細胞
②蛍光プレートリーダーでの検出
<検出条件>
Ex. 490 – 520 nm / Em. 510 – 540 nm
細胞種：HeLa細胞
③フローサイトメーターでの検出
<検出条件>
FITC laser gain：215 V
細胞種：HeLa細胞
参考文献
| 文献No. | 対象サンプル | 装置 | 引用（リンク） |
|---|---|---|---|
| 1) |
細胞 |
蛍光顕微鏡 | S. Kato, "Effects of platinum‑coexisting dopamine with X‑ray irradiation upon human glioblastoma cell proliferation", Hum. Cell, 2021, doi:10.1007/s13577-021-00591-3. |
| 2) |
細胞 |
蛍光顕微鏡 | K. Kanno, T. Sakaue, M. Hamaguchi, K. Namiguchi, D. Nanba, J. Aono, M. Kurata, J. Masumoto, S. Higashiyama, H. Izutani, "Hypoxic Culture Maintains Cell Growth of the Primary Human Valve Interstitial Cells with Stemness", Int. J. Mol. Sci. 2021, doi:10.3390/ijms221910534. |
| 3) |
細胞 |
フローサイトメーター | C. Fang, L. Wu, M. Zhao, T. Deng, J. Gu, X. Guo, C. Li, W. Li, X. Zeng, "Periodontitis Exacerbates Benign Prostatic Hyperplasia through Regulation of Oxidative Stress and Inflammation", Oxid. Med. Cell. Longevity, 2021, doi:10.1155/2021/2094665. |
| 4) | 菌 （Synechococcus elongatus PCC7942) |
プレートリーダー | M. Tamoi and S. Shigeoka, "CP12 Is Involved in Protection against High Light Intensity by Suppressing the ROS Generation in Synechococcus elongatus PCC7942", Plants, 2021, doi:10.3390/plants10071432. |
| 5) | 細胞 SW982(ヒト滑膜肉腫細胞株) |
蛍光顕微鏡 | S. Xia, Z. Ma, B. Wang, F. Gao, C. Yi, X. Zhou, S. Guo, L. Zhou, "In vitro anti-synovial sarcoma effect of diallyl trisulfide and mRNA profiling", Gene, 2021, doi:10.1016/j.gene.2021.146172. |
| 6) | 細胞 BRL3A(肝由来細胞株) |
蛍光顕微鏡 | Z. Luo, Q. Gao, H. Zhang, Y. Zhang, S. Zhou, J. Zhang, W. Xu, J. Xu, " Microbe-derived antioxidants attenuate cobalt chloride-induced mitochondrial function, autophagy and BNIP3-dependent mitophagy pathways in BRL3A cells", 2022, doi:10.1016/j.ecoenv.2022.113219. |
よくある質問
-
Q
1キットで測定可能なサンプル数を教えてください。
-
A
測定可能なサンプル数は以下をご参考ください。
・ 96-well plate：1枚
・ ibidi 8-well plate：6枚
・ 35 mm dish：5枚
・ 6-well plate：5ウェル
-
Q
ポジティブコントロールになる実験例はありますか？
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A
取扱説明書に過酸化水素処理をしたHeLa細胞による検出例を掲載しております。
-
Q
Highly Sensitive DCFH-DA working solutionはLoading Buffer以外でも調製できますか？
-
A
染色時の細胞へのダメージを軽減するため付属のLoading Bufferを推奨しますが、Hanks’ HEPESやHBSSでも調製できます。
培地で調製する場合は無血清培地をご使用ください。
-
Q
染色後の洗浄には、HBSSの代わりにPBSを使用できますか？
-
A
細胞へのダメージを軽減するためHBSSを推奨しております。
HBSSがお手元にない場合は培地での洗浄をお勧めします。
-
Q
蛍光顕微鏡でイメージングする際の注意点はありますか？
-
A
色素はROSと反応し、酸化することで蛍光を発します。
励起光を照射し続けると色素が酸化されることでバックグラウンドが上昇するため、イメージング画像を取得する際は明視野でピントを調整後に蛍光画像を取得してください。
-
Q
フローサイトメーターで使用する際、細胞を剥がす操作はどの段階で行えば良いですか？
-
A
取扱説明書 操作6の後(薬剤処理しHBSSで洗浄した後)に細胞を剥がす操作(トリプシン処理)を行ってください。
トリプシン処理後は、培地を添加し反応を止めた後、遠心しHBSSで１回洗浄後、
さらに遠心しHBSSで細胞を懸濁して測定サンプルとしてください。
取扱条件
| 1.危険物第4類 第3石油類 危険等級Ⅲ, 2.火気厳禁 3.保存方法：冷凍 | |
| 危険・有害 シンボルマーク |
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|---|---|
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